抗葡聚糖单克隆抗体制备的研究

本文对抗葡聚糖单克隆抗体制备进行研究,采用新的载体偶联技术和免疫方法,已成功获得4株抗葡聚糖单抗杂交瘤,并证明是葡聚糖特异性的。为研制快速、定量准确的葡聚糖免疫学检测国产试剂盒打下基础。

克隆化抗真菌剂1,3-D-葡聚糖合成酶

日本罗氏研究所小组成功地克隆了酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）细胞壁60%的葡聚糖合成酶——1.3-D-葡聚糖合成酶（GLS）。这种酶特异性抑制剂很可能成为有效且副作用小的抗真菌剂。在12月13日～16日神户市召开的日本分子生物学会上发表了该研究的详情。 该公司从酵母中纯化部分GLS后,以此为抗原制备单克隆抗体获得成功。进一步纯化了GLS酶（分子量20万）。用以部分肽序列为基础合成的DNA探针从酵母中克隆出GLS基因。获得了两种基因（GLS1、GLS2）,其氨基酸序列的同源性为88%。

菌血症患者血浆（1,3）-β-D-葡聚糖结果分析

目的 了解菌血症对GKT-5M Set动态真菌检测试剂盒的影响.方法 回顾性分析27例非侵袭性真菌感染（IFI）菌血症患者血培养当日（1,3）-β-D-葡聚糖结果.结果 27例非IFI的菌血症患者中8例（29.63%）为G试验阳性,其中革兰氏阳性菌感染的菌血症患者中4例G试验阳性（33.33%,4/12）,均为葡萄球菌属感染.革兰氏阴性菌感染的菌血症患者中4例（26.67%,4/15）G试验阳性,其中2例为铜绿假单胞菌感染病人,1例为鲍曼不动杆菌复合群感染病人.金黄色葡萄球菌、沃氏葡萄球菌、表皮葡萄球菌、人葡萄球菌、鲍曼不动杆菌复合群、铜绿假单胞菌、霍氏肠杆菌感染可引起（1,3）-β-D-葡聚糖检测阳性.结论 葡萄球菌属、铜绿假单胞菌等与GKT-5M Set动态真菌检测试剂盒有交叉反应,可能会引起G试验假阳性.

葡聚糖对原糖精炼过程的影响

在生产线上通过不添加或添加葡聚糖酶,营造高葡聚糖浓度环境和低葡聚糖浓度环境。利用葡聚糖单克隆抗体试剂盒测定葡聚糖含量,并统计两试验期各生产和成品质量指标变化情况,从而推断葡聚糖对原糖精炼过程的影响。结果表明,加入葡聚糖酶能有效降低葡聚糖含量,营造低葡聚糖环境。对比两试验期数据发现高浓度葡聚糖会减弱澄清和脱色工艺效果,澄清脱色率、树脂脱色率、总脱色率和R1糖浆简纯度分别降低3.2%、0.4%、1.0%和0.23%。煮糖系统的前期糖浆纯度下降而后期明显上升,证明更多蔗糖从糖蜜中损失,产糖率下降1.60%,糖蜜损失蔗糖量对糖比上升0.15%。最后,葡聚糖进入成品糖,使产品葡聚糖含量超过130mg/kg。可见,葡聚糖对原糖精炼存在较大的负面影响。

甘蔗生产过程葡聚糖的形成与检测研究进展

甘蔗生产过程出现的葡聚糖主要是甘蔗感染肠膜明串珠菌消耗蔗糖后的代谢产物。葡聚糖的形成与甘蔗品种、田间环境(种植方式、温度及湿度、日照、土壤条件、夹杂物)、损伤程度(顽性甘蔗、收获方式)等因素有关,其含量可通过特异性葡聚糖单抗试剂盒快速、准确测定。葡聚糖是评价甘蔗新鲜度直接、可靠的指标。

葡聚糖酶应用于甘蔗制糖过程的试验研究

2013/14年榨季在广西农垦的多家糖厂进行了葡聚糖酶应用的生产性试验。结果表明葡聚糖酶可有效清除制糖物料中的葡聚糖,除去率达到98%以上,清混汁纯度差达到2 AP以上,煮炼回收率提高1个百分点以上。使用葡聚糖单抗试剂盒能快捷、准确测定甘蔗原料、在制品和产品中的葡聚糖含量,解决制糖生产中葡聚糖测定的大难题。

免疫比色法定量测定α-葡聚糖的研究

α-葡聚糖对制糖工艺和产品品质造成不良影响,目前测定葡聚糖的方法存在样品前处理繁琐、杂质干扰大等缺陷。本文对免疫比色法检测α-葡聚糖进行了探讨,以特异性强的单克隆抗体定量测定样品中的α-葡聚糖,建立了比色法测定葡聚糖Ag-Ab复合物的方法。该方法具有重复性好、简单快速、适用于测定所有糖产品及在制品的优点,可应用于糖厂生产控制α-葡聚糖的实时监测。

