异味奶粉中热葡糖苷酶地芽孢杆菌的分离鉴定及耐受性研究

为探究异味奶粉是否存在耐热芽孢杆菌污染,本实验通过对异味奶粉进行100℃,10min热处理,并结合微生物分离纯化和形态观察共筛选得到6株耐热芽孢杆菌,经生化鉴定均为热葡糖苷酶地芽孢杆菌,并对其进行耐热性和耐酸性研究。结果表明:经118℃/10min热处理后除分离株HP3仍有芽孢残留,其余菌株均被100%杀灭;各分离株在pH≥4.5时均可良好生长,而在pH≤3.5时大部分菌株的生长都受到抑制,仅分离株HP3在pH为2.5时仍可缓慢生长。以耐受性最强的分离株HP3为实验对象,采用汽化过氧化氢消毒装置可完全杀灭空间内不同点位的钢片上接种的热葡糖苷酶地芽孢杆菌,杀菌效率高达6lg。实验为有效防控奶粉生产车间中热葡糖苷酶地芽孢杆菌的污染提供参考依据。

不育症患者精液中性α-葡糖苷酶、缺氧诱导因子-1α水平检测及临床意义

目的探究不育症患者精液中性α-葡糖苷酶(NAG)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的水平及其临床意义。方法选取2022年4月至2023年4月金华市人民医院收治的200例不育症患者作为研究对象,设为研究组,并依据精液参数分为四个亚组。选择同期体检且有生育史的100例健康男性设为对照组。检测各组性激素、精液NAG、HIF-1α水平,采用Pearson相关性分析精液NAG、HIF-1α与精液参数、性激素的关系,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析精液NAG、HIF-1α对不育症的诊断效能。结果研究组精液NAG水平显著低于对照组,HIF-1α水平显著高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。少精子组、少弱精子组精液NAG、血清睾酮(T)水平均显著低于正常组、弱精子组,且弱精子组低于正常组(P<0.05);少精子组、少弱精子组精液HIF-1α、血清卵泡刺激素(FSH)水平均显著高于正常组、弱精子组,且弱精子组高于正常组(P<0.05)。研究组精液NAG与HIF-1α、血清FSH水平呈负相关(P<0.05),与精子浓度、前向运动精子百分率(PR)、T水平呈正相关(P<0.05);精液HIF-1α与PR、血清T水平呈负相关(P<0.05)。精液NAG、HIF-1α诊断不育症的曲线下面积分别为0.885、0.807,两者联合检测为0.927。结论不育症患者精液NAG低表达,HIF-1α高表达,与相关精液参数、性激素存在一定的相关性,精液NAG、HIF-1α及联合检测诊断不育症有较好的临床价值。

大鼠精索静脉曲张后附睾上皮细胞凋亡及管腔α-1,4-葡糖苷酶、唾液酸含量观察

目的:探讨大鼠左侧精索静脉曲张后同侧附睾上皮细胞凋亡与附睾管腔中-α1,4-葡糖苷酶和唾液酸含量改变的关系及意义。方法:16只雄性SD大鼠建立左侧精索静脉曲张模型,分为对照组和实验组,每组8只。缺口末端转移酶标记技术检测附睾上皮细胞凋亡;硝基酚法和5-甲基苯二酚法分别检测附睾管腔液-α1,4-葡糖苷酶和唾液酸含量。结果:大鼠左侧精索静脉曲张模型建立后的第7 d,实验组同侧附睾上皮细胞凋亡指数显著高于对照组(P<0.001);实验组附睾管腔液-α1,4-葡糖苷酶、唾液酸含量显著低于对照组(P<0.05,P<0.005)。结论:大鼠左侧精索静脉曲张可导致同侧附睾上皮细胞凋亡增加,进而影响该侧附睾上皮细胞的合成和分泌功能。

丹红通精方合针挑疗法对慢性附睾炎不育症精液质量、精浆中性α-葡糖苷酶的影响

目的观察中药丹红通精方合针挑疗法对慢性附睾炎不育症患者精液质量、精浆中性α-葡糖苷酶活性的影响及治疗前后附睾影像学的变化。方法采用随机方法将192例慢性附睾炎不育症患者分为4组,实验组采用中药丹红通精方合针挑疗法,对照组分为3组,分别为纯中药组、纯针挑组、西药组,90d后观察其精液相关参数及精浆中性α-葡糖苷酶活性的变化情况,采用彩超观察附睾治疗前后形态学特征、血流动力学的改变、附睾内血流分布情况。结果实验组及各对照组治疗前后精液质量及精浆中性α-葡糖苷酶活性比较,差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。实验组的附睾彩超指标治疗前后比较,差异有统计学意义(P<0.01),治疗后实验组与对照1、2组比较,差异有统计学意义(P<0.05),与对照3组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论中药丹红通精方合针挑疗法能明显提高慢性附睾炎不育症患者的精液质量和精浆中性α-葡糖苷酶活性,明显改善附睾的炎症反应。

