金葡萄球菌型烫伤样皮炎综合征66例临床分析

目的探讨中西医结合治疗金葡萄球菌型烫伤样皮炎综合征的临床效果。方法选择我院儿科收治的金葡萄球菌型烫伤样皮炎综合征患儿66例,随机分为联合组和常规组各33例。常规组采用常规的西医疗法(如:抗生素、丙种球蛋白、激素等)进行治疗;联合组除使用常规方法治疗外同时给予中药洗液进行治疗。对比两组的治疗效果、住院时间、医疗费用。结果联合组的临床疗效优于常规组(P<0.05);住院时间短于常规组(P<0.01);医疗费用低于常规组(P<0.01)。结论使用中西结合的方法对金葡萄球菌型烫伤样皮炎综合征进行治疗能提高治疗效果,加速患者的临床恢复,减少医疗费用。

金黄色葡萄球菌型烫伤样皮炎综合征15例报告

金黄色葡萄球菌型烫伤样皮炎综合征是由于金黄色葡萄球菌感染引起全身皮肤广泛、弥散性发红,伴明显疼痛,皮肤松弛性起疱,或大片表皮剥脱,尼氏征阳性,皮肤表现如同大面积烫伤。我院儿科2005年7月—2008年10月共收治金黄色葡萄菌型烫伤样皮炎综合征15例,现报道如下。

细菌裂解蛋白SALy102对伪中间型葡萄球菌的抗菌活性分析

伪中间型葡萄球菌是犬、猫皮肤、耳道和伤口感染的主要病原菌之一,其耐药情况愈发严重且出现多重耐药性状。细菌裂解蛋白是一种新型抗菌物质。为探讨细菌裂解蛋白SALy102对伪中间型葡萄球菌的抗菌效果,本试验从皮肤或耳道感染的患犬中分离鉴定伪中间型葡萄球菌,采用比浊法测定SALy102的抗菌活性,绘制SALy102的时间-杀菌曲线;采用微量肉汤稀释法测定SALy102对伪中间型葡萄球菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)。结果显示,共分离鉴定出12株伪中间型葡萄球菌;SALy102对12株伪中间型葡萄球菌临床分离菌株均具有非常强的抗菌活性;时间-杀菌曲线显示,低浓度(15.63μg/mL)的SALy102也可以在1 h内快速裂解伪中间型葡萄球菌;SALy102对伪中间型葡萄球菌的MIC为32μg/mL,MBC为64μg/mL。结果表明,SALy102对伪中间型葡萄球菌抗菌作用显著,具有临床治疗犬、猫伪中间型葡萄球菌感染的潜力。

1株马乳源PVL+ST22型金黄色葡萄球菌致病性分析

国内鲜有马乳源PVL+ST22型金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)相关报道,本研究对1株新疆马乳源PVL+ST22型金黄色葡萄球菌的致病性进行评估,以期为马乳源金黄色葡萄球菌的相关研究提供基础数据。使用选择性培养基从新疆健康马乳中分离金黄色葡萄球菌,然后通过生化鉴定和分子鉴定方法对金黄色葡萄球菌进行鉴定。对所获得的金黄色葡萄球菌进行多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)、spa分型、药物敏感性检测、生物被膜形成能力、溶血活性、毒力基因检测、小鼠皮肤脓肿和致病性试验。再对分离株进行小鼠细胞的黏附、侵袭和胞内增殖试验,以评估其致病性。结果显示,从马乳中分离得到1株PVL+ST22型金黄色葡萄球菌(1/65,1.5%),spa分型为t304。仅对青霉素耐药,无生物被膜形成能力,但携带9种毒力基因(sec、seg、seh、tsst-1、hla、hlb、clfA、clfB和cna),并且具有溶血活性。小鼠皮肤脓肿和致病性试验表明,其可导致小鼠形成皮肤脓肿,并且在高剂量感染时可导致小鼠死亡。ST22型金黄色葡萄球菌可在小鼠巨噬细胞中黏附(4.26%)、侵袭(6.45%)和胞内增殖,并可造成细胞凋亡。综上,马乳源PVL+ST22型金黄色葡萄球菌具有较强的致病力,可能在宿主致病和公共卫生安全等方面存在隐患。

牡丹鹦鹉眼型葡萄球菌病的诊疗

衡水某养殖场饲养的牡丹鹦鹉于38日龄表现精神沉郁,羽毛蓬乱,颈部与翅膀羽毛脱落,采食下降,呆立一隅,不爱活动。部分鹦鹉双侧或单侧眼结膜红肿、流泪、眶下窦肿胀。通过临床观察、病理剖检及实验室细菌分离培养、生化试验及兔血浆凝固酶试验,诊断为眼型葡萄球菌病。选用临床常用的6种药物进行的敏感试验结果表明丁胺卡那霉素高度敏感,而青霉素、氟哌酸、庆大霉素、红霉素、先锋V不敏感。选用丁胺卡那霉素对发病鹦鹉滴眼并肌肉注射,3 d后病情得到控制。本文为牡丹鹦鹉等珍稀禽类葡萄球菌病的防治提供了重要参考。

