葡聚糖凝胶层析法分离纯化纤维素酶的研究

用绿色木霉（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｖｉｒｉｄｅ）高产变异菌株４１３１产生的纤维素酶粗酶分别过ｓｅｐｈａｄｅｘＧ２５、ｓｅｐｈａｄｅｘＧ５０、ｓｅｐｈａｄｅｘＧ７５、ｓｅｐｈａｄｅｘＧ１００和ｓｅｐｈａｄｅｘＧ１５０柱层析．结果表明：ｓｅｐｈａｄｅｘＧ７５对纤维素酶的分离效果最佳，并获得了一个ＣＭＣ酶组份，其比活力提高到原来的４９倍，回收率为４１６％．

生物化学教学中葡聚糖凝胶层析实验的改进

为了改进和完善葡聚糖凝胶层析分离血红蛋白和硫酸铜实验教学内容,对测定波长、洗脱液以及装柱柱高等条件进行了实验分析。结果显示,凝胶装柱柱高9 cm,0.9%氯化钠对2组分混合样品进行洗脱分离,410、740 nm下检测样品吸光度值,绘制洗脱双曲线,实验过程更直观,结果更稳定;血红蛋白、硫酸铜样品分别上样、阻滞,经0.9%氯化钠洗脱,样品回收率可达(98.28±1.88)%、(98.06±1.83)%,可提高凝胶柱正常使用频率,降低实验成本,提升实验教学质量和效率。

茜素红S-牛血清白蛋白配合物的凝胶层析分离制备及紫外可见吸收光谱研究

用葡聚糖凝胶层析分离制备牛血清蛋白(BSA)-茜素红S(ARS)配合物。在420和530 nm处用紫外可见吸收光谱法同时测定含有BSA-ARS配合物和茜素红S的联立方程为:A420=4.89×103cARS+3.06×104cBSA-ARS,A530=4.60×102cARS+2.29×104cBSA-ARS;正交试验选择了合适的分离条件:柱直径1.0 cm,柱长30.0 cm,凝胶用量1.3 g,最佳进样浓度为ARS:5×10-3mol/L、BSA:1.49×10-4mol/L,进样体积1.5 mL,洗脱流速0.33 mL/min,分离度为1.25;测定了纯BSA-ARS配合物紫外吸收光谱,最大吸收峰在530 nm。

东北林蛙皮肤分泌物中特定范围内蛋白和多肽凝胶层析分析

利用凝胶色谱法对东北林蛙皮肤分泌物中蛋白质及多肽组分分子量的分布进行分析。应用葡聚糖凝胶Sephadex G-100、G-50、G-25,利用已知分子量的牛血清蛋白(Mr 66 000)、卵清蛋白(Mr 45 000)、细胞色素C(Mr 11 700)、胰岛素(Mr 5 700)、胰高血糖素(Mr 3 550)等作为标准品,对流动相、洗脱速度、色谱条件等进行反复试验,用0．5％甲醇洗脱液(含0．14 mol／L NaCl)、0．4 ml／min流速,筛选东北林蛙皮肤分泌物中分子量Mr 4 000左右的蛋白质及多肽,分离获得了大量相应分子量范围的蛋白及多肽组分。该实验方法简便,结果重现性好,适合作为生物工程产品的质控方法。

枇杷叶多糖的分离纯化及组分鉴定

提取纯化枇杷叶多糖,并对其组分进行研究。枇杷叶多糖提取液经大孔树脂除杂,醇沉后干燥即得枇杷叶可溶性总多糖。经DEAE-52纤维素柱层析及Sephadex G-200葡聚糖凝胶柱层析,得到纯化后多糖,并采用Sephadex G-200葡聚糖凝胶柱测定多糖的分子量,水解多糖后采用薄层层析对枇杷叶多糖进行组分鉴定及单糖的组成比例测定。通过DEAE-52柱层析得3个枇杷叶多糖酸性组分,分别经过Sephadex G-200柱层析得到3个乳白色组分,分别为PSL-1、PSL-2、PSL-3。3个组分的洗脱曲线均为单一对称峰,初步判断3个组分含有单一成分的多糖。PSL-1、PSL-2、PSL-3分子量分别约为700、500、400 k Da。经过薄层层析初步推断出PSL-1含有鼠李糖和葡萄糖,含量之比为1∶0.602;PSL-2含有葡萄糖、半乳糖、鼠李糖,含量之比为1∶1.415∶1.408;PSL-3含有半乳糖和鼠李糖,含量之比为1∶1.03。