长期施肥土壤β-葡糖苷酶动力学特性研究

以长期施肥的黑土和棕壤为供试对象,对土壤β-葡糖苷酶动力学特性进行研究.结果表明,土壤β-葡糖苷酶的酶促反应符合一级动力学模型.黑土有机肥处理对土壤β-葡糖苷酶动力学参数影响较大,Km和Vmax值均高于单施化肥和对照处理;与对照相比,化肥处理影响较小.棕壤施用化肥后,Km和Vmax值与其他处理相比均减小,有机肥处理后Vmax和Vmax/Km值增大.2种土壤各施肥处理β-葡糖苷酶的Vmax值与土壤有机质、全氮含量均呈显著正相关关系,并对施肥处理的响应较敏感.

特发性少弱精患者精浆α-葡糖苷酶、锌与精子形态学参数相关性分析

目的分析特发性少弱精患者精浆α-葡糖苷酶活性、锌含量与精子形态学相关参数的相关性。方法 152例特发性少弱精患者根据形态学分析分成5组,采用计算机辅助精子分析(CASA)、Diff-Quik染色法分析精液质量、精子形态,利用速率法、PAN法及全自动生化分析仪检测精浆α-葡糖苷酶活性和锌水平。结果正常精子形态百分率在3%~4%、2%~3%、1%~2%、0%~1%4组与正常精子形态百分率≥4%比较,精浆α-葡糖苷酶活性均有显著性差异(Z分别为-2.199、-2.685、-2.827、-3.358,P<0.05),其余各组之间比较差异均无统计学意义(P>0.05);精浆锌水平各组比较差异无统计学意义(P>0.05)。精浆α-葡糖苷酶活性与正常形态精子百分率呈正相关(P<0.05),与精子畸形指数(SDI)呈负相关(P<0.05),与精子头部、颈部和中段、尾部、过量残留胞浆、多重异常指数(MAI)、畸形精子指数(TZI)无明显相关性(P>0.05);精浆锌水平与各项精子形态学参数均无相关性(P>0.05)。结论正常精子形态百分率异常的特发性少弱精患者精浆α-葡糖苷酶活性明显低于精子形态正常的患者;精浆α-葡糖苷酶活性与正常形态精子百分率呈正相关,与SDI呈负相关,可能有利于体外受精。

低活性β-葡糖苷酶酵母菌株的筛选及其在黑莓果酒发酵中的应用

从本实验室保存的23株来源于自然发酵果酒的酵母中筛选到1株β-葡糖苷酶活性较低、生长快且不产膜的酵母FY4,经18S r DNA序列分析,该菌株鉴定为酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)。利用该菌株发酵黑莓果酒,通过单因素和正交试验考察了发酵温度、果胶酶用量、加糖量和接种量对黑莓果酒中花色苷含量的影响。结果表明,当酵母FY4接种量为2%,发酵温度为32℃,加糖量为14%,果胶酶添加量为0.22%时,发酵后黑莓果酒中的花色苷含量达到(406.31±5.64)mg/L,是相同条件下利用商业酿酒酵母PHYTHM.nsac发酵的黑莓果酒中花色苷含量的1.53倍。

精浆α葡糖苷酶全自动检测方法的建立及评价

目的：建立精浆α葡糖苷酶活性全自动检测方法并对其准确性、重复性和线性范围等进行评价。方法：利用速率法检测精浆α葡糖苷酶活性,并在全自动生化分析仪上建立检测参数,并评估该方法的试剂空白吸光度、准确性、重复性和线性范围。结果：试剂空白吸光度平均为0.002 14,空白吸光度变化率（△A/min）平均为0.015 26。3份高、中、低α葡糖苷酶活性的精浆样本重复测定10次的CV值分别为2.52%、0.36%和0.76%。采用比对试验的方法来评价准确性,40份精浆标本每个浓度点的相对偏差范围为-5.52%~7.54%,均低于15%的要求。精浆α葡糖苷酶活性在76~647 U/L范围时,具有良好的线性关系（r〉0.99）。结论：本研究建立的全自动精浆α葡糖苷酶活性检测法有较低的试剂空白,重复性和准确性较好,且有较宽的线性范围。该法操作简单、快速,精浆样本无需稀释,适合临床上大批量样本的检测筛查,大大节省了人力和试剂成本。

