发酵枸杞多糖通过调节肠道微生态缓解葡聚糖硫酸钠诱导的溃疡性结肠炎

为探究多糖益生元调节肠道微生态作用机制,采用ELISA法、组织病理学分析、免疫组化分析、16S rRNA高通量测序、气相色谱-质谱联用等方法,研究发酵多糖对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导结肠炎模型小鼠肠道菌群和短链脂肪酸(SCFAs)变化的影响及其与肠道炎症水平、屏障蛋白表达的关系。结果发现,发酵枸杞多糖(FLBP)可显著降低小鼠肠道炎症水平,改善结肠组织结构,上调紧密连接蛋白Claudin-1和ZO-1表达量,同时显著增加肠道SCFAs含量。肠道菌群分析结果表明,FLBP可富集小鼠肠道杜氏芽孢杆菌(Dubosiella)和阿克曼氏菌属(Akkermansia),降低Turicibacter菌属、肠杆菌属(Faecalibaculum)、埃希氏菌-志贺菌属(Escherichia-Shigella)丰度。研究结果表明,FLBP激活重塑的杜氏芽孢杆菌在改善结肠炎中占主导作用,显著提升SCFAs含量,增强肠道屏障,降低肠道炎症。研究旨在为改善结肠炎提供更安全有益的选择,并为开发FLBP功能性食品提供理论依据。

葡聚糖硫酸钠饲喂SPF鸡诱导肠道炎症的研究

为深入探讨肠道炎症对鸡生长发育、肠道组织结构及微生物菌群等方面的影响,试验利用1%和4%两种浓度的葡聚糖硫酸钠(DSS)溶液饮水诱导鸡肠道炎症,建立无特定病原(SPF)鸡肠道炎症模型,通过测定体重、器官指数、盲肠微生物菌群结构、组织病理、炎性细胞因子表达水平及炎症标识物钙卫蛋白(CALP)和脂质运载蛋白(NGAL)含量等,综合评价不同浓度DSS诱导的鸡肠道炎症对其生理功能的影响。结果显示:与对照组相比,DSS4组极显著抑制鸡增重(P<0.01),阻止鸡免疫器官脾脏和法氏囊的发育,盲肠微生物菌群多样性和丰度均极显著改变(P<0.01),肠杆菌科(Enterobacteriaceae)占比达到74.39%,组织病理学检测显示十二指肠、空肠、回肠和盲肠组织结构均发生显著病变,脾脏炎性细胞因子相对mRNA表达测定显示白细胞介素1β(IL-1β)表达水平极显著升高(P<0.01),而趋化因子生长调节基因1(CxCli1)和趋化因子生长调节基因2(CxCli2)极显著降低(P<0.01),白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)含量未见显著变化(P>0.05),血清和盲肠内容物CALP和NGAL含量均极显著降低(P<0.01)。DSS1组对测定指标的影响相对较小,仅少数指标出现显著改变。试验结果表明,利用口服DSS成功建立了急性肠道炎症模型,并鉴定了肠道炎症对鸡生理功能的影响。

灵芝多糖对葡聚糖硫酸钠诱导小鼠溃疡性结肠炎的影响

目的探究灵芝多糖(GLP)对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的小鼠溃疡性结肠炎(UC)的影响。方法36只雄性KM小鼠随机分为正常组、模型组、美沙拉秦组和灵芝多糖低、中、高剂量组,每组6只。灵芝多糖低、中、高剂量组分别灌胃50、100、200 mg/kg灵芝多糖溶液,美沙拉秦组灌胃300 mg/kg美沙拉秦混悬液,正常组和模型组灌胃等量生理盐水,持续21 d,每日1次。前14 d,所有小鼠均饮用正常水,后7 d,除正常组外,其他组小鼠均采用自由饮用3%DSS溶液7 d构建UC模型。造模期间记录小鼠体质量并进行疾病活动指数(DAI)评分;取材后测量小鼠结肠长度并称重;HE染色法观察小鼠结肠组织病理学变化;ELISA法测定小鼠结肠组织样本中炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-10含量。结果与模型组比较,灵芝多糖中、高剂量组能够在一定程度上延缓体质量下降和DAI上升(P<0.01),结肠长度显著增加(P<0.01),结肠重量显著减少(P<0.01),结肠组织病理学损伤程度减轻,炎性细胞浸润减少,结肠组织中TNF-α、IL-6、IL-1β含量显著降低(P<0.01),IL-10含量显著升高(P<0.01)。结论灵芝多糖对DSS所导致的UC小鼠结肠组织病理损伤具有改善作用,可能与其调控促炎因子和抗炎因子分泌水平的平衡有关。

