改良红细胞葡糖-6-磷酸脱氢酶活性直接测定法

建立一个在全自动生化分析仪上 ,去除 6 磷酸葡糖酸脱氢酶 (6PGD)对结果的影响且能准确、快速检测葡糖 6 磷酸脱氢酶 (G6PD)活性的定量方法 .采用自动扣减样本空白的速率法对 10 7例正常人 ,31例G6PD明显缺陷病人 (经高铁血红蛋白还原率法筛选 )血样本进行测定 .表明灵敏度达 0 2 7U/ gHb .批内CV =5 6 % ;批间CV =9 4% .线性范围在 0～ 15U/ gHb .与常规的高铁血红蛋白还原率法结果比较 ,两法相关系数 (r) =0 86 3.速率法特异性较好 ,有结果稳定、准确、操作简便、检测快速等优点 。

全自动直接定量法与定量比值法检测红细胞葡糖-6-磷酸脱氢酶活性的比较

目的:与定量比值法比较,探讨全自动直接定量法检测红细胞葡糖-6-磷酸脱氢酶(G-6-PD)活性的可行性。方法:同时采用定量比值法(即硝基四氮唑蓝定量法)和全自动直接定量法,检测219例肝素抗凝静脉血标本的红细胞G-6-PD活性。结果:定量比值法检测G-6-PD缺乏的阳性率为9.13%,全自动直接定量法检测的G-6-PD缺乏阳性率为9.58%,两种方法检测结果无显著性差异(P>0.05)。结论:定量比值法简单易行,适用于卫生条件有限的基层医疗单位;全自动直接定量法快速准确,是一种可批量检测的理想筛选方法。

用液-固萃取体系从啤酒酵母粗提液中分离纯化葡糖-6-磷酸脱氢酶(英文)

在一定条件下，吐温８０的磷酸盐水溶液可分成聚合物固相和盐水相．酶、蛋白质等生物活性物质可在两相间进行分配．实验结果表明，吐温８０浓度和溶液ｐＨ的变化，以及提高盐浓度均会改变生物酶及蛋白质在两相中的分配．选择合适的条件，酶和蛋白质可获得分离，酶活力也得到纯化．研究了吐温８０浓度、盐浓度和溶液ｐＨ对啤酒酵母粗提液中葡糖－６－磷酸脱氢酶分配的影响．结果表明，选择吐温８０浓度１５％，总盐浓度３．０ｇ（Ｋ２ＨＰＯ４∶ＫＨ２ＰＯ４为５∶１），可得到好的分离结果．此时，一次纯化倍数１．７．酶活平均收得率为８９．０％．

血液回收对红细胞ATP含量及葡萄糖6-磷酸脱氢酶活性的影响

目的探讨术中自体血液回收对红细胞ATP含量及葡萄糖6磷酸脱氢酶(G6PD)活性的影响。方法选择心血管外科术中出血量>600ml患者50名,用血液回收机行自体血液回收,取患者术野及回收的红细胞各6ml,另取50份库存2周的异体红细胞悬液6ml,分别检测红细胞ATP含量及G6PD活性。结果回收组和库存组ATP含量、G6PD活性与术野组相比均明显下降(P<0.01),但仍在正常值范围;回收组ATP含量及G6PD活性与库存组相比,差异无显著性。结论血液回收处理可使红细胞ATP含量减少,使G6PD活性降低,但未达影响红细胞功能的程度,回收红细胞与库存红细胞相比差别不明显。

葡糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症孕前优生咨询服务状况调查

目的:了解深圳市坪山新区葡糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症孕前优生指导情况,对其孕前优生咨询服务提出优化建议。方法:整理孕前优生检查数据,采用电话访谈方式对G6PD活性酶筛查低下者进行相关疾病优生问题调查。结果:在1150例孕前优生检查对象中,共有45例G6PD活性酶筛查低下。电话访谈发现,获取检查结果的占48.89%;从孕前检查医生处获知G6PD缺乏症是遗传病的占22.73%,获得疾病健康教育资料的占2.22%;了解疾病具有遗传性的占2.22%,想了解病因的占6.67%。22.73%的获取检查结果者在得知结果后心情恐慌、主动联系家人询问家族史。结论:G6PD缺乏症孕前优生指导服务不足,服务对象疾病知识匮乏,应细化服务指南和流程,深入开展针对该病的孕前优生咨询指导服务。