两种气候条件下梯度有机质含量农田黑土纤维素酶和β-葡糖苷酶活性研究

利用空间移位的方法将5种有机质含量的农田黑土置于中温带大陆性季风气候(MAT4.5)和寒温带大陆性季风气候(MAT1.5)条件下,探究了气候-有机质-施肥对土壤纤维素酶活性和β-葡糖苷酶活性的影响。结果表明:在MAT4.5条件下农田黑土中纤维素酶活性要高于MAT1.5;随有机质含量升高,纤维素酶活性在MAT4.5条件下呈逐渐降低的趋势;施肥能明显提高纤维素酶活性,且在MAT4.5条件下增加幅度较大,而在MAT1.5条件下却呈现出“U”型变化趋势。MAT4.5条件下β-葡糖苷酶活性略高于MAT1.5条件下的活性,其活性均随着土壤有机质含量升高而增强;施肥能提高各有机质含量农田黑土中β-葡糖苷酶活性,在MAT1.5条件下提升幅度较大。方差分析表明气候-有机质-施肥的主效应对土壤纤维素酶与β-葡糖苷酶活性均有显著影响,但是交互作用只对纤维素酶整体活性有显著影响。

半自动生化分析仪检测精浆α葡糖苷酶活性的研究

目的:建立半自动生化分析仪检测精浆α葡糖苷酶活性的方法。方法:同时用半自动生化分析仪法(速率法)和手工葡萄糖氧化酶法检测51例精液常规分析参数均正常的男性精浆α葡糖苷酶活性,计算批内和批间变异系数以及正常参考值范围,并分析两种方法检测结果的相关性。结果:2例α葡糖苷酶活性不同的精浆样本用半自动生化分析仪法检测的批内变异系数分别为12.63%和9.13%,批间变异系数分别为10.67%和13.49%,正常参考值范围为102.28～555.08U/L。半自动生化分析仪法和手工法检测的精浆α葡糖苷酶活性呈显著正相关(r=0.792,P<0.01)。结论:半自动生化分析仪检测精浆α葡糖苷酶活性法简便、省时,节省试剂,结果稳定可靠。建议在男科实验室推广使用半自动生化分析仪法检测精浆α葡糖苷酶活性。

双侧附睾肿块伴不育患者α-葡糖苷酶结果分析

目的:通过测定不育患者精浆α-葡糖苷酶含量与双侧附睾肿块大小和精子密度的关系,探讨α-葡糖苷酶在附睾梗阻性无精子症诊断中的价值。方法:根据精子密度将76例不育患者分为正常精子密度组(n=27),少精子症组(n=21),梗阻性无精子症组(n=28),分别测定不育患者和正常对照人群的性激素、精浆α-葡糖苷酶及WBC染色,各组分别行阴囊触诊和阴囊B超检查双侧附睾肿块的大小。结果:梗阻性无精子症组精浆α-葡糖苷酶含量(22.01±6.10)U/m l与各组比较差异有显著性(P<0.05),且精浆α-葡糖苷酶含量和双侧附睾肿块体积(r=-0.417,P<0.05)与白细胞(r=-0.342,P<0.05)呈负相关。结论:α-葡糖苷酶在判断附睾肿块导致的梗阻性无精子症中有一定的诊断价值。

α-葡糖苷酶抑制剂诱导的结肠囊样积气症1例

病例：患者男,67岁,因健康体检于2014年3月11日在我院行结肠镜检查,平素略感腹胀1年余,程度不严重,粪便略干燥,2~3 d/次,无明显腹痛,无便血,无恶心呕吐,体重无变化。查体腹部平坦,未见肠型,腹软,全腹无压痛,肠鸣音4次/min。既往患者伴有2型糖尿病史2年,口服阿卡波糖50 mg tid治疗,无慢性支气管炎病史,无高血压冠心病病史,无自身免疫性疾病。