复方救必应对葡聚糖硫酸钠联合大肠杆菌诱导肠道损伤的保护作用

旨在探究复方救必应(CIRC)对葡聚糖硫酸钠(DSS)联合大肠杆菌诱导肠道屏障损伤的保护作用。将30只体重(20±2)g昆明雌鼠随机分成3个处理组,每组10只,分为空白组(CON)、模型组(DE)和CIRC预防组(CDE)。CON组饮用纯净水,DE组和CDE组自由饮水(含3%DSS溶液)5 d,第6天DE组和CDE组灌胃0.5 mL含菌量10^(8) CFU/mL的大肠杆菌O157:H7菌液,之后饮用纯净水;试验期间CDE组灌胃3.64 g/kg CIRC,CON组和DE组灌胃等量生理盐水,1次/d,连续给药10 d。每天评估小鼠体重变化、疾病活动指数(DAI);末次给药12 h后,收集小鼠血液、结肠、肝脏和肾脏,评估结肠长度,HE染色观察结肠组织的病理学变化,ELISA法测定血清中白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素10(IL-10)、白细胞介素12(IL-12)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、髓过氧化物酶(MPO)和脂多糖(LPS)的含量,实时荧光定量PCR法测定闭锁小带蛋白-1(ZO-1)和闭合蛋白(Occludin)基因表达量,平板计数检测大肠杆菌O157:H7感染后小鼠器官载菌量。结果显示:与DE组相比,CDE组小鼠体重显著增加(P<0.001),DAI显著降低(P<0.001),结肠长度缩短被显著抑制(P<0.001),血清中IL-1β、IL-6、TNF-α、MPO和LPS含量显著降低(P<0.01),ZO-1和Occludin的mRNA表达量显著提高(P<0.05),并且显著抑制了大肠杆菌O157:H7从肠道转移至肝脏和肾脏(P<0.001)。结果表明:CIRC对DSS联合大肠杆菌诱导小鼠肠道损伤具有较好的保护作用,其作用机制可能与CIRC维持肠道机械屏障,阻止大肠杆菌O157:H7的定殖和转移,进而抑制全身性炎症反应有关。

蒿本内酯对葡聚糖硫酸钠诱导的溃疡性结肠炎小鼠的改善作用

目的:探究蒿本内酯(ligustilide,Lig)对葡聚糖硫酸钠(dextran sodium sulfate,DSS)诱导溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)小鼠的改善作用及机制。方法:将60只雄性SPF级C57BL/6小鼠随机分成6组,分别为空白组、DSS组、阳性药柳氮磺吡啶(sulfasalazine,SASP)组、Lig低、中、高剂量组。DSS组小鼠自由饮用3%DSS水溶液7 d复制UC模型,同时对Lig低、中、高剂量组小鼠灌胃给予药物干预治疗。通过记录小鼠每日体重和结肠长度,检测疾病活动指数(disease activity index,DAI)评分,采用酶联免疫吸附测定试剂盒定量检测血清中TNF-α、IL-6和IL-1β的表达水平,检测结肠中TLR4/NF-κB蛋白表达水平,并结合苏木素-伊红染色实验,探究Lig对小鼠UC的作用及机制。结果:与空白组比较,DSS组小鼠体重显著减轻(P<0.05),结肠长度显著缩短(P<0.05),DAI评分显著升高(P<0.05),肠道出现大量炎症性浸润现象,且结肠组织中TNF-α、IL-6和IL-1β表达水平显著升高(P<0.05);与DSS组比较,Lig中剂量组和高剂量组小鼠的肠道组织中TNF-α、IL-6和IL-1β的表达以及TLR4/NF-κB信号均被显著抑制(P<0.05),表明Lig中剂量组和高剂量组小鼠肠道损伤得到显著改善。结论:Lig能有效改善DSS诱导的小鼠UC,其机制可能是抑制NF-κB信号通路的激活。

