新疆驼乳源金黄色葡萄球菌MLST分型与毒力基因检测

为了解驼乳源金黄色葡萄球菌多位点序列分型(multilocus sequence typing, MLST)与毒力基因携带情况,本试验对新疆驼乳源分离得到的金黄色葡萄球菌进行MLST、药物敏感性检测、生物被膜形成能力和溶血性检测以及毒力基因检测。结果表明,金黄色葡萄球菌在健康生驼乳中的分离率为5%(4/80);4株金黄色葡萄球菌分别属于ST8114、ST8119、ST2073和ST130(其中ST8114和ST8119为新的序列型),对12种抗菌药物全部敏感;在4株驼乳源金黄色葡萄球菌中可检测到sei、hla、hlb、clfA和clfB等毒力基因,并且均具有生物被膜形成能力和溶血活性。说明新疆驼乳源金黄色葡萄球菌分型丰富,在宿主致病和食品生产安全等方面存在隐患。本研究可为新疆驼乳源金黄色葡萄球菌的相关研究提供基础试验数据。

医务人员鼻定植金黄色葡萄球菌的筛查和spa分型

目的 了解医务人员鼻腔金黄色葡萄球菌定植情况,以及鼻定植金黄色葡萄球菌spa类型与psmmec、pvl、qacA/B、mecA基因分布。方法 收集复旦大学附属上海市第五人民医院247名医务人员鼻拭子,采用质谱仪进行菌种鉴定。采用聚合酶链反应(PCR)检测spa类型和psm-mec、pvl、qacA/B、mecA基因。采用自动化鉴定药敏仪进行甲氧西林敏感性试验。采用高通量测序技术对甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌(MRSA)进行分子分型。结果 医务人员鼻腔金黄色葡萄球菌定植率为23.89%(59/247),MRSA定植率为4.45%(11/247)。鼻定植金黄色葡萄球菌主要spa类型依次为t084(8/59,13.56%)、t309(5/59,8.47%)和t338(5/59,8.47%)、t034(4/59,6.78%)、t701(3/59,5.08%)。基于spa基因构建的进化树将鼻定植金黄色葡萄球菌归为3个主要进化支。MRSA分离株以ST398-t034-SCCmecⅤ型(36.36%,4/11)为主,甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)分离株以t084型(16.67%,8/48)为主,MRSA和MSSA菌株spa类型分布差异有统计学意义(χ^(2)=49.843,P=0.017)。psm-mec、pvl、qacA/B、mecA基因检出率分别为3.39%(2/59)、11.86%(7/59)、6.78%(4/59)、18.64%(11/59)。psm-mec(χ^(2)=59.000,P=0.001)、pvl(χ^(2)=40.582,P<0.001)和mec A(χ^(2)=18.724,P=0.001)在不同spa类型中的分布差异有统计学意义。结论 医务人员鼻定植金黄色葡萄球菌spa类型多样,MRSA的SCCmec类型和ST类型多样,毒力基因和耐药基因在不同spa类型中存在分布差异。

金黄色葡萄球菌对实验动物的感染及其分子分型方法比较

金黄色葡萄球菌作为一种人畜共患的条件性病原菌,其可对实验动物的质量及从业人员的健康构成严重的威胁,是屏障环境中必须监测和排除的病原体。采用准确、灵敏、快速的细菌分子分型方法,对于控制屏障环境中金黄色葡萄球菌具有重要意义。目前,金黄色葡萄球菌的分子分型方法有葡萄球菌染色体基因盒mec,葡萄球菌主蛋白A分型、多位点系列分型、脉冲场凝胶电泳分型、附属基因调节因子分型等。了解屏障系统中金黄色葡萄球菌对实验动物的感染状况,比较了不同分子分型方法的技术特征与应用,可为实验动物金黄色葡萄球菌的检测及分型提供参考。