二氢硫辛酰转乙酰基酶通过乙酰化磷酸葡糖酸脱氢酶促进核酸合成

丙酮酸脱氢酶复合物(pyruvate dehydrogenase complex,PDC)是位于线粒体内的多酶复合物,催化丙酮酸不可逆地氧化脱羧转为乙酰辅酶A,二氢硫辛酰转乙酰基酶(dihydrolipoyl acetyltransferase,DLAT)是PDC的1个亚基。PDC在细胞线粒体呼吸中发挥关键作用。但是DLAT在核酸合成中的作用仍不清楚。在本研究中,首先利用GEO数据库、Oncomine数据库和人类蛋白质图谱数据库分析发现,DLAT在肺癌组织中的表达明显高于癌旁组织(P=0.0002),并且高表达DLAT的病人有较短的生存期(HR=1.47,logrank P=4e-09)。因此推测,DLAT在肿瘤生长中发挥关键作用。进而本文构建了敲低DLAT的肺癌细胞系,并用免疫印迹结果验证了DLAT敲低效果。进一步的研究发现,敲低DLAT将降低戊糖磷酸途径第3个酶磷酸葡糖酸脱氢酶(6-phosphogluconate dehydrogenase,6PGD)的乙酰化水平,进而降低6PGD酶活性,从而导致核酸合成受阻(P<0.01),最终抑制肺癌细胞增殖(P<0.01)。机制研究发现,DLAT通过乙酰化6PGD而使其酶活性增强,进而提高核酸合成,从而达到促进肺癌细胞增殖的作用。综上所述,本研究为DLAT作为潜在的靶点,为药物开发和临床肺癌的治疗提供了新的思路。

中国人红细胞葡糖6-磷酸脱氢酶变异型的研究Ⅳ.Gd(-)高鹤型[Gd(-)Gaohe]伴阵发性睡眠性血红蛋白尿

本文报告一种新的G6pD变异型。其特点是酶活性严重缺乏(相当于正常1%),电泳慢速,G6P米氏常数降低,底物(脱氧G6P,脱氨NADP及半乳糖6-磷酸)利用率均正常,热稳定性也正常。命名为Gd(-)高鹤型[Gd(-)Gaohe]。同时鉴定了患者一个弟弟的G6PD类型,结果相似。鉴于其弟身体健康而患者有不明诱因的反复溶血发作,并伴有白细胞和血小板减少,皮下出血,最后通过Ham试验及糖水试验证实患者伴有PNH。

血清红细胞葡糖6-磷酸脱氢酶联合超声检查对肝内胆汁淤积孕妇不良妊娠结局预测价值的研究

目的探究血清红细胞葡糖6-磷酸脱氢酶(G6PD)联合超声检查对肝内胆汁淤积症(ICP)孕妇不良妊娠结局的预测价值。方法选取2017年4月至2019年10月株洲市中心医院确诊的118例ICP孕妇作为研究对象。根据妊娠结局分妊娠结局良好组(n=96)和不良妊娠结局组(n=22)。超声检查脐带动脉血流动力学指标;全自动生化分析仪检测血清中G6PD活性;绘制受试者工作特性(ROC)曲线分析并比较超声S/D、血清G6PD、超声S/D联合血清G6PD对ICP孕妇不良妊娠结局的预测价值。结果118例ICP孕妇中22例(43例次)发生不良妊娠结局,发生率为18.64%,其中胎儿窘迫7例次、流产2例次、早产11例次、新生儿窒息12例次、低体重儿8例次、围产儿死亡3例次。与妊娠结局良好组比较,不良妊娠结局组超声S/D水平升高,血清中G6PD活性降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线显示,超声S/D、血清G6PD预测ICP孕妇不良妊娠结局的ROC曲线下面积分别为0.717、0.816,截断值为5.29U/gHb、11.14U/gHb,灵敏度为81.82%、77.27%,特异度为55.21%、71.88%;超声S/D联合血清G6PD预测ICP孕妇不良妊娠结局的ROC曲线下面积为0.885,灵敏度为90.91%,特异度为76.04%。与超声S/D相比,血清G6PD、超声S/D联合血清G6PD的特异度更高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论血清G6PD联合超声检查ICP孕妇不良妊娠结局的效果优于单独超声检查,可弥补超声检查特异度低的劣势,在临床上具有一定参考价值。