浅析原糖糖浆中葡聚糖与淀粉含量对过滤速度的影响

【目的】一是通过试验探究葡聚糖和淀粉含量与原糖糖浆过滤速度之间的关系,指导制糖过程葡聚糖酶/淀粉酶的添加量;二是通过降低原糖糖浆粘度提高过滤速度来评价葡聚糖酶/淀粉酶在制糖过程应用中的效果。【方法】利用葡聚糖单克隆抗体免疫比浊法测定原糖中葡聚糖的含量;利用淀粉和碘结合生成深蓝色至紫红色络合物的原理测算出原糖中淀粉含量。【结果】一是原糖中葡聚糖含量的高低会影响原糖糖浆过滤的速度;原糖中淀粉含量对过滤速度影响不明显;二是当原糖中葡聚糖含量一样,淀粉含量高,过滤速度慢,反之亦然。【结论】葡聚糖含量高会降低原糖糖浆过滤速度,葡聚糖含量和淀粉含量同时较高也会降低原糖液过滤速度。从原糖葡聚糖含量、淀粉含量与其糖液过滤速度的相关性说明在影响原糖液过滤速度的因素中,葡聚糖含量的高低比淀粉含量的高低重要,当然还存在其他一些因素有待探究。

补体在单克隆抗体介导的肿瘤免疫治疗中的作用

被单克隆抗体激活的补体可以直接造成肿瘤细胞溶解或增强ADCC作用。然而肿瘤细胞表面通常有高水平表达的膜结合补体调节蛋白(mCRP)使其免受补体介导的杀伤作用。近期研究表明,阻断或克服肿瘤细胞的mCRP可显著提高单抗免疫治疗的疗效。另外,单抗辅以β-葡聚糖可以使iC3b沉积在肿瘤细胞表面并激活补体受体3(CR3)从而介导CR3依赖性细胞毒作用。这些都已成为现有单抗作用机制的有益补充。

磁共振单克隆抗体免疫靶向对比剂McAb-DMP的制备

目的 探讨磁共振单克隆抗体靶向对比剂McAb DMP的制备方法。方法 以葡聚糖为载体 ,采用氧化法制备免疫靶向磁性微粒。结果 制备的磁性纳米微粒与单抗相比保持了较高的结合活性和免疫活性。结论 合成CEA单克隆抗体标记磁性微粒 ,保证了结合活性免疫活性 。

聚乙二醇、葡聚糖对杂交瘤细胞保护特性研究

利用鼠鼠杂交瘤２Ｆ７细胞（分泌抗小细胞肺癌单克隆抗体）研究聚乙二醇、葡聚糖与杂交瘤细胞的生物相容性及添加限制浓度，研究添加浓度对葡萄糖消耗速率及氨形成速率的影响。在高速搅拌、高剪切力下考察了添加剂的保护性能。实验结果表明，０．０４％－０．１０％的聚乙二醇能较好地保护杂交瘤细胞，添加聚乙二醇后葡萄糖的比消耗速率增加，而氨的比生成速率没有变化；添加葡聚糖对葡萄糖的比消耗速率没有影响，但降低了氨的比生成速率，并且葡聚糖抑制细胞生长，不适合作动物细胞保护剂；小牛血清能较好地保护细胞；细胞死亡动力学表征为一级反应。在２５０ｍｌ磁力搅拌瓶中培养，培养基中添加０．１０％聚乙二醇，培养温度为３７．０，搅拌转速为８０转／分，细胞能止常生长；而培养基不添加聚乙二醇时细胞不能生长。

葡聚糖酶在甘蔗制糖过程的应用试验研究

2013/14年榨季后期及2014/15年榨季前期在生产过程中使用葡聚糖酶进行了生产性试验研究,结果表明葡聚糖酶可有效清除制糖物料中的葡聚糖含量,除去率达到88.89%以上;在2013/14年榨季后期试验期间,废蜜重力纯度从37.89降至37.51,混合产糖率提高0.35个百分点。

糖料甘蔗品质评定新指标—甘蔗葡聚糖的形成、危害及检测方法

文章通过分析甘蔗葡聚糖形成原因及对制糖工业的危害,综合比较国内外甘蔗葡聚糖各种检测方法,得出甘蔗葡聚糖是评定糖料甘蔗品质的一个新指标,并指出免疫检测方法是很有前景的方向。