木糖葡萄球菌对风鸭蛋白质降解的影响

以木糖葡萄球菌(Staphylococcus xylosus)为发酵剂加工风鸭,研究其在风鸭加工过程中对肌肉蛋白降解的影响。用SDS-PAGE电泳分析蛋白质的降解规律,同时比较加工初期及末期游离氨基酸的变化,并以不接菌样品为对照。结果表明:与对照相比,木糖葡萄球菌促进了肌浆蛋白与肌原纤维蛋白的降解,显著增加了游离氨基酸的总量;产鲜氨基酸的总量和比例均显著增加;必需氨基酸、甜味氨基酸和苦味氨基酸总量显著增加,比例显著下降。总之,木糖葡萄球菌是一种优良的发酵剂。

腐生葡萄球菌S25对四川香肠自然晾挂成熟过程中脂肪和蛋白质的影响

将腐生葡萄球菌S25接种到四川香肠中进行自然发酵,同时以不接菌的自然成熟香肠为对照,测定两组香肠自然成熟过程中脂肪和蛋白质含量的变化。结果显示:接种组的酸价在后期高于对照组;在自然晾挂成熟第15天和第30天,接种组的不饱和脂肪酸在总脂肪中含量分别为74.34%和74.30%,并且都高于对照组;在自然晾挂成熟过程中,接种组的总氮和非蛋白氮含量都高于对照组;在自然晾挂成熟第15天,接种组的游离氨基酸总量比对照组提高了19%,鲜味氨基酸(Glu)提高了31%,甜味氨基酸(Gly)提高了10%,必需氨基酸总量提高了21%;在自然晾挂成熟第30天,接种组的游离氨基酸、鲜味氨基酸、甜味氨基酸和必需氨基酸含量略高于对照组。结果表明,腐生葡萄球菌S25对四川香肠自然晾挂成熟过程中脂肪和蛋白质的分解有明显促进作用。

金黄色葡萄球菌蛋白质相互作用网络及功能

【目的】金黄色葡萄球菌是一种革兰氏阳性菌,是目前最难以对付的病菌之一。它能引起多种感染,特别是在医院环境中。近年来,抗药性金黄色葡萄球菌传染更加严重,已成为公共卫生威胁。由于以前对于金黄色葡萄球菌的实验性研究大都是基于单个基因或者蛋白进行的,为了更好的研究这个物种,有必要从整体上把握金黄色葡萄球菌的蛋白作用机理。【方法】采用系统发生谱、操纵子法、基因融合法、基因邻近法、同源映射法等5种计算方法预测金黄色葡萄球菌蛋白质相互作用网络。【结果】从蛋白组的角度构建了金黄色葡萄球菌蛋白相互作用网络,并对网络进行功能分析。【结论】网络的分析表明金黄色葡萄球菌的蛋白质相互作用网络也服从scale-free属性,发现了SA0939、SA0868、rplD等重要的蛋白。通过对金黄色葡萄球菌的重要的细胞壁合成和信号转导调控蛋白局部网络分析,发现了一些对这两个系统十分重要的蛋白分子,这些信息将为更好的了解金黄色葡萄球菌的致病机理和开发新的药物靶点提供指导。

儿童表皮葡萄球菌脑膜炎脑脊液蛋白质组学的初步研究

目的细菌性脑膜炎是致残、致死率较高的儿童时期常见中枢神经系统感染性疾病,其预后与诊断时间的早晚、是否及时治疗密切相关。而目前脑脊液(cerebrospinal fluid,CSF)中细菌培养的阳性率较低,使其确诊困难。该实验拟通过建立正常中国儿童CSF蛋白质双向凝胶电泳图谱,筛选表皮葡萄球菌脑膜炎(Staphylococ-cus epidermidis meningitis,SeM)特异性蛋白,为SeM的早期诊断提供线索,同时也为进一步治疗提供靶参考。方法收集SeM患儿和同年龄正常儿童CSF各4mL,固相pH梯度二维聚丙烯酰胺凝胶电泳(2-DE)技术分离蛋白质,以正常儿童CSF的2-DE凝胶为参考胶,将SeM患儿CSF的凝胶与之进行比较分析,寻找两组患儿CSF蛋白质谱的异常变化斑点。结果正常儿童CSF分离获得蛋白质斑点438个,SeM患儿CSF分离获得蛋白质斑点425个,其中发现有25个蛋白质点仅在正常CSF表达,在SeM CSF中表达而在正常CSF中无表达的蛋白质点为12个;与正常CSF蛋白质点表达量比较,SeM有6个蛋白质点表达量有2倍以上上调,而19个蛋白质点表达量有2倍以上下调。结论该实验成功建立了正常儿童和SeM患儿CSF蛋白质2-DE图谱,通过凝胶图像分析和计算机信息处理,发现了一些与SeM相关的蛋白质差异位点。对这些差异位点的进一步分析和鉴定,可能有助于发现与SeM相关的疾病特异性蛋白,为早期诊断及寻找新的药物靶点提供了新的思路。