贵州省荔波县瑶族葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺陷症基因突变研究

目的了解贵州省荔波县瑶族葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺陷症的发生率、基因突变类型及特点。方法对贵州省荔波县瑶族586人采用四氮唑蓝定性法进行G6PD缺陷症初筛、G6PD／6PGD比值法验证,再经自然引物及错配引物介导的聚合酶链反应／限制性酶切分析法检测中国人常见的9种基因突变型。结果筛出G6PD缺陷阳性样本45例,基因频率为7．68％,其中检出G1388A突变15例、G1376T突变7例。结论贵州省荔波县瑶族是G6PD缺陷症的高发区,该地该民族常见突变型是中国人常见的G1376T、G1388A突变型。本调查为了解贵州省少数民族G6PD缺陷症的分布特征提供了原始数据。

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活性检测标本的相关探讨

目的探讨不同抗凝剂、不同保存温度等标本相关因素与全血葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)活性检测的相关性,确定G6PD活性检测的标本最适条件。方法采集血液标本20例、分别用枸橼酸葡萄糖(ACD)、枸橼酸钠和乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K_2)3种抗凝剂抗凝,测定其G6PD活性及G6PD活性浓度;同一例血标本用ACD、枸橼酸钠和EDTA-K_2抗凝剂分别抗凝,分成2～8℃保存组及常温保存组,分别在第1～34天测定其G6PD活性浓度。结果 ACD、枸橼酸钠和EDTA-K_2 3种不同抗凝剂抗凝全血标本测得的G6PD活性差异有统计学意义(P<0.05),但G6PD酶活性浓度的检测结果差异无统计学意义(P>0.05);3种抗凝剂的标本在2～8℃保存条件下34 d内测得的G6PD活性浓度差异无统计学意义(P>0.05),标本在常温保存条件下,34 d内测得的G6PD活性浓度检测结果差异有统计学意义(P<0.05)。结论 ACD、枸橼酸钠和EDTA-K_2 3种抗凝剂抗凝全血标本用于G6PD活性浓度检测时,其检验结果具有良好的一致性;在2～8℃保存条件下,3种抗凝剂抗凝全血标本用于G6PD活性浓度检测可保存34 d。

贵州省从江县侗族人群葡萄糖-6-磷酸脱氢酶基因突变型的检测

目的了解贵州省从江县侗族葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(Glucose-6-phosphate dehydrogenase,G6PD) 缺乏症的发生率、基因突变类型及特点。方法对贵州省从江县侗族524人采用四氮唑蓝定性法进行G6PD缺乏症初筛、G6PD／6PGD比值法验证．再经自然引物及错配引物介导的聚合酶链反应／限制性酶切分析法检测中国人常见的9种基因突变型,对于未定型采用变性梯度凝胶电泳法(DGGE)检查外显子2、8、9、12基因突变情况。结果 G6PD缺乏症34例,检出率为6．49％,其中检出G1388A突变4例、C592T突变18例。未定型12例经DGGE检测外显子突变情况,未发现突变,有待于进一步对其余外显子进行研究。结论贵州省从江侗族是G6PD缺乏症的高发区。592 C→T突变型为该地该民族常见突变型,而不是中国人常见的G1376T、G1388A或A95G突变型。此次基因突变型调查为了解贵州省少数民族G6PD缺乏症的分布特征提供了原始数据。

