葡萄球菌染色体mec盒多位点复合PCR分型测定

目的研究用多位点复合PCR分型法高效、快速、准确地测定金黄色葡萄球菌SCCmec型别。方法采用正交设计和平行对比分析,对影响测定结果的退火温度、延伸时间,MgCL2、dNTP、Taq DNA聚合酶、引物的用量进行了测试。结果获得多位点PCR测定的最佳退火温度为55℃、延伸时间为1 min,以及MgCl2、dNTP、TaqDNA聚合酶和各位点引物的最佳用量。结论多位点PCR测定是一种高效、快速、实用的SCCmec分型方法,可用于大规模的MRSA分子流行病学研究。

社区和医院获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌MLST联合SCCmec基因分型及耐药性比较

目的了解社区获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(CA-MRSA)和医院获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(HAMRSA)分离株的耐药性及遗传背景。方法对CA-MRSA和HA-MRSA进行多位点序列分型(MLST)检测,应用多重聚合酶链式反应(PCR)技术对CA-MRSA和HA-MRSA进行SCCmec基因分型;采用Walk WAY96PLUS PC33药敏板联合K-B纸片扩散法检测CA-MRSA和HA-MRSA抗菌药物敏感性。结果 63株HA-MRSA共检测出2个基因型,4株CA-MRSA共检测出4个基因型,二者遗传背景完全不同。HA-MRSA对红霉素、克林霉素、四环素、庆大霉素、左氧氟沙星和环丙沙星耐药率显著高于CAMRSA(均P<0.05)。结论滨州医学院附属医院CA-MRSA和HA-MRSA分型及主要流行株存在差异,CA-MSSA药物敏感性明显高于HA-MRSA;MLST联合SCCmec基因分型方法是MRSA分子流行病学分析的有效方法。

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌MLST联合SCCmec基因分型与耐药性分析

目的了解滨州医学院附属医院MRSA菌株多位点序列分型(MLST)联合SCCmec基因型分布和各种基因型的耐药特征。方法采用聚合酶链反应(PCR)对MRSA菌株进行MLST联合SCCmec基因分型;采用Walk WAY96PLUS PC33药敏板检测MRSA抗菌药物敏感性。结果 SCCmec基因分型结果以Ⅲ型为主(63/67株,占94.03%),MLST分型共检测出6种基因型:ST88、ST121、ST221、ST82、ST239及ST399,其中以ST239(61/67,91.04%)为主,耐药性分析显示SCCmecⅢ型MRSA菌株表现为多重耐药。结论ST239-MRSA-SCCmecⅢ型菌株为鲁北地区MRSA主要流行菌株,该型菌株对多种抗生素呈多重耐药;MLST联合SCCmec基因分型方法是MRSA遗传背景研究简便快速的方法。

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药性,SCCmec分型及毒素基因的检测

目的调查北京大学第一医院致病性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌SCCmec分型情况、耐药状况、PVL、TSST-1基因携带率,初步了解临床耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的耐药原因,为临床感染控制提供依据。方法收集2007年9月至2008年3月住院患者首次分离的53株有致病意义MRSA,用全自动微生物分析仪进行药敏试验,应用PCR方法检测MRSA的SCCmec基因型、PVLT、SST-1基因。结果53株MRSA呈多重耐药特点,SCCmec分型以ⅢA为主(47.2%),PVL基因均为阴性,12株(22%)MRSA TSST-1阳性。结论53株MRSA的多重耐药性与SCCmec结构密切相关,SCCmec分型技术是探索MRSA多重耐药性与耐药结构有效的分子生物学手段,TSST-1基因阳性株在临床分离的金黄色葡萄球菌中占有较高的比例。

医院感染甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌的SCCmec分型及同源性研究

目的研究多重耐药的甲氧西林耐药金葡菌（MRSA）菌株的SCCmec基因分型,并对菌株进行同源性分析。方法纳入26株耐药谱相同的MRSA菌株,采用多重PCR检测SCCmec的分型;应用Rep-PCR法采用DiversiLb系统对菌株进行同源性分析。结果 26株MRSA的SCmec多数为Ⅲ型,占84.6%,另检出Ⅱ型2株、Ⅳ型1株,1株未能分型;未发现I型SCCmec。DiversiLab分析结果显示MRSA可分为10组,同源性介于40%～100%。其中SCCmee-Ⅱ亚型2株完全相同。SCCmec-Ⅲ亚型subtype 1型相似性在90%以上;subtype 3型4株为同一组、MRSA相似性在95%以上;subtype 2型可分为5组,相似性在90%以上。结论医院感染多重耐药的MRSA多数以SCCmec-Ⅲ型为主,医院内存在一定流行,应引起临床医师及感染控制部门重视。