山药多糖对葡聚糖硫酸钠诱导小鼠溃疡性结肠炎的改善作用

[目的]探究山药多糖(YP)对溃疡性结肠炎(UC)小鼠的改善作用。[方法]设空白组、YP组、DSS组和DSS+YP组。通过饮用DSS水溶液搭建模型,治疗组连续灌胃给药7 d。检测各小鼠体重、疾病活动指数(DAI)评分、结肠中炎症因子和NLRP3炎症小体含量,并进行HE染色分析。用含1μg/mL脂多糖(LPS)的培养液处理RAW 264.7巨噬细胞24 h建立体外细胞炎症模型,同时将一定浓度的YP溶液加入到培养液中与LPS共孵育24 h,酶联免疫吸附试验法检测细胞培养上清中IL-1β、IL-6和TNF-α的含量;免疫印迹法分析细胞中NLRP3炎症小体相关蛋白的表达水平。[结果]与空白组相比,DSS组小鼠体重下降,染色展现大区域溃疡,DAI和炎症因子含量升高。与DSS组相比,DSS+YP组小鼠的肠道损伤得到显著改善,肠道组织中IL-1β、IL-6、TNF-α表达和NLRP3炎症小体激活信号均被显著抑制。在细胞炎症模型中,YP干预处理可显著抑制LPS所致的IL-1β、IL-6和TNF-α的分泌和NLRP3蛋白的表达。[结论]YP可改善DSS引起的小鼠UC,其机制是阻碍NLRP3炎症小体的激活来实现。

海洋多糖对葡聚糖硫酸钠诱导的溃疡性肠炎小鼠的改善作用

目的:研究海洋中药多糖海藻酸钠和褐藻多糖对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的小鼠溃疡性结肠炎(UC)的改善作用。方法:使用小鼠单核巨噬细胞白血病(RAW264.7)细胞系作为体外实验的细胞模型,将不同浓度的海藻酸钠和褐藻多糖作用于RAW264.7细胞,通过细胞计数(CCK-8)法测定细胞活力;并用脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞激活,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒测定细胞上清液中的一氧化氮(NO)、白细胞介素-6(IL-6)含量;将25只雌性小鼠随机分为空白对照组、模型组、阳性对照组、海藻酸钠及褐藻多糖组,每组5只。除空白对照组外,每组使用DSS灌胃7 d以建立UC模型,之后,对阳性对照组、海藻酸钠组及褐藻多糖组小鼠连续灌胃给药(后生元、海藻酸钠和褐藻多糖)。眼球取血用于血清中炎症介质的检测;同时,麻醉处死小鼠取小鼠结肠组织,用于生化指标测定和组织病理学分析。结果:海藻酸钠和褐藻多糖在高浓度也未对RAW264.7细胞造成毒性;海藻酸钠、褐藻多糖在500~1000μg/mL浓度范围内,都以浓度依赖性抑制RAW264.7细胞分泌细胞因子NO和IL-6,且褐藻多糖效果明显优于海藻酸钠;对于DSS诱导的小鼠UC,海藻酸钠、褐藻多糖均可改善UC的临床症状,使小鼠体质量回升,降低血清炎症介质肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和IL-6的分泌水平。结论:褐藻多糖和海藻酸钠能够通过抑制血清中炎症介质的释放来治疗DSS诱导的UC,且褐藻多糖的治疗效果优于海藻酸钠。

人参多糖治疗葡聚糖硫酸钠诱导溃疡性结肠炎作用机制研究

目的探讨人参多糖治疗葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的溃疡性结肠炎(UC)的作用机制。方法将50只C57/B6小鼠随机分为空白对照组(A组,等量生理盐水),模型对照组(B组,等量生理盐水),人参多糖低、中、高剂量组(C1组、C2组、C3组,50,100,200 mg/kg),各10只。A组小鼠自由饮水,B组、C1组、C2组、C3组小鼠予3%DSS溶液,连续7 d,构建UC模型。建模成功后,各组小鼠灌胃相应药物干预6 d。每日测定小鼠体质量,评估疾病活跃指数(DAI)。给药结束后处死小鼠,测定结肠长度;采用苏木精-伊红(HE)染色法观察结肠病理形态变化;采用异硫氰酸荧光素标记的葡聚糖检测肠道渗漏水平;采用实时荧光定量核酸聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测结肠白细胞介素(IL)-6、IL-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、胱天蛋白酶3(caspase 3)mRNA表达水平;采用免疫印迹(Western blot)法检测结肠Occludin、ZO-1、核因子-κB p65(NF-κB p65)、caspase 3蛋白表达水平;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清中IL-6,IL-1β,TNF-α含量。结果与B组比较,C1组、C2组、C3组小鼠体质量和结肠长度均显著增加(P<0.05),DAI评分和结肠损伤程度均显著降低(P<0.05);结肠Occludin,ZO-1蛋白表达水平均显著升高(P<0.05);肠道渗漏水平,结肠IL-6,IL-1β,TNF-α,NF-κB p65,caspase 3 mRNA表达水平,血清IL-6,IL-1β,TNF-α含量均显著降低(P<0.05)。结论人参多糖能缓解DSS诱导的UC相关疾病症状,改善小鼠机体炎性反应,降低结肠组织凋亡程度,该作用机制可能是通过抑制NF-信号通路实现的。