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活性浓度检测法的初步研究

目的建立一种简单、快速、可自动检测葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G-6-PD）在血红蛋白（Hb）中活性的方法。方法用自配的检测试剂，在全自动生化分析仪上检测抗凝血标本的G-6-PD活性，同时检测Hb浓度，并计算出G-6-PD在Hb中的活性浓度（U／gHb），对同一标本用简易快速高铁血红蛋白还原试验、G-6-P／6-GP比值法进行对比试验。结果G-6-PD活性浓度的参考范围为≥5．0U／gHb，G-6-PD活性浓度检测法与G-6-P／6-GP比值法及简易快速高铁血红蛋白还原试验检测法的检测结果具有高度一致性。G-6-PD活性浓度检测法可用不洗涤红细胞，其检测试剂及检测方法具有良好的重复性。制备溶血液时吸样量从7～13μl的G-6-PD活性浓度检测结果差异无统计学意义（P〉0．05）。直接用酸性枸橼酸右旋糖（ACD）抗凝全血比用压积红细胞检测G-6-PD活性浓度的结果高。结论G-6-PD活性浓度检测法是一种简单、快速、重复性好、操作简便的检测方法。

顺铂对HeLa细胞6-磷酸葡萄糖脱氢酶表达和活性的影响

目的:探讨化疗药物顺铂在体外对HeLa细胞6-磷酸葡萄糖脱氢酶(G6PD) mRNA表达和活性的影响。方法:5mg/L顺铂作用于HeLa细胞一段时间后,MTT法检测细胞的生长抑制情况。Beutler改良法测定胞内还原型谷胱甘肽的含量,速率法测定G6PD活性,采用实时荧光定量RT-PCR观察G6PD mRNA的表达水平。结果:顺铂在体外能明显抑制HeLa细胞的生长。顺铂作用4h和24h后,G6PD mRNA的表达水平增强,且G6PD活性高于未加药对照组(P<0.05)。4h实验组GSH含量低于对照组。结论:顺铂能诱导HeLa细胞G6PD mRNA表达增加,G6PD活性增强。

葡萄糖脱氢酶融合表达载体的构建

目的为方便葡萄糖脱氢酶的纯化,构建葡萄糖脱氢酶融合表达载体。方法通过聚合酶链反应(PCR)从枯草杆菌基因组中扩增葡萄糖脱氢酶基因,与源序列比较分析后连接到融合表达载体pET22b,导入JM109诱导表达,测定葡萄糖脱氢酶酶液比活力。结果构建的葡萄糖脱氢酶融合表达载体中目的基因序列与枯草杆菌来源的该基因序列相同,且粗提酶液比活力高达375 U/mg。结论运用分子生物学技术获得葡萄糖脱氢酶基因,成功构建了葡萄糖脱氢酶的融合表达载体,为酶的后续纯化工作提供了条件。

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症患儿烧伤12例治疗体会

小儿烧伤约占总烧伤发生率的1/3,致伤原因多为生活烧伤。由于小儿生长发育过程中解剖、生理未臻成熟,伤后对疾病的耐受性较差,特别是葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G-6-PD）缺乏的患儿,因并发溶血易致严重贫血、心律失常、循环衰竭及肾功能衰竭等，且创面外用药物的选择也有所受限，病情较为特殊、严重，治疗也更为繁杂。

贵州省三都水族葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症基因频率调查

目的: 调查贵州省三都水族葡萄糖-6 -磷酸脱氢酶(glucose-6 -phosphatedehydrogenase,G6PD)缺乏症的基因频率。方法:随机选取589名三都县当地水族男性居民,先用硝基四氮唑蓝纸片法进行筛查,再用G6PD/6PGD定量法验证。结果: 589名三都县水族男性居民中检出G6PD缺乏症68例,G6PD缺乏症的基因频率为0. 115 4。结论:贵州省三都水族居民G6PD缺乏症有着很高的基因频率,此次调查为了解贵州省少数民族G6PD缺乏症的分布特征以及当地水族居民G6PD缺乏症的防治提供了理论依据。