联合应用消痈散结汤与盐酸左氧氟沙星注射液治疗附睾炎患者效果及对精浆中性α-葡糖苷酶和精液质量的影响

目的观察联合应用消痈散结汤与盐酸左氧氟沙星注射液治疗附睾炎患者的效果及对精浆中性α-葡糖苷酶和精液质量的影响。方法选取航天中心医院诊治的130例附睾炎患者为研究对象,按照随机数字表法将其平均分为治疗组和对照组,每组65例患者。两组患者均给予基础干预,其后,对照组患者采用盐酸左氧氟沙星注射液治疗,治疗组患者在对照组基础上联合消痈散结汤治疗。观察两组患者临床症状评分、附睾形态、临床疗效,检测精浆中性α-葡糖苷酶和精液质量。结果治疗后,两组患者疼痛评分、生活质量评分均显著低于治疗前(均P<0.05),且治疗组患者显著低于对照组患者(P<0.05);治疗后,两组患者尾厚、头厚、体厚显著低于治疗前患者(P<0.05),且治疗组患者显著低于对照组患者(P<0.05);治疗组患者总有效率(93.9%)显著高于对照组患者(81.5%)(P<0.05)。治疗后,两组患者a级精子、精子活动率、精子密度、a+b级精子均显著高于治疗前(均P<0.05),且治疗组患者显著高于对照组患者(P<0.05)。治疗后,两组患者精浆中性α-葡糖苷酶水平显著高于治疗前患者(P<0.05),且治疗组患者显著高于对照组患者(P<0.05)。结论采用消痈散结汤联合盐酸左氧氟沙星注射液可以有效减轻附睾炎患者疼痛,提高生活质量,同时可以有效提高附睾炎患者精浆中性α-葡糖苷酶和精液质量。

生精2号方对少弱精子症精浆α-葡糖苷酶、锌及精子形态的影响

目的分析经验方生精2号对少弱精子症患者精浆α-葡糖苷酶、锌及精子形态的影响。方法 52例少弱精子症患者经生精2号方治疗3个月,治疗前后均以计算机辅助精子分析系统、迪夫快速染色法(DiffQuik)检测精液质量及精子形态,采用全自动生化分析仪分析精浆α-葡糖苷酶活性(速率法)和锌含量[1-(2-吡啶偶氮)-2-萘酚(PAN)法]。结果治疗后与治疗前精浆α-葡糖苷酶活性、正常形态精子百分率经非参数检验比较差异有统计学意义(Z分别为-3.127、-6.924,P<0.05),精浆锌含量比较差异无统计学意义(Z为-1.710,P>0.05)。治疗后与治疗前精子头部缺陷百分率经非参数检验比较差异有统计学意义(Z为-3.530,P<0.05),精子颈和中段缺陷百分率、胞浆小滴百分率、尾部缺陷百分率比较差异均无统计学意义(Z分别为-0.432、-1.501、-0.579,P>0.05)。结论经验方生精2号方对少弱精子症患者精浆α-葡糖苷酶活性及精子形态有一定的改善作用,对精子头部改善作用较明显。

黑曲霉Aspergillus niger S菌株所产β-葡糖苷酶的纯化和酶学性质

利用黑曲霉Aspergillus niger S菌株,通过液体发酵的方法,得到了一种可同时高效水解大豆异黄酮糖苷成大豆异黄酮,水解白藜芦醇苷成白藜芦醇的糖基水解酶.该酶经硫酸铵分级沉淀、离子交换层析及分子排阻色谱纯化得单一条带,经SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳测得该酶的表观分子量约为165ku①,比通常所报道的传统β-葡糖苷酶都大,该酶的最适反应温度为50℃;最适pH值为5～10.

近暗散白蚁β-葡糖苷酶基因RpBg7的克隆及其在毕赤酵母中的表达

【目的】白蚁是自然界中利用木质纤维素能力很强的生物,是纤维素酶的天然资源库。本研究旨在挖掘新来源的纤维素酶基因,为生物质能源的高效利用提供新的天然酶。【方法】根据前期蛋白质组测序的结果,利用PCR结合RACE克隆了近暗散白蚁Reticulitermes perilucifugusβ-葡糖苷酶7(β-glucosidase 7)基因RpBg7 cDNA全长序列;通过生物信息学软件分析了RpBg7的序列;用表达载体pPICZαA在毕赤酵母Pichia pastoris X-33中表达RpBg7蛋白,并用4-硝基苯基-β-d-吡喃葡萄糖苷(4-nitrophenylβ-d-glucopyranoside,4pNPG)为底物检测了表达的RpBg7蛋白的酶活性。【结果】获得了近暗散白蚁的一个内源性β-葡糖苷酶7基因RpBg7(GenBank登录号:MN944395),其开放阅读框长1485 bp,编码495个氨基酸残基。RpBg7蛋白预测分子量为57 kD,属于糖苷水解酶1(glycoside hydrolase 1,GH1)家族,具有保守的碱性氨基酸残基Glu187和Glu394。通过毕赤酵母表达系统成功表达RpBg7蛋白。酶活性分析结果表明,毕赤酵母胞外分泌蛋白粗酶液和胞内蛋白粗酶液中RpBg7酶活性分别为4.43和7.47 U/mL。【结论】克隆并利用毕赤酵母表达了近暗散白蚁的GH1家族的一个β-葡糖苷酶7基因RpBg7,为后期纤维素酶的改造和应用提供了条件。

