葡聚糖凝胶过滤层析分离低聚半乳糖

采用葡聚糖凝胶SephadexG-25柱对低聚半乳糖混合物进行了分离提纯,确定了适宜的洗脱流速和温度。结果表明,操作温度70℃,洗脱流速20mL/h,凝胶柱90cm×1cm,当进料量由1mL增至10mL,低聚半乳糖(GOS,三糖及三糖以上的低聚糖组分)的产量提高了4.62倍,整个洗脱过程只需4.1h,可以有效地去除葡萄糖,得到纯度为85.03%的含少量乳糖的GOS混合物。此混合物经过二次上柱后,分离效果明显优于一次上柱,得到的GOS质量分数达89.39%。

葡聚糖凝胶微柱离心-HPLC法测定紫杉醇-PEG功能化多壁碳纳米管的包封率

目的建立紫杉醇(PTX)-PEG功能化多壁碳纳米管(DSPE-PEG-MWCNTs-PTX)包封率的测定方法。方法采用葡聚糖G-50凝胶微柱离心法分离DSPE-PEG-MWCNTs与游离药物,用HPLC法测定结合在DSPE-PEG-MWCNTs的PTX,计算包封率。结果在本法选择的色谱条件下,PTX得到良好的分离,在2~200μg/m L(r=0.999 7)线性关系良好。葡聚糖G-50凝胶微柱离心法能有效分离DSPE-PEGMWCNTs与游离药物,测得DSPE-PEG-MWCNTs-PTX平均包封率为88. 17%,RSD为2. 33%(n=3)。结论建立的葡聚糖凝胶微柱离心-HPLC法简便快捷,测定结果准确可靠,可用于测定DSPE-PEG-MWCNTs-PTX包封率。

《中国药典》2010年版二部阿莫西林胶囊高分子聚合物测定方法的方法学研究

目的:《中国药典》2010年版二部中阿莫西林胶囊高分子聚合物测定方法的方法学验证。方法:采用分子排阻色谱法,用葡聚糖凝胶Sephadex^(TM) G-10(300×14mm)色谱柱,流动相A为p H8.0的0.05mol/L磷酸盐缓冲液,流动相B为水,流速为1.5ml/min,检测波长为254nm,柱温为25℃,进样量为100μl。结果:在两种流动相系统中蓝色葡聚糖2000峰的理论塔板数分别为1815和1084,拖尾因子分别为1.1和0.8,保留时间的比值为1.06;对照溶液主峰与流动相B中蓝色葡聚糖2000峰的保留时间的比值为1.05;供试品溶液中聚合物峰与流动相A中蓝色葡聚糖2000峰的保留时间的比值为1.01,高聚体的峰与单体与高聚体之间的谷高比为2.4;高聚体检测质量浓度线性范围为19.9569~399.1383μg/ml(R^2=0.9980);重复性试验RSD=0.1%(n=6);检出限为0.1247μg/ml;结论:《中国药典》2010年版二部阿莫西林胶囊高分子聚合物测定方法准确可靠、灵敏度高、且重现性良好。

RP-HPLC-凝胶分离法测定紫杉醇纳米微乳的包封率

目的:建立 HPLC 法测定紫杉醇纳米微乳的包封率,并分析凝胶柱层析分离纳米微乳的可行性。方法:通过凝胶色谱法分离纳米粒和游离药物。采用反相高效液相色谱法,色谱柱为 ODS C_(18)柱(200 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为甲醇-乙腈-水(2:9:10),流速1.0 mL·min^(-1),检测波长227 nm。结果:紫杉醇浓度存5～80μg·mL^(-1)范围内线性关系良好(r=0.9999);该方法回收率的 RSD 小于2.0%,日内和日间 RSD 均小于4%。凝胶柱对纳米粒的回收率试验,RSD 小于2.0%。结论:本方法简单、快速、准确,凝胶柱 Sephadex G-25分离纳米粒与游离药物所得结果稳定、重现性好,两者合用能准确地测定紫杉醇纳米微乳的包封率并可作为质量控制的手段之一。