高效液相色谱法测定抗体中葡聚糖硫酸钠含量

目的:建立高效液相色谱法测定葡聚糖硫酸钠含量的方法。方法:采用Sepax Zenix SEC-150色谱柱(300 mm×7.8 mm,3μm),以0.01 mol/L的十二水合磷酸氢二钠、0.09 mol/L的二水合磷酸二氢钠为流动相,等度洗脱,柱温50℃,流速1.2 mL/min,进样体积40μL,激发波长320 nm,发射波长400 nm。结果:在1~100μg/mL,葡聚糖硫酸钠与峰面积线性关系良好。定量限为0.5μg/mL,加标回收率在100.5%~110.0%,重复性实验的相对标准偏差为2.67%,稳定性实验的相对标准偏差为1.07%。结论:建立的高效液相色谱方法准确、可靠,可用于抗体中葡聚糖硫酸钠含量的测定。

表没食子儿茶素没食子酸酯对葡聚糖硫酸钠诱导的小鼠结肠炎的改善作用

本研究旨在探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(Epigallocatechin-3-gallate,EGCG)对葡聚糖硫酸钠(Dextran sulfate sodium,DSS)诱导的小鼠结肠炎和肠道菌群的影响。将C57BL/6雄性小鼠分为正常对照组、肠炎模型组和EGCG处理组(50 mg/kg),每组10只,连续灌胃给药9 d。通过称取小鼠体质量,观察并记录小鼠大便黏稠度、大便出血情况,测量小鼠结肠长度和检测血清中炎症因子来评估EGCG对DSS诱导的小鼠结肠炎症的改善作用;通过分析结肠病理形态、紧密连接蛋白的表达量、肠道菌群多样性和肠道菌群结构来评估EGCG对DSS诱导的结肠炎小鼠肠道菌群的影响。结果表明,EGCG能够有效改善DSS诱导的结肠炎小鼠体质量的下降、腹泻、便血、结肠缩短等不良反应;缓解DSS诱导的小鼠结肠炎导致的全身性慢性炎症和肠道屏障损伤;改善DSS诱导的结肠炎小鼠肠道菌群紊乱,恢复肠道菌群多样性,降低厚壁菌门的相对丰度,提高拟杆菌门的相对丰度,促进有益菌Akkermansia、Alistipes和Bacteroides的增殖并抑制有害菌Desulfovibrio、Escherichia-Shigella和Helicobacter的生长。因此,EGCG通过保护肠道屏障和调节肠道菌群紊乱,从而有效改善DSS诱导的小鼠结肠炎症。