栖热袍菌α-葡糖苷酶的基因克隆表达及酶学性质

用分子克隆手段获得栖热袍菌(Thermotoga neapolitana DSM 4359)中的α-葡糖苷酶基因,构建该基因的原核表达载体,并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达。以Thermotoga neapolitana DSM 4359的α-葡糖苷酶基因DNA为模板,通过PCR扩增目的基因,并连接至表达载体中,构建重组质粒pET-28a-glu,然后转化到大肠杆菌中,加IPTG诱导获得重组蛋白。提取粗酶,用葡萄糖测定试剂盒测酶活。序列分析结果表明,该基因的读码框碱基长度为2166bp,编码722个氨基酸;SDS-PAGE电泳结果表明,α-葡糖苷酶基因在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达,蛋白分子量约为62KDa;酶的最适反应温度为70℃,最适pH为5.0。

小球藻Chlorella vulgaris中α-葡糖苷酶抑制剂的提取和性质研究

目的对小球藻中α-葡糖苷酶抑制剂的提取和性质进行研究。方法α-葡糖苷酶抑制剂采用烘干、脱脂、硅胶柱层析等方法进行提取分离,并对其纯度和成分进行了初步鉴定,对该抑制剂的活性以及在不同条件下对α-葡糖苷酶的影响进行了检测。结果结果显示该抑制剂可能是单一组分,为酚类物质。结论对α-葡糖苷酶具有较强的抑制作用,其作用机理为非竞争性抑制作用。

精浆果糖和中性α-葡糖苷酶联合检测对无精子症的鉴别诊断价值

目的探讨精浆果糖和中性α-葡糖苷酶在无精子症的鉴别诊断中的应用价值。方法对20例正常生育男性和60例无精子症患者,分别检测精浆中果糖含量和中性α-葡糖苷酶活性,比较正常对照组和不同类型无精子症(睾丸原发型、先天性梗阻型及获得性梗阻型)患者精浆中这两类物质的含量变化。结果正常对照组、睾丸原发型、先天性梗阻型及获得性梗阻型一次射精精浆果糖含量分别为(21.93±8.03)μmol、(33.07±11.73)μmol、(0.34±0.46)μmol和(35.19±11.05)μmol;一次射精中性α-葡糖苷酶活性值分别为(40.15±21.50)mIU、(37.63±14.80)mIU(、1.72±1.45)mIU和(1.69±1.17)mIU。结论检测精浆果糖含量和中性α-葡糖苷酶活性在无精子症中有较高的鉴别诊断价值。

血清C肽、糖化血红蛋白与N-乙酰β-D-氨基葡糖苷酶联合检验在诊断2型糖尿病早期肾损伤中的应用

目的探讨血清C肽、糖化血红蛋白与N-乙酰β-D-氨基葡糖苷酶联合检验在诊断2型糖尿病早期肾损伤中的应用。方法选择2018年1月~2019年6月我院收治的50例2型糖尿病早期肾损伤患者作为为研究组,另选取同时间段收治的50例单纯2型糖尿病患者作为对照1组,另选取同时间段来我院进行常规体检的50例自愿者作为对照2组。三组均接受血清C肽、糖化血红蛋白与N-乙酰β-D-氨基葡糖苷酶联合检验诊断,并进行比较分析。结果研究组的糖尿病病程长于对照1组,差异有统计学意义(P<0.05);研究组的空腹血糖、尿微量白蛋白/肌酐比值水平均高于对照1组、对照2组,差异有统计学意义(P<0.05);研究组的糖化血红蛋白、N-乙酰β-D-氨基葡糖苷酶水平均高于对照1组、对照2组,差异有统计学意义(P<0.05);研究组的血清C肽水平低于对照1组、对照2组,差异有统计学意义(P<0.05);对照1组的空腹血糖、尿微量白蛋白/肌酐比值水平均高于对照2组,差异有统计学意义(P<0.05);对照1组的糖化血红蛋白、N-乙酰β-D-氨基葡糖苷酶水平均高于对照2组,差异有统计学意义(P<0.05);对照1组的血清C肽水平低于对照2组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在临床检查诊断糖尿病早期肾损伤过程中,应用血清C肽、糖化血红蛋白与N-乙酰β-D-氨基葡糖苷酶联合检验方法可以起到有效作用,能够提供准确检查诊断参考依据,具有重要应用价值。