二次分离法优化低聚木糖中木二糖分离纯化

研究葡聚糖凝胶G-10分离玉米芯低聚木糖中木二糖的工艺条件及其纯化后的产物分析。首先对树脂进行选择,采用葡聚糖凝胶G-15进行一次分离,采用单因素试验进行二次分离条件的优化,对葡聚糖凝胶色谱分离法分离玉米芯低聚木糖中木二糖的工艺条件上样浓度、上样量、洗脱流速和取样间隔进行优化,综合纯度和收率的因素。研究结果表明:最佳分离工艺条件为上样浓度25%、上样量1.5 mL、洗脱流速0.20 mL/min、取样间隔5.00 min,此工艺下的木二糖纯度达到90.05%。

凝胶排阻层析纯化破伤风抗毒素条件优化的研究

目的:探讨凝胶排阻层析纯化破伤风抗毒素的条件。方法:使用Sephadex G-100装柱,以紫外检测蛋白质特征峰A280nm绘制的散点图为评价指标,采用单因素试验考察不同流速、洗脱剂、样品浓度对破伤风抗毒素蛋白分离的影响;经非还原型SDS-PAGE凝胶电泳后对染色结果进行扫描对比;按照《中国药典》异常毒性检查法对纯化后的组分进行安全性检查。结果:凝胶排阻层析纯化破伤风抗毒素的最佳条件为以磷酸盐缓冲液(pH6.5)为洗脱液,样品浓度为100%,流速为0.3 mL/min;SDS-PAGE凝胶电泳结果表明在该条件下可以较好地纯化破伤风抗毒素有效成分F(ab')2;异常毒性检查结果为小鼠及豚鼠均正常存活,无异常毒性。结论:优化的凝胶排阻层析条件可以较好地纯化破伤风抗毒素有效成分,且安全无毒,为进一步推动该类生物制品的质量提高提供参考。

葡聚糖凝胶色谱法测定注射用头孢美唑钠中聚合物

目的建立凝胶色谱法测定注射用头孢美唑钠中聚合物。方法色谱柱为玻璃柱(内径1.3cm,柱长40cm),葡聚糖凝胶G-10(40～120μm)为填充剂;流动相A为pH7.0的0.1mol/L磷酸缓冲液,流动相B为水;体积流量为1.5mL/min;检测波长为254nm;蓝色葡聚糖2000溶液的质量浓度为0.1mg/mL;进样量200μL。结果 A相中头孢美唑钠进样质量浓度在10～40mg/L与头孢美唑钠高分子聚合物峰面积呈良好的线性关系(r=0.9986)。B相中头孢美唑酸进样质量浓度在3.994～79.88μg/mL线性关系良好(r=0.9999)。3批样品中高分子聚合物质量分数为0.02%～0.03%。结论该方法的精密度和准确度均能满足注射用头孢美唑钠中高分子聚合物质量控制的要求。

玉竹糖蛋白分离纯化及其体外抗氧化能力

采用磷酸缓冲液浸提法提取玉竹糖蛋白粗品(Polygonatum odoratum glycoprotein,PDG),经葡聚糖凝胶G-100和刀豆凝集素A分离纯化,得到糖蛋白组分PDG1和PDG3,经高效液相色谱测定其分子质量,并检测PDG、PDG1和PDG3的体外抗氧化活性。结果表明,PDG1和PDG3的分子质量分别为186 k D和28.3 k D;玉竹糖蛋白具有一定的还原能力,对羟自由基和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基具有较强的清除作用,对脂质过氧化具有抑制作用,且在一定质量浓度范围内(1~10 mg/m L)存在剂量关系,其抗氧化能力随着玉竹糖蛋白质量浓度的增加而增强,PDG1和PDG3的抗氧化能力优于PDG。

10-羟基喜树碱半固体脂质纳米粒的研制与稳定性考察

目的:制备10-羟基喜树碱的半固体脂质纳米粒(HCPT-SSLN)并考察其稳定性。方法:采用高温乳化蒸发-低温固体法制备了HCPT-SSLN;用透射电镜考察了纳米粒的形态;用激光粒度仪测定了粒径和ξ电位;考察了其混悬液和冻干粉的物理稳定性。结果:HCPT-SSLN纳米粒平均粒径为130.5 nm,载药量为2.51%,包封率为79.19%,ξ电位为-33.1mV;室温(25℃)和4℃下放置6个月,纳米粒外观、粒径及包封率无明显变化,冻干粉比混悬液的物理稳定性更高。结论:本实验制备的HCPT-SSLN包封率和载药量较高,粒径分布均匀,稳定性良好。初步表明HCPT适合进行SSLN包裹。