晋产藜麦糖蛋白的提取纯化及含量测定

目的:从晋产藜麦中提取糖蛋白并且进行纯化,推出糖蛋白之间的键连接方式及含量测定。方法:提取工艺条件为提取温度95℃、提取时间1 h、提取次数2次,得到藜麦中粗品糖蛋白;通过DEAE-52纤维素柱层析、Sephadex G-100葡聚糖凝胶层析分离纯化,最终得出1种藜麦糖蛋白;经过薄层色谱法对纯度进行检验,并对其进行定性鉴定,根据苯酚-硫酸法测得藜麦糖蛋白含糖量,利用β-消去反应测定藜麦中糖蛋白中糖肽键连接方式,通过黏度法确定藜麦糖蛋白的分子质量。结果:糖含量为16.41%,糖肽键连接方式初步定为O-糖苷键,通过黏度法确定藜麦糖蛋白的分子质量为7624.95。

豆粕鲜味肽的制备及纯化脱苦研究

以米曲霉和黑曲霉双菌发酵制得的豆粕曲料为原料,然后通过酶解、醇沉分离提取,联合葡聚糖凝胶层析纯化脱除大豆肽苦味,结合感官评价得到了鲜味较足的豆粕鲜味肽,实验结果表明,将豆粕酶解液浓缩到固形物含量为50%时,85%乙醇沉淀分离联合葡聚糖凝胶层析可以大量提取纯化鲜味较强的豆粕鲜味肽,此时产率为3.25%;凝胶层析法可以很好地将大豆肽苦味肽和鲜味肽分离开,从而极大地提高大豆肽鲜味,所得豆粕鲜味肽鲜味阈值为350 mg/L。此方法扩展了豆粕利用的途径,也为利用豆粕工业化生产鲜味肽提供了实验参考。

家蚕蛹蛋白酶解产物对肿瘤细胞MGC-803的增殖抑制活性鉴定

以不同蛋白酶酶解制备家蚕蛹蛋白酶解产物（SPPHs）,采用MTT比色法检测其对人胃腺癌细胞MGC-803的增殖抑制活性。不同蛋白酶酶解制备SPPHs对MGC-803的增殖抑制作用存在显著差异（P〈0.05）,其中家蚕蛹蛋白以Alcalase 2.4L酶解的产物（AH）对MGC-803的增殖抑制活性最高,当AH的质量浓度为0.25 mg/m L时,水解度（DH）=25%的AH的抑制活性最高,对MGC-803细胞的增殖抑制率可达到92.74%。Alcalase2.4L酶解家蚕蛹蛋白产物的分子质量也显著影响其对MGC-803细胞的增殖抑制活性,其中分子质量〈5 k D组分的抑制率高达91.13%,将该组分经葡聚糖（G-25）凝胶层析后分离出4个组分（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ）,组分Ⅱ对MGC-803细胞的增殖抑制率最高（27.5%）,但与未分离样品相比,抑制效率显著降低,而其他3个分离组分则无抑制作用。研究结果提示,蚕蛹蛋白酶解产物对肿瘤细胞的体外增殖有抑制作用,并且这种抑制作用可能是由多种组分协同完成。

高效液相色谱法分离生姜中的6-姜酚

研究了半制备型高效液相色谱 (HPL C)分离生姜中 6 -姜酚单体的方法 ,选择并优化了 C18色谱柱条件下 ,反相高效液相色谱分离 6 -姜酚的实验条件 ,将产物的谱图与标准谱图对照可知 :该产物为 6