合肥地区耐甲氧西林金黄色葡萄球菌SCCmec分型及耐药性分析

目的 研究合肥地区临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)携带mec基因簇的葡萄球菌盒式染色体(SCCmec)分型及药物敏感性,了解合肥地区MRSA流行株的耐药表型和分型特征。方法 从5所教学医院随机选取2016年1月至2021年12月的264株非重复MRSA菌株,利用头孢西丁纸片扩散法筛选MRSA,采用PCR扩增mec A基因,采用多重PCR进行MRSA的SCCmec分型分析。采用WHONET 5.6软件分析不同SCCmec型别MRSA菌株对抗菌药物的敏感性。结果 264株MRSA菌株中,SCCmecⅡ型156株(59.1%),Ⅳa型92株(34.8%),Ⅲ型4株(1.5%),12株(4.5%)未分型。SCCmecⅡ型和Ⅳa型MRSA对达托霉素、替加环素、利奈唑胺和万古霉素的敏感率均为100.0%。SCCmecⅡ型MRSA对环丙沙星、左氧氟沙星、莫西沙星和庆大霉素的耐药率高于SCCmecⅣa型,差异均有统计学意义(P均<0.05)。不同分型的MRSA菌株对红霉素、克林霉素、四环素、复方磺胺甲唑和利福平的耐药率差异无统计学意义(P均>0.05)。结论 合肥地区MRSA菌株SCCmec分型以Ⅱ型和Ⅳa型为主,不同分型MRSA对某些抗菌药物的耐药性存在差异,动态监测这类细菌的分型和药物敏感性有一定临床意义。

老年病房耐甲氧西林金黄色葡萄球菌葡萄球菌染色体mec基因盒基因型和杀白细胞素基因的检测及特点

目的了解复旦大学附属华东医院老年科临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)葡萄染色体mec基因盒(SCCmec)的分布和杀白细胞毒素(PVL)基因的携带状况。方法收集复旦大学附属华东医院老年科病房2011年2—7月从临床标本中分离的不重复MRSA共57株。运用多重聚合酶链反应检测金黄色葡萄球菌16SrRNA基因、PVL基因和mecA基因,并同时检测SCCmec的基因型及亚型。采用琼脂稀释法进行13种药物的药物敏感试验。结果 57株MRSA中,SCCmecⅠ型1株(1.8%),SCCmecⅠA型5株(8.7%),SCCmecⅡ型30株(52.6%),SCCmecⅢ型15株(26.3%),SCCmecⅢA型2株(3.5%),4株(7.0%)未能分型。57株MRSA中,PVL基因均为阴性。MRSA菌株最敏感的药物为万古霉素和利奈唑胺(敏感率均为100.0%),其次为呋喃妥因和甲氧苄啶-磺胺甲口恶唑(98.2%、96.5%)。结论复旦大学附属华东医院老年科临床分离的MRSA呈多重耐药,其SCCmec型别主要以SCCmecⅡ型和SCCmecⅢ型为主,未发现PVL基因阳性菌株。

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药性变迁及SCCmec基因分型

目的分析2011~2013年北京友谊医院耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）耐药谱变迁;了解其葡萄球菌盒式染体色mec（SCCmec）基因型分布特点。方法使用WHONET 5.6软件对2011至2013年间MRSA药物敏感结果进行数据分析。收集2013年3月至2013年10月首都医科大学附属北京友谊医院临床检验中心细菌室分离的非重复MRSA 30株,采用多重聚合酶链反应（PCR）对其进行SCCmec基因型分型。结果 2011~2013年3年的调查显示,临床标本中共分离出1 133株金黄色葡萄球菌检出MRSA 662株,检出率58.4%,3年检出率成逐渐上升趋势。MRSA检出标本来源于痰液及咽拭子最多,其次为血液、脓分泌物和尿液标本。MRSA主要分布在ICU、医保中心和急诊。662株MRSA对青霉素均为100%耐药,红霉素、克林霉素、庆大霉素、四环素耐药率均〉80%,环丙沙星、莫西沙星、左氧氟沙星耐药率97.2%~95%和96.7%~88.8%和97.2%~95.4%,对呋喃妥因、复方新诺明较敏感,耐药率〈10%,3年中未发现对万古霉素、替加环素,喹努普汀/达福普汀、利奈唑胺耐药菌。检出SCCmec III型有27株,检出率为90.0%;其余3株为未分型菌株,占10.0%。结论本次MRSA耐药监测中,其对万古霉素、利奈唑胺、替加环素均保持着高度敏感性,对呋喃妥因、复方新诺明较敏感,耐药率〈10%。其SCCmec基因分型以SCCmecⅢ型为主,与国内多数地区、医院报道的以SCCmecⅢ型为主相符。