枇杷叶多糖的分离纯化及组分鉴定

提取纯化枇杷叶多糖,并对其组分进行研究。枇杷叶多糖提取液经大孔树脂除杂,醇沉后干燥即得枇杷叶可溶性总多糖。经DEAE-52纤维素柱层析及Sephadex G-200葡聚糖凝胶柱层析,得到纯化后多糖,并采用Sephadex G-200葡聚糖凝胶柱测定多糖的分子量,水解多糖后采用薄层层析对枇杷叶多糖进行组分鉴定及单糖的组成比例测定。通过DEAE-52柱层析得3个枇杷叶多糖酸性组分,分别经过Sephadex G-200柱层析得到3个乳白色组分,分别为PSL-1、PSL-2、PSL-3。3个组分的洗脱曲线均为单一对称峰,初步判断3个组分含有单一成分的多糖。PSL-1、PSL-2、PSL-3分子量分别约为700、500、400 k Da。经过薄层层析初步推断出PSL-1含有鼠李糖和葡萄糖,含量之比为1∶0.602;PSL-2含有葡萄糖、半乳糖、鼠李糖,含量之比为1∶1.415∶1.408;PSL-3含有半乳糖和鼠李糖,含量之比为1∶1.03。

晋产藜麦糖蛋白的提取纯化及含量测定

目的:从晋产藜麦中提取糖蛋白并且进行纯化,推出糖蛋白之间的键连接方式及含量测定。方法:提取工艺条件为提取温度95℃、提取时间1 h、提取次数2次,得到藜麦中粗品糖蛋白;通过DEAE-52纤维素柱层析、Sephadex G-100葡聚糖凝胶层析分离纯化,最终得出1种藜麦糖蛋白;经过薄层色谱法对纯度进行检验,并对其进行定性鉴定,根据苯酚-硫酸法测得藜麦糖蛋白含糖量,利用β-消去反应测定藜麦中糖蛋白中糖肽键连接方式,通过黏度法确定藜麦糖蛋白的分子质量。结果:糖含量为16.41%,糖肽键连接方式初步定为O-糖苷键,通过黏度法确定藜麦糖蛋白的分子质量为7624.95。

HPLC法测定头孢呋辛钠的聚合物

目的 采用HPLC法测定头孢呋辛钠中聚合物。方法 采用外标法，色谱柱：葡聚糖凝胶G-10色谱柱(42×1．3cm)，流动相：A，0．1mol·L。磷酸盐缓冲液(pH7．0)，B，0．01％十二烷基硫酸钠溶液，流速：1．0ml·min^-1，检测波长：254nm，进样量：50μl，柱温：室温。结果线性范围为10—60μg·ml^1，r=0．9994，精密度试验的相对标准差(n=5)为1．7％，重复性实验的相对标准差(n=5)为2．2％，高中低浓度平均回收率分别为99．2％，100．1％，99．7％；RSD分别为1．95，1．5％，2．4％(n=3)。结论 本法操作简单，准确，灵敏度高，适用于该制剂的质量分析检验。

乳清蛋白肽的酶法制备、分离纯化及活性评价

以抗氧化活性及蛋白质回收率为筛选指标对乳清蛋白肽酶解工艺进行优化,用层析柱对酶解液进行逐级分离纯化,并对其分子质量进行检测.研究结果表明:利用胰酶、复合风味蛋白酶、木瓜蛋白酶和碱性蛋白酶酶解制备乳清蛋白肽,最佳用酶为碱性蛋白酶、最适底物含量为4.0%、最适加酶量为8000U/g、最佳酶解时间为4h;酶解液经DEAE-52纤维素层析后得到的A组分抗氧化活性最好,其还原力为0.320 0±0.004 1,DPPH自由基清除率为6.58%±0.36%;A组分再经Sephadex G-15葡聚糖凝胶层析柱分离纯化后得到组分G,其DPPH自由基清除率为6.73%±0.083%;组分G的主要成分为分子质量378 u的肽段,其一级氨基酸组成为赖氨酸(Lys)、亮氨酸(Leu)及丝氨酸(Ser).