人甲状腺球蛋白的提取和纯化

目的 :提取高纯度的甲状腺球蛋白 (Tg) ,为制备Tg 抗血清及Tg单克隆抗体 ,建立Tg的检验方法及TgAb的测定方法做准备。方法 :将手术切除的新鲜人甲状腺组织 ,加入生理盐水匀浆、过滤 ,把滤液浓缩 ,经二次SephadexG -200柱层析 ,再经DEAE纤维素离子交换层析。结果 :获得较高纯度的人Tg ,经SDSPAGE鉴定 ,显示为1条区带 ,表明纯度较高。经免疫电泳鉴定 ,提纯的Tg有较好的免疫活性。结论 :这种提取Tg 的方法 ,简便易行 ,分离效果好 ,适用于大量制备抗原。

米酒乳杆菌素分离纯化条件研究

目的:对米酒乳杆菌产生的广谱细菌素进行分离纯化技术研究。方法和结果:采用活性炭脱色、冷乙醇沉淀、Sephadex G50葡聚糖凝胶层析和高效液相色谱技术对米酒乳杆菌产生的细菌素进行分离纯化。结果表明,发酵浓缩液脱色的最佳工艺条件为活性炭加量3.5%、温度40℃、脱色时间20h,脱色率达64.5%。冷乙醇沉淀的最佳乙醇终浓度为80%,葡聚糖凝胶层析的洗脱液流速为0.5ml/min,上样量3ml,高效液相色谱纯化的流动相为90%的甲醇水溶液,在此条件下可得到电泳纯的细菌素。结论:确定了米酒乳杆菌素的分离纯化条件,为细菌素的理化性质和抑菌机理的研究提供依据。

乳清中乳碱性蛋白的分离与纯化

利用离子交换和葡聚糖凝胶层析等技术从制作干酪的副产物乳清中提取乳碱性蛋白。分别以洗脱速度、洗脱温度、洗脱液浓度为因素,进行L9(34)正交试验,最终得出各因素对离子交换树脂提取效果的影响主次顺序依次为洗脱速度>洗脱温度>洗脱液浓度;采用D072强酸性阳离子交换树脂提取乳碱性蛋白的最佳洗脱条件为洗脱速度2.50mL/min、洗脱温度40℃、洗脱液浓度0.04mol/L。在该条件下的乳碱性蛋白提取率为7.55%。在制得的粗MBP的基础上,利用SephadexG-100型葡聚糖凝胶,蛋白分离范围4000～150000D,对其进行纯化,测得最终纯度为83.55%。

猴耳环化学成分的研究

目的:研究猴耳环(Pithecellobium clypearia Benth.)的化学成分。方法:采用多次硅胶柱层析和葡聚糖凝胶柱层析进行分离纯化,并通过理化性质、波谱分析鉴定结构。结果:从猴耳环中分离得到两个成分,鉴定为连苯三酚(pyrogallol)和槲皮苷(quercitrin)。

乳清蛋白肽的酶法制备、分离纯化及活性评价

以抗氧化活性及蛋白质回收率为筛选指标对乳清蛋白肽酶解工艺进行优化,用层析柱对酶解液进行逐级分离纯化,并对其分子质量进行检测.研究结果表明:利用胰酶、复合风味蛋白酶、木瓜蛋白酶和碱性蛋白酶酶解制备乳清蛋白肽,最佳用酶为碱性蛋白酶、最适底物含量为4.0%、最适加酶量为8000U/g、最佳酶解时间为4h;酶解液经DEAE-52纤维素层析后得到的A组分抗氧化活性最好,其还原力为0.320 0±0.004 1,DPPH自由基清除率为6.58%±0.36%;A组分再经Sephadex G-15葡聚糖凝胶层析柱分离纯化后得到组分G,其DPPH自由基清除率为6.73%±0.083%;组分G的主要成分为分子质量378 u的肽段,其一级氨基酸组成为赖氨酸(Lys)、亮氨酸(Leu)及丝氨酸(Ser).