广东省耐甲氧西林金黄色葡萄球菌SCCmec分型研究

目的分析本地区分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)葡萄球菌盒染色体mec(SCCmec)类型。方法利用3套多重PCR体系扩增耐甲氧西林金黄色葡萄球菌SCCmec型特异性位点、共同位点、鉴别位点、内参照位点以及mec基因复合物和ccr基因复合物进行SCCmec分型。结果分离的156株MRSA中,6株MRSA不能分型,可分型率为96.2%。其中,Ⅲ型SCCmec 125株,占83.3%,Ⅱ型SCCmec 11株,占7.3%,Ⅳ、Ⅴ型SCCmec各7株,占4.7%。结论本地区分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌流行携带最多耐药基因的Ⅲ型SCCmec。

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的两种新SCCmec型别及其抗药性研究

为探明本地区耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)的耐药性、流行病学分布状况及携带的葡萄球菌染色体mec盒(SCCmec)型别,用K-B琼脂扩散法、E-test和多位点PCR,对临床分离的金黄色葡萄球菌菌株进行了SCCmec分型及耐药性测定。结果发现了两种新的SCCmec型别,新1型含Ⅱ型的mecA上游特异性位点B和位于mecA内的M位点以及Ⅲ型的下游位点F,缺乏Ⅱ型上游位点C和下游位点D、G;新2型含Ⅰ、Ⅱ型的上游特异性位点A、B和两个Ⅲ型的下游位点F、H,同样缺乏位点C、D、G,可能分别为原有Ⅱ型和Ⅰ、Ⅱ型与Ⅲ型的基因重组株;且携带有新SCCmec型别的MRSA菌株,其流行病学分布特点及抗药性也与国外已报导的菌株不同,多分自门诊病人,且耐药性高,抗药谱广,值得引起高度重视和关注。

鄂尔多斯地区蒙古族人群耐甲氧西林金黄色葡萄球菌基因分型

目的：探讨鄂尔多斯地区蒙古族人群耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的分子流行病学特点，明确本地区MRSA基因型别及其分布规律。方法收集2009年1月至2011年8月临床分离的MRSA菌株54株。应用多重聚合酶链反应（PCR）对MRSA菌株进行葡萄球菌染色体mec（SCCmec）基因分型、杀白细胞毒素（PVL）毒力基因（pvl）和多位点序列分型（MLST）检测。结果 MRSA菌株的SCCmec Ⅰ～Ⅴ基因分型分别占0．00％、50．00％、46．30％、1．85％和1．85％；检测出1株pvl基因阳性；24株MRSA菌株MLST分型显示，ST23913株（54．17％），ST59株（37．50％），ST59和ST7各1株（4．17％）。结论鄂尔多斯地区蒙古族人群MRSA菌株以SCCmec Ⅱ型和SCCmecⅢ型为主。

社区获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌基因分型及耐药性研究

目的了解社区获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(CA-MRSA)分离株的耐药性及遗传背景。方法对CA-MRSA进行多位点序列分型(MLST)检测,采用应用多重聚合酶链式反应(PCR)技术对CA-MRSA进行SCCmec基因分型;采用微量稀释法检测CA-MRSA抗菌药物敏感性。结果 76株社区获得性金黄色葡萄球菌共检测出4株CA-MRSA,分别为4个基因型,分别为ST88-MRSA-Ⅳa;ST121-MRSA-Ⅳa;ST221-MRSA-Ⅳa;ST82-MRSA-Ⅳa;CA-MRSA对非β-内酰胺类抗生素多为敏感。结论滨州医学院附属医院分离到4株CA-MRSA,表明已有CA-MRSA的散发流行,但没有发现与国际主要CA-MRSA流行株相同克隆株的发现,MLST联合SCCmec基因分型方法是CA-MRSA分子流行病学研究简便快速的方法。

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药机制与分子分型研究进展

自1961年Jevons首次分离出耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）以来,MRSA在世界各地的感染率和分离率不断增加,目前已成为医院、社区感染的主要病原菌之一。由于MRSA对所有β-内酰胺类抗菌药物（青霉素类、头孢菌素类和碳青霉烯类）均耐药,因此,MRSA也被称为＂超级细菌＂。由于抗菌药物的不合理使用,导致MRSA耐药谱越来越广,尤其是多重耐药,给临床治疗带来了极大的困难。