陈年武夷岩茶对葡聚糖硫酸钠诱导小鼠结肠炎的缓解作用及肠道菌群的影响

为探究陈年武夷岩茶对葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)诱导小鼠结肠炎的缓解作用,将50只雌性C57BL/6JGpt小鼠随机等分为正常对照组、DSS模型组、20年陈茶组(2001年武夷岩茶组)、10年陈茶组(2011年武夷岩茶组)和非陈茶组(2020年武夷岩茶组),分析不同武夷岩茶干预后小鼠生理和组织病理学情况,以及小鼠血清中炎症因子和盲肠内肠道菌群的变化情况。结果表明,陈年武夷岩茶均能明显缓解小鼠体质量减轻、腹泻、便血以及结肠长度缩短等症状,减少炎性细胞浸润,并能显著抑制炎症因子的分泌。此外,陈年武夷岩茶还能够缓解DSS诱导的肠道菌群紊乱,显著下调Proteobacteria、Enterobacteriaceae和Escherichia相对丰度,增加Verrucomicrobia和Akkermansia的相对丰度。综上所述,陈年武夷岩茶均具有缓解DSS诱导小鼠结肠炎的作用,其中2011年组陈年武夷岩茶优于2001年组陈年武夷岩茶,这可能是因为表没食子儿茶素没食子酸酯等儿茶素的适当氧化生成了抗氧化性更好的茶红素类物质。此外,陈年武夷岩茶能够通过调节肠道中Escherichia和Akkermansia等微生物的相对丰度,维护肠道稳态,对DSS诱导结肠炎小鼠的体质量减轻、腹泻、结肠长度缩短、黏膜及隐窝损坏、炎性细胞浸润和血清炎症因子过表达等状况起到缓解作用。

不同浓度葡聚糖硫酸钠诱导小鼠急性溃疡性结肠炎模型的评价

目的对1.5%和3.0%两种浓度葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导急性溃疡性结肠炎(UC)模型进行比较,得到病死率低且经济高效的造模方案。方法将C57BL/6J小鼠随机均分为对照组、1.5%DSS组、3.0%DSS组。对照组小鼠饮用灭菌水,DSS组小鼠饮用相应浓度的DSS溶液,连续7 d。第8~14天小鼠全部饮用灭菌水。观测小鼠便血情况,计算第1~14天疾病活动指数、体质量下降百分比和存活率。第8天处死小鼠,计算脾脏指数,测量结肠长度;HE染色观察结肠组织病理变化;免疫组化法检测结肠组织紧密连接蛋白Claudin-1和Occludin表达;免疫荧光检测结肠组织巨噬细胞比例;ELISA法测定血清和结肠组织匀浆肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平。结果与对照组比较,1.5%和3.0%DSS两组小鼠均显示出与人类UC类似的临床表现和病理学特征,结肠长度均缩短(P<0.01),结肠组织Claudin-1和Occludin表达均降低(P<0.01),脾脏指数均升高(P<0.01),结肠组织巨噬细胞比例均升高(P<0.01),血清和结肠组织匀浆TNF-α水平均升高(P<0.01)。1.5%DSS组小鼠14 d内存活率高于3.0%DSS组小鼠。结论给予小鼠1.5%浓度的DSS溶液饮用7 d可高效经济地建立急性UC模型。

石榴汁对葡聚糖硫酸钠诱导小鼠溃疡性结肠炎的作用

溃疡性结肠炎是一种发病机制尚不明确且难以根治的慢性病,在我国发病率逐年升高,其药物治疗依赖性强,副作用明显,因此寻求天然营养疗法成为人们的关注热点。本研究采用葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium salt,DSS)建立小鼠溃疡性结肠炎模型,用美沙拉嗪(130 mg/(kg m_(b)·d))和石榴汁(30%、100%(体积分数),10 mL/d)进行干预,检测小鼠体质量、疾病活动指数(disease activity index,DAI)、结肠长度,采用试剂盒检测小鼠肝肾功能指标及氧化应激水平,采用酶联免疫吸附剂测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测炎症因子水平,并对结肠组织切片观察,采用气相色谱-质谱联用(gaschromatography-mass spectrometry,GC-MS)分析小鼠粪便短链脂肪酸(short-chain fatty acids,SCFAs)含量,综合评价石榴汁对小鼠溃疡性结肠炎的作用及其机制。结果发现:与DSS组相比,石榴汁干预组小鼠体质量和结肠长度增加、DAI降低、肝肾功能改善,促炎因子表达量极显著降低(P<0.01),抗炎因子表达量极显著提升(P<0.01),氧化应激水平及炎性标志物髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)活力极显著降低(P<0.01),粪便SCFAs含量上调,结肠上皮结构改善。石榴汁能改善小鼠肠黏膜损伤和肝肾功能障碍,对DSS诱导的小鼠溃疡性结肠炎具有良好的治疗作用。