大豆多肽分子质量分布与苦味的确定

利用葡聚糖凝胶 (Sephadex G 2 5)柱层析和高压液相色谱 (HPLC)测定大豆多肽分子质量与水解度以及分子质量与苦味之间的关系。试验结果表明 ,随着水解度的增加 ,大豆蛋白水解物分子质量变小 ,当水解度约为 2 5时 ,其分子质量绝大多数在 50 0～ 1 0 0 0 u之间。分子质量为 50 0～ 1 0 0 0

阿昔洛韦脂质体包封率的测定

目的：建立阿昔洛韦脂质体的包封率和含量测定方法。方法：采用逆向蒸发法制备阿昔洛韦脂质体。用葡聚糖凝胶柱层析法分离含药脂质体与游离药物，以水为洗脱液，于252nm处测定游离药物的量。用等吸收双波长消去法测定药物包封率和总药物量，波长分别为254nm和295nm。结果：柱层析分离方法的药物回收率为99．46％，加样回收率为99．86％，药物含量测定方法的回收率为100．8％，线性范围3-15μg-mL-1。样品的平均包封率为(64．3±2．5)％。结论：本方法便捷、灵敏、准确，可用于测定阿昔洛韦脂质体的包封率和含量。

克班宁长循环脂质体的包封率、体外释放和稳定性研究

目的研究克班宁长循环脂质体的包封率、体外释放和稳定性。方法建立高效液相色谱法测定长循环脂质体中克班宁的含量;分别采用葡聚糖凝胶柱层析法和超滤离心法分离未包封克班宁,并对包封率和载药量进行测定;采用透析法考察克班宁长循环纳米脂质体的体外释放行为;考察不同温度和光照贮存条件下克班宁长循环脂质体外观、粒径和泄漏率。结果采用葡萄糖凝胶柱层析法分离游离克班宁测得包封率为79.46%,采用超滤离心法测得包封率为81.02%,克班宁长循环脂质体载药量为5.6%;克班宁长循环脂质体体外释放规律拟合为Higuchi方程:y=0.1419 x^(1/2)+0.1475,R^2值为0.9338;在40 d内克班宁长循环脂质体在避光4℃冷藏条件下贮存稳定。结论超滤离心法操作简单,重现性好,所制得的脂质体具有明显的缓释释放特征,需避光冷藏贮存。

盐酸左氧氟沙星脂质体滴眼液的研制

目的:研究盐酸左氧氟沙星(LOFLX)脂质体滴眼剂的处方和制备工艺,探讨脂质体作为LOFLX载体的可行性。方法:采用逆相蒸发法制备脂质体,用葡聚糖凝胶柱层析测定药物包封率,以包封率为指标,通过正交设计筛选最优处方。结果:最佳处方制得的脂质体粒径均匀、形态规整、90%以上的粒径小于1μm,药物的包封率达28.41%。结论:通过逆相蒸发法制得的LOFLX脂质体可作为滴眼剂。

奥卡西平纳米脂质载体包封率的测定

建立奥卡西平纳米脂质载体包封率的测定方法。采用葡聚糖凝胶柱层析法和高速冷冻离心法分离奥卡西平纳米脂质载体中的游离药物,以高效液相色谱法测定其含量,计算包封率。色谱条件为采用Agilent ZORBAX SB-C18柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为0.01mol/L磷酸盐缓冲液(含质量分数0.2%的三乙胺,用磷酸调节pH=4.5)-乙腈-甲醇(体积比为15∶45∶40),流速1.2mL/min,柱温50℃,检测波长254nm,进样量20μL。奥卡西平峰与杂质峰的分离度良好,ρ(奥卡西平)在0.16~41.6μg/mL内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.999 8)。2种方法测得奥卡西平纳米脂质载体的包封率均在95%以上。该方法经方法学验证,可用于奥卡西平纳米脂质载体中药物包封率的测定。