湿疹纳米乳中丹皮酚包封率的测定

目的建立湿疹纳米乳中丹皮酚的包封率测定方法,用于评价湿疹纳米乳制备工艺。方法采用葡聚糖凝胶G-50柱分离湿疹纳米乳中包封的丹皮酚与未包封的丹皮酚。HPLC法测定湿疹纳米乳中丹皮酚的含量,并计算其包封率。结果纳米乳中丹皮酚的含量在0.4160~41.60μg/m L浓度范围内线性关系良好,r为0.999 9,加样回收率平均值为98.43%,RSD为2.90%;纳米乳中丹皮酚的包封率值为（92.43±0.44）%,RSD为0.43%（n=6）,葡聚糖凝胶柱分离纳米乳上样回收率为（90.5±0.17）%,RSD为1.84%。结论葡聚糖凝胶G-50可以将湿疹纳米乳和游离的丹皮酚较好地分开,湿疹纳米乳中丹皮酚的包封率测定方法可作为工艺研究的评价方法。

叶酸-白蛋白纳米粒偶联荧光素制备工艺的研究

目的研究叶酸-白蛋白纳米粒(叶酸-BSA纳米粒)偶联荧光素的制备工艺。方法制备叶酸-BSA纳米粒偶联物,将所得偶联物物理包合荧光素,通过透析将大部分未包裹的荧光素除去,并用葡聚糖凝胶柱色谱法进一步分离纯化,用紫外分光光度法测定荧光素上载效率。结果通过物理包合可以成功将荧光素包裹到叶酸-BSA纳米粒内,荧光素上载效率为6.4%。结论通过研究叶酸-BSA纳米粒包裹荧光素的制备工艺,可为进一步利用叶酸-BSA纳米粒偶联物包裹近红外荧光染料,对肿瘤体内在位监测奠定了基础。

苦瓜渣酶解制备多肽的研究

以苦瓜饮料加工所产生的苦瓜渣为原料酶解制备多肽,通过对比实验确定纤维素酶辅助酶解2h,在单因素实验的基础上,采用正交实验优化得出木瓜蛋白酶酶解条件为:[E/S]=3.0%、温度50℃、pH6.5、时间2.5h。葡聚糖凝胶G-25层析法测定结果显示,酶解液中多肽(<5000Da)主要含有三个组分,分子量分别为:1500、810、430Da。

盐酸小檗碱前体脂质体包封率测定方法的研究

目的:建立盐酸小檗碱前体脂质体包封率的测定方法。方法:采用葡聚糖凝胶柱G-50色谱分离-HPLC测定盐酸小檗碱前体脂质体包封率。结果:以pH7.0的磷酸盐缓冲液(PBS)为洗脱溶剂(洗脱速度1.0mL/min),柱回收率为98.6%-100.5%,3批样品包封率测定结果RSD<2%。结论:本研究建立的测定方法简便、准确,重复性好,可用于测定盐酸小檗碱前体脂质体包封率。

RP-HPLC法测定紫杉醇脂质体的药物包封率

目的:建立紫杉醇脂质体药物包封率的测定方法。方法:采用葡聚糖凝胶G-50柱色谱法分离紫杉醇脂质体和游离药物,用RP-HPLC法检测紫杉醇的量,计算脂质体中紫杉醇的包封率;色谱条件:采用Platisil-ODS(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以甲醇-水(含0.1%三乙胺和0.67%冰乙酸)(80∶20)为流动相,流速1.0mL·min^(-1),检测波长227 nm,柱温为室温。结果:紫杉醇与辅料及溶剂的色谱峰分离良好,峰形很好;紫杉醇线性范围0.5~50μg·mL^(-1)(r=0.999 3),加样回收率范围为99.66%~100.8%,包封率范围为90.29%~91.65%。结论:本方法能快速检测紫杉醇脂质体中紫杉醇含量及包封率。

大蒜中蒜氨酸分离纯化工艺研究

以大蒜为原料,分别研究了醇沉法和葡聚糖凝胶G-10对蒜氨酸的分离纯化效果。结果表明醇沉法分离蒜氨酸的最佳工艺条件为:大蒜提取液真空浓缩至可溶性固形物含量为20%,加入乙醇至终浓度为80%,静置18 h,分离得上清液及沉淀,再将所得上清液及沉淀复溶后按上述条件分别进行醇沉,得二次醇沉上清液,合并,冷冻干燥,得蒜氨酸粗品。蒜氨酸粗品经葡聚糖凝胶G-10色谱法纯化最佳条件为:上样液浓度为30%,上样量2%柱体积,洗脱流速1 mL/min,通过葡聚糖凝胶G-10分离后,蒜氨酸的纯度可达到43.5%。