丁酸梭菌预处理对葡聚糖硫酸钠诱导的结肠炎小鼠肝脏损伤的影响

本试验旨在研究丁酸梭菌对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的结肠炎小鼠肝脏损伤的保护作用,并探究其机制。将10只C57BL/6J雄性小鼠分为CB组和DSS组,每组5只,CB组小鼠连续21 d灌胃200μL丁酸梭菌悬液(108CFU/mL),DSS组小鼠则给予等量生理盐水,而后2组小鼠通过饮水给予3%DSS 7 d诱导小鼠结肠炎,恢复3 d后测定小鼠肝脏组织中炎症因子白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量,并分析肝脏组织中转录组的变化。结果显示:丁酸梭菌预处理可减少DSS诱导结肠炎小鼠的体重、结肠长度、肝脏和脾脏重量的变化,同时改变血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)的活性;经丁酸梭菌预处理的小鼠肝脏组织结构变化较小,肝脏组织中炎症因子IL-6、IL-1β和TNF-α的含量降低。转录组学分析显示2组间肝脏组织中有575个差异表达基因,这些基因涉及的KEGG信号通路主要包括胆固醇代谢、谷胱甘肽代谢、细胞色素P450代谢和初级胆汁酸生物合成代谢,大都与脂质代谢相关。差异表达基因相对表达水平与炎症因子含量的相关性分析发现,细胞色素P450家族7亚家族B成员1(CYP7B1)和血管生成素样蛋白-8(ANGPTL8)基因相对表达水平与IL-6、IL-1β含量呈负相关;腺苷A1受体(ADORA1)、氧固醇结合蛋白样5(OSBPL5)、脂蛋白4(PLIN4)和肉毒碱脂酰转移酶1B(CPT_(1)B)基因相对表达水平与IL-6、IL-1β和TNF-α含量呈正相关。与DSS组相比,丁酸梭菌预处理后CYP7B1和ANGPTL8基因在多个通路中上调表达,而ADORA1、OSBPL5、PLIN4和CPT_(1)B基因在多个通路中下调表达。综上可知,丁酸梭菌能够有效预防DSS诱导结肠炎小鼠的肝脏损伤,其机制可能是通过调节胆固醇代谢、甘油三酯稳态和初级胆汁酸生物合成代谢相关基因的表达,降低肝脏中的炎症反应。

腺相关病毒过表达IL22可有效改善葡聚糖硫酸钠诱导的小鼠结肠炎

目的探讨白介素22(IL22)在小鼠葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium salt,DSS)诱导的急性结肠炎中的作用及其机制。方法选取8周龄雄性同窝IL22敲除小鼠(IL22-/-)及对照基因型小鼠(IL22+/+)各3只,给予2组小鼠2.5%DSS自由饮水6 d、正常饮水2 d构建小鼠急性结肠炎模型,记录小鼠体质量变化及疾病活动指数(disease activity index,DAI),干预8 d后行小鼠肠道内窥镜检查,测量2组小鼠结肠长度以及主要免疫器官脏器指数,采用Western blot检测白介素1α(IL1α)、白介素1β(IL1β)、白介素6(IL6)、肿瘤坏死因子α(TNFα)等促炎细胞因子蛋白水平表达;选取8周龄雄性C57BL/6小鼠建立腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)转染模型,给予DSS诱导结肠炎模型,设置PBS组(n=5)、AAV-mock+DSS组(n=5)、AAV-IL22+DSS组(n=5),采用免疫荧光检测各组结肠闭合小环蛋白1(ZO-1)、钙粘附蛋白(E-claudin)表达,采用Western blot检测IL22、闭合蛋白(Occludin)、信号传导及转录激活蛋白3(Stat3)、p-Stat3蛋白表达水平。结果与IL22+/+组比较,IL22-/-组小鼠在DSS诱导后第8天体质量显著降低(P<0.05),DAI评分(P<0.01)和肠镜评分显著升高(P<0.05),组织损伤加重,病理评分显著升高(P<0.01),促炎细胞因子IL1α、IL1β、cleaved-IL1β、IL6、TNFα表达上调(P<0.05)。与AAV-mock+DSS组相比,AAV-IL22+DSS组可逆转DSS诱导结肠炎,结肠组织炎症水平显著降低(P<0.05),免疫荧光结果示E-claudin表达显著升高(P<0.05),Western blot结果显示Occludin、p-Stat3表达水平显著增高(P<0.01)。结论IL22缺乏加重小鼠DSS诱导结肠炎,而通过AAV过表达IL22能增强结肠紧密连接蛋白表达,减少炎症浸润,缓解DSS肠炎,其机制可能与Jak/Stat3通路激活有关。