生产群奶牛金黄色葡萄球菌毒素基因检测及PFGE分型研究

隐性乳房炎患牛与健康牛外观无异,不易判断,对奶牛业造成的损失严重。金黄色葡萄球菌是引起隐性乳房炎的重要病原菌,准确判断金黄色葡萄球菌型隐性乳房炎是预防和控制乳房炎的重要途径。目前国际上普遍采用乳中体细胞数(SCC)作为检测隐性乳房炎的主要指标,但是约40%的金黄色葡萄球菌型乳房炎牛乳汁中SCC低于20万/mL。笔者依据相邻两月SCC差值高低,采集两个奶牛场荷斯坦牛生产群第一胎泌乳牛奶样65头份,从中检出有6头份含金黄色葡萄球菌。用PCR方法扩增金黄色葡萄球菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的特异基因nuc和mecA,结果发现,nuc基因检出率为100%(12/12),未检测到mecA基因。进一步用多重PCR方法检测金黄色葡萄球菌各种毒素基因,其中PVL基因在高SCC与低SCC奶样中的检出率分别为33.3%和100%,差异显著,这可能与PVL破坏白细胞有关。PFGE分型结果表明,所检测到的金黄色葡萄球菌可分为4个簇、5种类型,其中P2型(PVL)为流行株。结果提示,在荷斯坦牛生产群中,如果奶牛产奶量有所下降而SCC也不高时,应辅以分子检测手段来判断是否患有金黄色葡萄球菌型隐性乳房炎。

重组葡萄球菌B型肠毒素超抗原的制备及抗肿瘤活性分析

目的 采用基因工程技术制备葡萄球菌B型肠毒素 (SEB) ,并对其体内外抗肿瘤活性进行分析。方法 对SEB在大肠杆菌中进行高效表达和分离纯化 ,并对其超抗原活性和免疫学活性与天然SEB进行比较研究。观察重组SEB对人肝癌细胞的体外抑制作用 ,以及对小鼠肝癌和肉瘤的体内抑瘤效果。结果 SEB获得高效表达 ,并一步将其纯化至均质。与天然毒素相比较 ,重组SEB的免疫学活性与超抗原活性基本相似。首次证明 ,即使SEB的浓度为 10ng/L ,仍然对人肝癌细胞有显著地抑制作用 ,其对小鼠体内的肝癌和肉瘤有一定的抑制作用。结论 重组SEB在体内外均有一定肿瘤抑制作用 。

金黄色葡萄球菌稳定L型DNA的提取及酶切

本文从一例恶性淋巴瘤合并金黄色葡萄球菌Ｌ型败血症患者的骨髓内分离得到金黄色葡萄球菌稳定Ｌ型，用玻璃微珠机械研磨方法提取ＤＮＡ，纯化后被ＥＣＯＲＩ酶切，酶切ＤＮＡ片段可用于核酸杂交等分子物生学研究。

广东省宠物源伪中间型葡萄球菌的耐药性调查研究

为调查广东省宠物源伪中间型葡萄球菌(Staphylococcus pseudintermedius)的携带和耐药情况,从小动物临床采集皮肤、耳部和鼻腔等部位的样品,分离鉴定伪中间型葡萄球菌,并采用琼脂稀释法和纸片扩散法对伪中间型葡萄球菌进行抗菌药物敏感性检测,采用PCR方法检测mecA基因。结果表明,从898个样品中共分离到144株伪中间型葡萄球菌,检出率为16.0%,皮肤、耳部和鼻腔的伪中间型葡萄球菌检出率分别为20%(64/319)、17.8%(64/359)和7.5%(3/40)。抗菌药物敏感性检测和mecA基因检测结果显示有89株(61.8%)为耐甲氧西林伪中间型葡萄球菌(MRSP)。伪中间型葡萄球菌对氨苄西林、红霉素、阿奇霉素、克林霉素和四环素的耐药率均在80%以上,对利福平和阿米卡星的耐药率低于8%,对万古霉素、利奈唑胺、喹奴普汀/达福普汀和替考拉宁均敏感。大部分(>69%)MRSP对红霉素、克林霉素、泰乐菌素、阿奇霉素、复方新诺明、四环素、环丙沙星和恩诺沙星等抗菌药物表现耐药。本研究结果表明宠物源伪中间型葡萄球菌的耐药情况严重且MRSP的检出率高,应高度重视宠物源细菌耐药问题。