临床分离耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的耐药基因分型及药敏性分析

目的分析临床分离耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的耐药基因分型及药敏性。方法选择2018年3月至2020年7月南京市高淳人民医院住院及门诊患者各类临床标本中分离的254株金黄色葡萄球菌(SA)。采用普通聚合酶链式反应(PCR)检测mecA基因,采用多重PCR技术对MRSA分离株进行葡萄球菌染色体mec基因盒(SCCmec)基因分型,采用纸片扩散法(K-B)法对SCCmecⅡ型与SCCmecⅢ型进行药敏试验。结果头孢西丁K-B结果显示,254株SA中共检出156株初筛MRSA阳性株,MRSA初筛阳性率为61.42%。mecA基因PCR扩增结果显示,254株中共检出150株MRSA确认阳性株,检出率为59.06%。多重PCR结果显示,150株MRSA中SCCmecⅡ型39株,SCCmecⅢ型86株,SCCmecⅣa、SCCmecⅣb型各2株,未分型21株。SCCmecⅡ型与SCCmecⅢ型对苯唑西林、氨苄西林/舒巴坦、头孢西丁、美罗培南、青霉素G、头孢唑林的耐药性均为100.00%,SCCmecⅢ型对环丙沙星、红霉素、克林霉素、氯霉素、庆大霉素、四环素、利福平的耐药性均高于SCCmecⅡ型(P<0.05)。结论采用多重PCR技术检测150株临床分离的MRSA以SCCmecⅢ型为主,其次为SCCmecⅡ型,且两种SCCmec基因分型的耐药菌谱具有多样性。

我国延边地区金黄色葡萄球菌分子特征研究

目的研究我国延边地区金黄色葡萄球菌(金葡菌)的分子流行病学特点。方法收集2011年3月—2012年6月吉林省延边大学附属医院连续分离的金葡菌非重复株101株,通过PCR联合测序进行葡萄球菌染色体mec(SCCmec)分型、葡萄球菌A蛋白(spa)分型、多位点序列分型(MLST)并进行pvl基因检测。结果 SCCmec分型:以Ⅱ型为主(39/60;65.0%),其次是Ⅲ型(16/60;26.7%);spa分型:甲氧西林耐药金葡菌(MRSA)有11种,其中t2460为33株(55.0%),t030为11株(18.3%),t002、t324、t632均为3株(5.0%)。甲氧西林敏感金葡菌(MSSA)共分出29种不同的型:t796为6株(14.6%),t309为4株(9.8%),t126为3株(7.3%);共检出pvl基因阳性5株;MLST检测:MRSA共有3种分型,ST5,ST239,ST72。MSSA分型具有多样性:ST5,ST25,ST15,ST59,ST1,ST7,ST45,ST22,ST188。结论延边地区MRSA的主要克隆株为ST5-MRSA-SCCmecII-t2460和ST239-MRSA-SCCmecIII-t030,MSSA显示多克隆性。

宁夏地区耐甲氧西林金黄色葡萄球菌分子流行病学研究

目的调查临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的染色体m ec基因盒(SCCm ec)分型及杀白细胞素(PVL)的pvl基因携带率,初步了解宁夏地区MRSA分子流行病学特点。方法对2005年9月至2008年1月从临床标本中分离的MRSA菌株进行pvl基因检测,并应用多重聚合酶链反应(PCR)对MRSA菌株进行SCCm ec分型。结果 88株MRSA菌株中pvl基因阳性菌株8株(9.1%),SCCm ec分型结果为Ⅲ型86株(97.7%)、Ⅱ型2株(2.3%)。结论宁夏地区分离的MRSA菌株SCCm ec分型以Ⅲ型为主,SCCm ec分型是探索MRSA多重耐药性有效的分子生物学手段。

广州地区耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的分子流行病学研究

目的对广州地区2008年分离的132株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）进行基因分型研究，以了解当年广州地区MRSA的流行情况。方法联合采用多位点序列分型（MLST）以及金黄色葡萄球菌染色体mec盒分型（SCCmec）方法对以上菌株进行基因分型。结果132株MRSA中有123株是ST239-MRSA—Ⅲ型；另外，也分别检测到3株是ST239-MRSA—ⅢA型、2株是ST865-MRSA—Ⅲ型、1株是ST864-MRSA—Ⅳ型、1株是ST188-MRSA-I型以及ST217-MRSA—Ⅳ型1株。结论ST239-MRSA—Ⅲ型是广州地区2008年MRSA分布的主要菌型。