葡聚糖硫酸钠诱导的斑马鱼肠炎模型的初建

鱼类肠道炎症性疾病的诱因复杂,在养殖生产环节反复暴发,给水产养殖业带来巨大的经济损失。建立成体斑马鱼肠道炎症模型,可以更好地为经济鱼类肠炎的发病机理研究及治疗药物筛选提供有力的试验平台。采用口腔和肛门2种灌注方式将质量分数5%的葡聚糖硫酸钠注入斑马鱼成体中,口腔灌注组的存活率略高于肛门灌注组,诱导后第3天鱼体恢复活力,此时病理分析显示,口腔灌注能诱导出轻度炎症,而肛门灌注能诱导出轻度和中度炎症,但口腔灌注操作更简单和高效。选择口腔灌注方式动态监测葡聚糖硫酸钠对成体斑马鱼肠道组织及髓过氧化物酶活性的影响。试验结果显示,前肠和中肠对口腔灌注葡聚糖硫酸钠较为敏感,其在诱导后第1天和第3天均出现明显的肠壁局部增厚和嗜酸性粒细胞浸润现象,后肠相对迟缓,其肠壁厚度变化不明显,在诱导后第6天和第9天出现明显的嗜酸性粒细胞浸润和聚集。此外,黏膜层褶皱破损或脱落现象较为普遍,与葡聚糖硫酸钠诱导无关。肠道黏膜层杯状细胞数量对葡聚糖硫酸钠诱导有一定的应激反应,主要表现为诱导后的第1天和第3天,前肠、中肠和后肠的杯状细胞数量均明显增多并聚集于黏膜层表面,其变化趋势与肠道组织髓过氧化物酶活性较为一致。

鱼腥草对葡聚糖硫酸钠诱导小鼠溃疡性结肠炎的缓解及保护作用

目的:探究鱼腥草对葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)诱导的溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)小鼠炎症及病理损伤的缓解作用。方法:将72只雄性C57BL/6J小鼠随机分成空白组、模型组、阳性组以及鱼腥草汁低、中、高剂量组。除空白组外,其他组采用质量分数3%DSS溶液建立UC小鼠模型,造模后第4天开始灌胃给药,连续给药10 d,计算小鼠疾病活动指数(disease activity index,DAI)评分,测定小鼠结肠组织中丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、干扰素γ(interferon-γ,IFN-γ)、白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-4、IL-6、IL-10质量浓度,髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力,血清脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)水平、D-乳酸(D-lactic acid,D-La)浓度,并利用苏木精-伊红染色法观察结肠组织病理学变化。结果:与模型组相比,鱼腥草汁低、中、高剂量组整体便血情况均有所好转,精神状态较佳,中、高剂量组小鼠体质量、结肠长度极显著增加(P<0.01),胸腺指数极显著升高(P<0.01),DAI评分、脾脏指数极显著降低(P<0.01),TNF-α、IL-1β、IL-6、IFN-γ质量浓度极显著降低(P<0.01),IL-4、IL-10质量浓度极显著升高(P<0.01),MDA含量及MPO活力极显著降低(P<0.01),SOD活力极显著升高(P<0.01),血清D-La浓度和LPS水平极显著降低(P<0.01),结肠组织损伤明显减轻,病理学评分极显著降低(P<0.01)。结论:鱼腥草汁可改善DSS诱导的UC小鼠的炎症反应,降低结肠炎小鼠肠道通透性,能调节小鼠体内的氧化应激水平及缓解肠道损伤。

蚯蚓提取物对葡聚糖硫酸钠诱导小鼠溃疡性结肠炎的影响

【目的】探究蚯蚓提取物对葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)诱导的小鼠溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)的影响,为蚯蚓用于UC潜在治疗药物提供试验依据。【方法】C57BL/6小鼠自由饮用3.5%DSS溶液7 d并灌胃不同浓度的蚯蚓提取物,每日监测小鼠精神状态、体质量和大便性状;于第10天解剖,取脾脏和结肠,制作结肠组织石蜡切片并进行苏木精—伊红染色;以荧光定量PCR检测结肠组织中肿瘤坏死因子α (TNF-α)、白细胞介素6 (IL-6)、白细胞介素1β (IL-1β)和白细胞介素10 (IL-10)的m RNA表达量;以ELISA检测结肠组织中闭锁小带蛋白1 (ZO-1)、黏蛋白2 (Muc2)和咬合蛋白(occludin)的表达量。【结果】蚯蚓提取物组能减轻小鼠体质量下降程度,降低小鼠疾病活动指数评分,减少炎性细胞浸润程度,下调IL-6、IL-1β和TNF-α的mRNA表达,上调IL-10的mRNA表达以及ZO-1、occludin和Muc2的蛋白表达量。【结论】蚯蚓提取物对DSS诱导的小鼠UC具有缓解作用,小鼠结肠组织炎性损伤和UC症状减轻。蚯蚓提取物可保护结肠黏膜的完整性和改善肠黏膜屏障功能。