金黄色葡萄球菌L型对肿瘤组织和培养细胞影响的研究

目的探讨金黄色葡萄球菌(金葡菌)L型感染对C57小鼠肿瘤组织和体外培养猴肾细胞的影响。方法用金葡菌L型感染C57小鼠及猴肾细胞,再用革兰氏染色、免疫组化染色和聚合酶链反应(PCR)检测C57小鼠肝组织及诱发的小鼠肿瘤组织中金葡菌L型阳性率,并观察感染后猴肾细胞的病理形态学变化。结果C57小鼠肝组织及肿瘤组织中金葡菌L型感染率分别为0%(0/10)和70%(7/10),L型抗原表达率分别为0%(0/10)和70%(7/10);金葡菌L型DNA阳性表达率分别为0%(0/10例)和70%(7/10例)。猴肾细胞感染L型原生小体后体外培养48h部分出现空泡样变样(类似病毒感染后的形态学变化),局部区域细胞密集(轻度增生)。结论金葡菌L型DNA已在感染的体内、外细胞内出现,且在诱发的肿瘤细胞内表达显著增高,推测其在诱发体细胞增生和癌变中起重要作用,很可能和病毒的致瘤机理相似。

产A型肠毒素金黄色葡萄球菌的筛选及其重组表达

目的分离产A型肠毒素金黄色葡萄球菌标准株,克隆和表达金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA),研究其生物学特征。方法应用PCR扩增SEA基因片段,与克隆载体pGEMT-easy连接,亚克隆到表达载体pET-28a中,转化大肠杆菌BL21(DE3),经诱导表达和纯化重组蛋白,用重组蛋白免疫小鼠获得抗血清,进行重组蛋白免疫原性分析。结果成功克隆SEA全长基因,经DNA序列分析证实与GenBank收录序列具有100%的同源性。表达蛋白相对分子质量为31000,以包涵体形式存在。纯化、复性后获得有活性的rSEA蛋白,rSEA蛋白能够识别天然的SEA。结论SEA基因成功克隆到表达质粒内并表达,rSEA具备抗原性,为制备单抗、诊断试剂及金黄色葡萄球菌致病机制研究奠定了基础。

北京地区警犬皮肤伪中间型葡萄球菌药敏试验及耐药基因筛查

采用纸片扩散法对北京地区警犬皮肤分离出的23株伪中间型葡萄球菌进行药物敏感性试验,并用PCR扩增技术进行相关耐药基因筛查。结果显示:23株伪中间型葡萄球菌对头孢西丁、阿米卡星、阿莫西林-克拉维酸、头孢曲松、氟苯尼考全部敏感,对青霉素G耐药性最高,为52.17%;耐药基因筛查中,3株未检出耐药基因,占13.04%;耐药基因中,linA/linA’检出率最高,为47.83%;耐药基因谱型以aacA-aph D、linA/linA'为主,占17.39%。

葡萄球菌A型肠毒素检测竞争ELISA方法的建立

为建立快速、灵敏、特异的检测食品中金黄色葡萄球菌A型肠毒素的方法,应用构建的pGEX-6P-SEA、pET28α-SEA重组质粒表达带有不同融合肽的葡萄球菌A型肠毒素,分别通过谷胱甘肽亲和纯化、镍螯合纯化获得SEA的重组融合表达蛋白HIS-SEA、GST-SEA,以HIS-SEA为包被抗原,以GST-SEA、天然SEA肠毒素为竞争抗原,确立了SEA型肠毒素ELISA检测的工作条件:包被浓度为2.5μg/mL,阳性血清稀释度为1∶50,辣根过氧化物酶标记的羊抗鸡免疫球蛋白工作浓度为1∶2000。建立了以重组肠毒素GST-SEA作为竞争抗原检测葡萄球菌肠毒素SEA的间接竞争ELISA(ciELISA)方法,竞争肠毒素GST-SEA蛋白浓度x与P/N值y的关系式:x(GST-SEA)=1.99-y/0.34,R2(GST-SEA)=0.9964,线性检测范围均为1～62.5ng/mL,最低检测量为1ng/mL,此方法丰富了食品中A型肠毒素的检测手段。

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌基因型及其与耐药性的关系

目的 :了解耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 (MRSA)基因型及其与耐药性的关系 ,为MRSA感染的治疗选药及分子流行病学研究提供实验依据。方法 :用聚合酶链反应 (PCR)方法扩增MRSAmec基因高变区 (HVR) ,据扩增片段大小差异进行基因分型 ,结合 5种抗菌药物的MIC值 ,分析基因型与耐药性的关系。结果 :86株MRSA被分为A、B、C、D 4种基因型 ,以A(5 2 .3%)、D(39.5 %)型多见 ,B、C型少见 ,但后 2型耐药性更高 ,各型菌均对万古霉素敏感。结论 :治疗MRSA感染以选万古霉素 ,或联合阿米卡星、利福平为宜 ,HVR基因分型可作为MRSA感染分子流行病学研究的新手段。