合肥地区耐甲氧西林金黄色葡萄球菌SCCmec分型及耐药性分析

目的 研究合肥地区临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)携带mec基因簇的葡萄球菌盒式染色体(SCCmec)分型及药物敏感性,了解合肥地区MRSA流行株的耐药表型和分型特征。方法 从5所教学医院随机选取2016年1月至2021年12月的264株非重复MRSA菌株,利用头孢西丁纸片扩散法筛选MRSA,采用PCR扩增mec A基因,采用多重PCR进行MRSA的SCCmec分型分析。采用WHONET 5.6软件分析不同SCCmec型别MRSA菌株对抗菌药物的敏感性。结果 264株MRSA菌株中,SCCmecⅡ型156株(59.1%),Ⅳa型92株(34.8%),Ⅲ型4株(1.5%),12株(4.5%)未分型。SCCmecⅡ型和Ⅳa型MRSA对达托霉素、替加环素、利奈唑胺和万古霉素的敏感率均为100.0%。SCCmecⅡ型MRSA对环丙沙星、左氧氟沙星、莫西沙星和庆大霉素的耐药率高于SCCmecⅣa型,差异均有统计学意义(P均<0.05)。不同分型的MRSA菌株对红霉素、克林霉素、四环素、复方磺胺甲唑和利福平的耐药率差异无统计学意义(P均>0.05)。结论 合肥地区MRSA菌株SCCmec分型以Ⅱ型和Ⅳa型为主,不同分型MRSA对某些抗菌药物的耐药性存在差异,动态监测这类细菌的分型和药物敏感性有一定临床意义。

金黄色葡萄球菌的蛋白质组学研究进展

金黄色葡萄球菌是一种重要的人类致病菌,致病机制非常复杂,涉及多种蛋白。借助蛋白质组学,能在蛋白质水平上全面了解金黄色葡萄球菌各种生理生化及致病过程。本文概述了涉及金黄色葡萄球菌应激、致病性、耐药、治疗等方面的蛋白质组学研究进展。

金黄色葡萄球菌表面蛋白质SdrE的研究现状

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)是常见致病菌,其表面蛋白质在感染宿主过程中发挥重要作用,其中Sdr E蛋白质为其表面蛋白质之一,研究发现Sdr E蛋白质的表达几乎不受环境因素(包括温度、金属离子)的影响,并且可能与S.aureus对甲氧西林的抵抗力有关,近年来发现Sdr E蛋白质的磷酸化直接影响了S.aureus的毒性,同时,Sdr E蛋白质能够通过黏附补体调节因子H来逃避宿主免疫反应,并且还能够独立诱导血小板发生聚集,已经发现Sdr E蛋白质能够在骨骼感染、关节感染以及骨髓炎中发挥重要作用。本文主要分析了Sdr E蛋白质的生物学功能,为基于Sdr E蛋白质的新的特异性抗菌药物的开发指明方向和提供理论基础。