医院获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的分子流行病学研究

目的对2003年以来连续收集的122株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）进行染色体盒mec元件（SCCmec）分型。方法用K-B法药敏试验常规进行抗生素敏感试验；按NCCLS标准，用琼脂板稀释法测定MRSA对苯唑西林的MIC值；用多重PCR方法对MRSA染色体盒mec元件的结构及其变异情况进行分型分析，对MRSA进行分子分型。结果122株MRSA对青霉素及环丙沙星均耐药，苯唑青霉素的MIC为64～1024mg／L，对红霉素、四环素、甲氧苄啶／磺胺甲嗯唑、克林霉素的耐药率分别为92％、95％、45％及47％，对万古霉素全部敏感；122株MRSA中有115株属于SCCmec-Ⅲ型，4株属于SCCmec-ⅢA亚型，1株属于SCCmec-Ⅳ型，1株属于SCCmec-Ⅰ型，1株属于未定型株（NT SCCmec型）。结论多数MRSA菌株对所用抗生素呈多药耐药；用多重PCR方法对MRSA进行分子分型，是基于对MRSA耐药基因mec A的结构进行分析的一种分型方法，方便快速，结果可靠，是MRSA分子分型的有效工具，对从基因水平阐述隐含的耐药机制及MRSA的耐药性变迁具有重要价值。

95例住院患儿耐甲氧西林金黄色葡萄球菌分离株的分子流行病学特征及药物敏感性

目的研究深圳地区住院患儿耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)分离株的分子分型及对非β内酰胺类抗菌药物的耐药情况,为临床合理用药提供依据。方法常规方法分离培养获得金黄色葡萄球菌327株,经鉴定,MRSA 95株;利用分子生物学方法对95株MRSA进行了SCCmec分型、多位点序列分析(MLST)和spa分型,利用仪器法分析其对非β类酰胺类抗菌药物的耐受情况。结果95株MRSA共有7种SCCmec基因型,其中SCCmecⅠ型1株,SCCmecⅡ型4株,SCCmecⅢ型17株,SCCmecⅣa型65株,SCCmecⅣb型2株,SCCmecⅣd型4株,SCCmecⅤ型2株。MLST为10种ST型,其中46株为ST59型,占48.42%;另外49株MRSA分别是ST45型13株,占13.68%;ST1型和ST338型各12株,分别占12.63%;ST72型和ST398型各3株,分别占3.16%;ST88型2株,占2.11%;ST25型、ST47型和ST630型各1株,分别占1.05%;还有1株未能分型;eBURSTv3软件分析表明,10种ST型属于6个克隆群,其中CC59约占61.05%(58/95),CC5约占16.84%(16/95),CC45约占14.74%(14/95)。21种spa型,其中t437型51株(53.68%),是最主要的spa型,其次为t114型9株、t116型8株,分别占9.47%和8.42%;ST59-SCCmecⅣa-t437共有33株,约占34.74%,是最主要的流行克隆;其次是ST45-SCCmecⅣa-t116共有7株,约占7.36%。未发现对环丙沙星、庆大霉素、左氧氟沙星、利奈唑胺、莫西沙星、呋喃妥因、奎奴普汀、替加环素和万古霉素耐药菌株;对克林霉素(82.10%)、红霉素(82.10%)、利福平(15.78%)、四环素(41.05%)和复方磺胺甲噁唑(3.15%)等抗菌药物分别有不同程度的耐药。结论深圳地区儿童感染MRSA的优势菌株为ST59-SCCmecⅣa-t437型;MRSA菌株对β内酰胺类、林可霉素类、大环内酯类和四环素类呈多重耐药的比例高;未发现对万古霉素、利奈唑胺等耐药菌株。

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌基因诊断及多重PCR SCCmec基因分型方法的建立

目的建立对临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)基因诊断和金黄色葡萄球菌染色体mec基因盒(SCCmec)基因分型的方法。方法对临床分离的11株金黄色葡萄球菌采用双重PCR(femA和mecA)鉴定,再将鉴定为MRSA的临床菌株和3株标准株用多重PCR方法在一个反应体系(针对MRSA的8个基因)中进行SCCmec基因分型。结果临床分离株中有6株鉴定为MRSA,对其和MRSA标准株的多重PCR基因分型结果显示,两株临床株为SCCmecⅡ型,4株为Ⅲ型,标准株SA-w2为Ⅰ型,MRSA252为Ⅱ型。结论该研究可以很好地对临床MRSA进行基因诊断和分型,对MRSA的诊断和分型、耐药研究以及分子流行病学有重要意义。