YT314001对葡聚糖硫酸钠致小鼠溃疡性结肠炎的保护作用和初步机制研究

目的研究拟三肽化前药YT314001对葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)诱导的小鼠溃疡性结肠炎的保护作用,并初步探讨其作用机制。方法C57BL/6小鼠随机分组,甲泼尼龙(methylprednislolne,MPS)(1 mg·kg^(-1),p.o)一日一次,JBP485(50 mg·kg^(-1),p.o)、JBP485(25 mg·kg^(-1),i.p.)和YT314001(50 mg·kg^(-1),p.o)一日两次。对照组和模型组均以等量生理盐水替代给予。小鼠自由饮用质量分数3%DSS溶液6 d,建立小鼠溃疡性结肠炎模型。对小鼠的疾病活动指数(disease activity index,DAI)、体重变化、结肠长度等进行评价,测定小鼠结肠组织的通透性、结肠组织中抗氧化因子髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)活性及促炎因子(IL-1β、IL-17、TNF-ɑ和IL-6)和抗炎因子(IL-10和TGF-β)的水平。结果口服YT314001可显著降低疾病活动指数(包括体重的变化率,大便黏稠度和大便出血),延缓结肠长度缩短,提高小鼠的存活率以及降低结肠组织损伤的程度。初步作用机制研究表明,YT314001可以减少肠道黏膜的通透性和氧化应激,不同程度地减少结肠组织中促炎因子(IL-1β、IL-17、TNF-ɑ和IL-6)水平,增加抗炎因子(IL-10和TGF-β)水平。结论YT314001对DSS诱导的小鼠溃疡性结肠炎具有保护作用,其机制可能与保护结肠通透性,抗氧化,抗炎有关。

葡聚糖硫酸钠诱导C57BL/6J小鼠急性结肠炎模型的建立与评价

目的离子通道的表达和功能受损可能是引起炎症性肠病相关性腹泻的病理生理机制之一,合适的动物模型是探讨其中详细病理生理过程的关键。本实验建立葡聚糖硫酸钠(dextran sodium sulfate,DSS)诱导的C57BL/6J小鼠急性结肠炎模型,并对其腹泻相关的临床指标、组织学指标、病理学指标及离子通道蛋白的表达进行评价。方法选择C57BL/6J小鼠,随机数字列表法分为模型组,对照组,每组6只。模型组饮用4%DSS溶液7d诱发急性结肠炎。对照组小鼠正常饮水,记录小鼠的体重、粪便含水量、粪便性状及便血情况。取小鼠全结肠,肉眼及光镜下观察结肠组织学和病理学变化,蛋白免疫印迹法检测结肠组织中离子通道SLC26A3蛋白表达。结果所有实验小鼠均存活。模型组实验结束时粪便含水量[(73.30±8.31)%]较实验开始时[(44.32±6.42)%]显著升高(P=0.004),血便、炎症活动指数DAI值(3.50±0.87)较实验开始时(1.0±0.00)显著上升(P=0.000),第5天起体重较开始时明显下降(P=0.001)。实验结束时模型组的结肠组织学大体评分(4.50±0.84)较对照组(0.16±0.14)升高(P=0.00),模型组结肠组织病理学炎症评分(3.6±0.5)较对照组(0.33±0.5)升高(P=0.002),结肠明显缩短(P<0.05),SLC26A3的蛋白表达明显下降。结论 4%DSS诱导的C57BL/6J小鼠急性结肠炎的肠道黏膜损伤和腹泻的特征与人类溃疡性结肠炎相似,离子通道蛋白SLC26A3的表达受损与腹泻同时存在,该模型可为开展关于炎症性腹泻中离子通道功能改变的机制研究提供支持。