甘蔗生产过程葡聚糖的形成与检测研究进展（英文）

甘蔗生产过程出现的葡聚糖主要是甘蔗感染肠膜明串珠菌消耗蔗糖后的代谢产物。葡聚糖的形成与甘蔗品种、田间环境(种植方式、温度及湿度、日照、土壤条件、夹杂物)、损伤程度(顽性甘蔗、收获方式)等因素有关,其含量可通过特异性葡聚糖单抗试剂盒快速、准确测定。葡聚糖是评价甘蔗新鲜度直接、可靠的指标。

葡聚糖酶在原糖精炼生产中的应用研究

介绍了葡聚糖酶在某糖厂原糖精炼过程中使用情况,通过在溶糖箱和蜜洗蜜贮罐连续加入葡聚糖酶,比较加酶前后生产指标变化情况。结果表明,加入葡聚糖酶能有效降解糖汁中的葡聚糖,对过滤、煮糖等过程有帮助,可提高生产效率和产品质量。而葡聚糖酶的作用效果——原糖、中间物料和成品中的葡聚糖含量变化可通过葡聚糖单抗试剂盒快捷、准确测定。

鼠抗人肝癌单抗Hab_(18)—葡聚糖—阿霉素结合物在荷瘤裸鼠体内的放免定位及导向治疗的实验研究

本实验制备了鼠抗人肝癌单克隆抗体Hab_18—葡聚糖—阿霉素导向结合物,放免显像证实该结合物在荷人肝癌裸鼠体内能选择性地定位于人肝癌局部;对荷瘤鼠的毒理学实验中相同剂量的阿霉素组荷瘤鼠全部死亡,而导向结合物组全部存活;荷人肝癌裸鼠导向治疗结果表明:该结合物能有效地抑制人肝癌的生长,导向治疗组肿块较治疗前缩小.实验结果提示:Hab_18—DEX—ADM结合物对人肝癌有较好的导向治疗作用.其抗癌效果优于单纯ADM,而毒副作用却明显低于单纯ADM,有可能成为一种肝癌导向药物.

测定燕麦β-葡聚糖含量的方法比较

β-葡聚糖含量的检测方法主要有酶试剂盒法、苯酚-硫酸法、刚果红法和荧光法。对比了前三种测定燕麦β-葡聚糖含量的检测方法,通过试验数据的比较,最终采用酶试剂盒法测定β-葡聚糖的含量,平行测定的RSD<1%,方法的专一性和准确性良好,适合于测定化妆品原料中的β-葡聚糖的含量。

酵母菌全葡聚糖颗粒β-葡聚糖联合抗瘤单克隆抗体治疗肿瘤

β-葡聚糖是来源于酵母菌全葡聚糖颗粒和其它来源细胞壁的生物效应调节剂（BRMs），用于启动白细胞补体受体3（CR3），从而使这些细胞可以杀伤补体片段iC3b调理的肿瘤细胞。大量动物肿瘤模型研究显示，口服微粒酵母菌β-葡聚糖与抗肿瘤单克隆抗体的联合治疗在肿瘤退化和长时间生存方面有效。β-葡聚糖能提高抗肿瘤单克隆抗体临床治疗的有效性。

β-葡聚糖联合激发型抗CD40单克隆抗体对树突状细胞免疫功能影响的体外研究

目的探讨β-葡聚糖联合激发型抗CD40单克隆抗体(5C11)对树突状细胞(DCs)的作用及分子机制。方法采用密度梯度离心法从健康人新鲜的浓缩白细胞中分离出单个核细胞,使用GM-CSF和IL-4细胞因子法诱导培养未成熟DCs,经不同刺激方式(5C11、β-葡聚糖、5C11+β-葡聚糖)激发后,流式细胞术检测不同组DCs表面共刺激分子CD40、CD80、CD83、CD86和MHCⅡ类分子HLA-DR的表达,ELISA法检测IL-12、IL-6、TNF-α、IL-10等相关细胞因子的表达,Western blot检测MAPK信号通路中相关蛋白质的磷酸化水平。结果β-葡聚糖能够显著诱导CD40在DCs表面的表达(P<0.05),联合5C11后,其他表面分子CD80、CD83、CD86的表达进一步显著上调,尤其对DCs成熟的重要标志分子CD83的上调表现出强烈的协同效应(P<0.01);ELISA检测结果显示β-葡聚糖联合5C11可以诱导DCs大量分泌IL-12、IL-6、TNF-α等促炎因子,对发挥DCs功能的关键因子IL-12的分泌表现出协同效应(P<0.01);Western blot结果显示p38 MAPK、p44/42 MAPK的磷酸化水平显著上升,且磷酸化时间提前,维持时间也延长(P<0.01)。结论β-葡聚糖联合5C11可协同促进DCs的成熟并提高DCs的免疫功能,为肿瘤DCs疫苗的制备方案提供了新思路。