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶冻干质控物的研制与评价

目的：研制均一性、稳定性良好、适用于定量检测的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6 PD）冻干质控物,为广西 G6 PD缺乏症筛查和确诊提供质量保证。方法使用健康献血者抗凝全血做基质,按不同比例加入小剂量 G6 PD纯分析物,制备正常、缺乏两个不同水平G6PD全血质控物。分装后使用冷冻干燥。参照CNAS-GL03《能力验证样品均匀性和稳定性评价指南》要求,对复溶后质控物进行均匀性、稳定性评价。用国内不同品牌的定量试剂盒做适用性评价。与进口质控品相比较应用于室内质量控制。结果均匀性检验结果显示,样品分装、冻干、复溶后 G6 PD检测值差异均无统计学意义（P〉0.05）。在预期观察时间内,2~8℃未开瓶质控物可稳定1年,开瓶可稳定3 d。用于不同定量试剂盒检测,定性结果符合率一致,定量结果具有可比性。用于室内质量控制,朗道质控品和自制质控物在正常、缺乏两个不同水平的变异系数（CV）分别是2.60%、5.92%和2.99%、6.67%。结论自制 G6PD冻干质控物有良好的均匀性、稳定性,适用于定量检测试剂,并能应用于室内质量控制,满足广西 G6 PD筛查实验室室间质量评价需求。

甲基营养菌MP688葡萄糖脱氢酶基因分离鉴定及性质研究

目的:鉴定甲基营养菌MP688中的葡萄糖脱氢酶基因。方法:对甲基营养菌MP688基因组序列进行比对和分析,找到与已知细菌葡萄糖脱氢酶同源性最高的基因序列mpq_2164,且该基因所编码蛋白经分析具有跨膜结构域。设计引物扩增mpq_2164和缺失跨膜区域序列的s-mpq_2164,将PCR产物克隆到表达载体pET-15b上,在大肠杆菌BL21中完成异源重组表达,然后通过组氨酸标签镍柱亲和层析纯化,采用DCIP法测定葡萄糖脱氢酶的活力。结果:分离了甲基营养菌MP688中的葡糖糖脱氢酶基因,并实现了s-mpq_2164的高效异源重组表达;MPQ_2164的氨基酸序列与已知的葡萄糖脱氢酶相似性很低,但酶活测定结果表明S-MPQ_2164具有很高的葡糖糖脱氢酶活性。结论:MPQ_2164是一个依赖于吡咯喹啉醌的葡萄糖脱氢酶,去掉跨膜结构域有利于该蛋白的异源表达。

新生儿葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症临床特点分析

目的探讨新生儿红细胞葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G-6-PD)缺乏症的临床特点。方法通过医院管理软件查询符合G-6-PD缺乏症的足月儿临床资料(包括性别、胎龄、出生体质量、入院日龄、出生方式、血清总胆红素,有无胆红素脑病,血红蛋白、G-6-PD值,有无药物使用史、感染、异常产科史和并发症等),对2014年1月至2015年8月在南华大学附属郴州市第一人民医院新生儿科住院且确诊为G-6-PD缺乏症的67例足月患儿的临床资料进行回顾性分析。结果男女性患儿G-6-PD活性比较,男性低于女性,差异有统计学意义(P=0.000);男女性患儿血清总胆红素比较,差异无统计学意义(P=0.829)。G-6-PD活性与血清总胆红素、G-6-PD活性与血红蛋白、血清总胆红素与血红蛋白均无相关性(r=-0.019、-0.025、0.112,P>0.05),血清总胆红素与感染呈正相关(r=0.246,P=0.045),血清总胆红素与异常产科史呈正相关(r=0.253,P=0.039),血红蛋白与感染、异常产科史均无相关性(r=0.246、0.253,P>0.05)。结论男性患儿G-6-PD活性明显低于女性,血清总胆红素水平与性别无相关性;G-6-PD缺乏症患儿血清总胆红素水平高,胆红素脑病发生率高,贫血多为轻、中度;感染、异常产科史对G-6-PD缺乏症患儿的影响主要表现为黄疸的严重程度,G-6-PD活性不能直接影响黄疸及贫血的程度。