原位杂交检测子宫内膜癌中金黄色葡萄球菌L型DNA

目的 研究细菌L型感染与子宫内膜腺癌的相关性。方法 用革兰染色、免疫组化和DNA核酸探针原位杂交等方法 ,对 6 6例子宫内膜腺癌 ,30例子宫内膜增生症进行检测。结果 子宫内膜腺癌和内膜增生症中革兰氏染色细菌L型阳性率分别为 5 4 5 % ,5 6 7% ;免疫组化染色 (S -P法 )检测阳性率分别为 5 6 1%和 6 0 6 % ;2 0例子宫内膜腺癌标本 ,用金黄色葡萄球菌 (金葡菌 )L型地高辛标记的核酸探针作原位杂交 ,结果发现 45 %的宫内膜腺上皮细胞核内显示有金葡菌L型DNA阳性颗粒。结论 提示细菌及其L型可侵入子宫内膜腺上皮细胞 ,导致细胞异常增生甚至肿瘤发生。证明子宫内膜腺癌的发生与细菌L型感染有一定的相关性。

金黄色葡萄球菌L型对胆囊癌细胞的致病变研究

目的研究金黄色葡萄球菌L型对胆囊癌细胞(GBC-SD)的致病变作用。方法金葡菌L型感染GBC-SD细胞后,采用光学显微镜、透射电子显微镜及PCR检测其能否侵入细胞,采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色(MTT)法、增殖细胞核抗原(PCNA)法检测其能否促进细胞增殖,采用基因芯片检测其引起的细胞基因改变。结果PCR检测以及光镜、电镜拍照显示金葡菌L型能够粘附并且进入GBC-SD细胞,MTT法、PCNA检测表明金葡菌L型能够促进GBC-SD细胞增殖。基因芯片结果显示金葡菌L型作用后的GBC-SD细胞有15个基因表达异常,取表达上调基因含表皮生长因子组件粘蛋白类似激素受体2(EMR2)、表达下调基因细胞外基质蛋白2(ECM2)进行RT-PCR法验证,与基因芯片结果符合。结论金葡菌L型能够进入GBC-SD细胞中并促进其增殖,引起细胞EMR2基因上调、ECM2基因下调,提示金葡菌L型可能与胆囊癌的发生、发展存在一定相关性。

金黄色葡萄球菌M型肠毒素原核表达、纯化、鉴定及溶液构象分析

葡萄球菌肠毒素M是由金黄色葡萄球菌νSa基因岛编码的分泌型超抗原。本研究将截去N端信号肽的金黄色葡萄球菌M型肠毒素(staphylococcal?enterotoxin?M,SEM)蛋白编码基因亚克隆至原核表达载体p ET-28a(+),构建重组表达质粒p ET-28a(+)-ΔNspsem;随后转化感受态E.coli?Rosetta(DE3)并探讨融合蛋白最佳表达条件;利用Ni2+-Sepharose?4?Fast?Flow亲合层析纯化出His-ΔNsp SEM融合蛋白;经质谱鉴定,纯化的融合蛋白对SEM的氨基酸覆盖率达96.3%;凝血酶切除6×His标签肽后,圆二色谱分析表明ΔNsp SEM重组蛋白富含β-折叠(35%)和β-转角(21%)以及较少α-螺旋(16%)等二级结构;荧光发射谱揭示ΔNsp SEM在278?nm和295?nm波长处激发时具有相同的Trp发射峰(341?nm);十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳分析表明ΔNsp SEM重组蛋白表现出较高的热稳定性。研究结果表明重组蛋白SEM表达成功,纯化的ΔNsp SEM重组蛋白溶液构象紧密并具有接近天然状态的结构,这为深入研究SEM蛋白的结构与功能提供理论支持。

原核表达的葡萄球菌D型肠毒素超抗原的纯化及其促淋巴细胞增殖作用

目的 纯化原核表达的葡萄球菌D型肠毒素 (StaphylococcalenterotoxinD ,SED) ,检测其促淋巴细胞增殖活性 ,为SED免疫识别研究奠定基础。方法 用Ni2 + NTA金属螯合亲和层析法纯化 6×His SED融合蛋白 ,SDS PAGE和毛细管电泳检测蛋白纯度 ,BCA法进行定量 ,以3H TdR掺入法检测纯化的SED对人和小鼠淋巴细胞的促增殖活性。结果 获得可满足后续功能实验纯度较高的蛋白质 ;SED对人淋巴细胞的促增殖作用呈质量浓度依赖关系 ,0 .1μg mL时 ,细胞增殖最明显 ;淋巴细胞的增殖与IL 2分泌水平呈正相关。