分离自非血液无菌体液的金黄色葡萄球菌耐药性和分子特征分析

目的了解上海交通大学医学院附属新华医院分离自无菌体液的金黄色葡萄球菌的耐药性特点和分子分型特征,为临床抗感染治疗提供参考。方法收集该院2010年12月—2022年6月住院患者分离自无菌体液(不包括血液)的金黄色葡萄球菌,抗菌药物敏感性试验使用VITEK®-2 Compact全自动微生物分析系统,采用聚合酶链反应(PCR)法对所有菌株进行多位点序列分型(MLST),采用PCR法对MRSA进行SCCmec分型。结果共收集80株金黄色葡萄球菌,分离自成人的菌株占73.8%,分离自儿童的菌株占26.2%。菌株对青霉素耐药率最高(93.8%),其次是苯唑西林(50.0%)、红霉素(46.7%)、四环素(30.2%)、环丙沙星(30.2%),未检出对利奈唑胺和万古霉素耐药菌株,MRSA总检出率为50.0%,MRSA对多数抗菌药物的耐药率均高于MSSA。对所有菌株进行MLST分型,优势型别为ST5(20.0%)、ST398(12.5%)、ST7(8.8%)和ST239(8.8%),检出1株胸水来源的新型别菌株ST7981;分离自成人的菌株主要型别是ST5(20.3%),分离自儿童的菌株主要型别是ST5(19.0%)和ST398(19.0%)。对MRSA菌株进行SCCmec分型,共检出SCCmecⅠ、SCCmecⅢ、SCCmecⅣc、SCCmecⅤ4种亚型,SCCmecⅠ型菌株多为ST59型,SCCmecⅢ型菌株多为ST630型,SCCmecⅣc型菌株多为ST239型,SCCmecⅤ型菌株多为ST5型,另有10株未能分类,MRSA的主要流行克隆株为ST5-SCCmecⅤ型和ST239-SCCmecⅣc型。结论本研究中金黄色葡萄球菌的优势型别为ST5,MRSA菌株的主要流行克隆株为ST5-SCCmecⅤ型和ST239-SCCmecⅣc型。MRSA的耐药性明显高于MSSA,提示临床医师应更加重视金黄色葡萄球菌感染的治疗,同时加强院感防控。

蛋白质谱型分析在耐甲氧西林金黄色葡萄球菌鉴定中的应用研究

目的 :从生化途径探索耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 (MRSA)鉴定的新方法及其对甲氧西林的耐药机理。方法 :采用细菌透析袋表面培养法 ,通过十二烷基硫酸钠 -聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS-QAGE) ,分析菌株蛋白质代谢产物谱形。结果 :MRSA和甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌 (MSSA)的蛋白质代谢产物SDS-PAGE谱形分析存在明显可资鉴别的差异。结论 :该方法为MRSA鉴定新方法的建立提供了可行性依据 。

中医药防治冠心病的蛋白质组学研究进展

冠心病是临床常见的心血管疾病,危险因素多,发病率高,病死率高,其症状反复发作,严重影响患者的身心健康。中医药可通过“双心治疗”缓解冠心病患者的症状及焦虑情绪。冠心病属中医“胸痹心痛”范围,其发病机制复杂,临床证型多,包括心脉瘀阻证、痰浊闭阻证、气滞心胸证、寒凝心脉证、痰瘀互结证、气阴两虚证、心肾阴虚证及心肾阳虚证。针对不同证型,治疗方剂众多,但作用机制尚不明确。蛋白质组学技术是一种识别蛋白质和研究蛋白质表征的技术,能够全面认识疾病的发生发展,可用于探究具有诊断价值的生物标志物、研究不同中医证候的蛋白质差异、推断中医药治疗冠心病的作用机制。

金黄色葡萄球菌耐药机制及治疗药物

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是引起局部化脓和心内膜炎等多种感染的重要人兽共患革兰阳性病原菌。其传播速度快,致病力强,且耐药性日益严重,给全球公共卫生安全和动物养殖业造成了巨大威胁。这对深入了解金黄色葡萄球菌耐药机制以及药物新靶点的开发提出了迫切需求。因此,本文对当前临床使用的抗生素的作用机制和耐药机理进行了综述,并特别关注了相关领域的最新研究进展,以期望为临床防治细菌耐药和新药研制提供新的视角和参考。

异质性万古霉素中介金黄色葡萄球菌的分子分型和同源性分析

目的了解滨州医学院附属医院异质性万古霉素中介金黄色葡萄球菌(hVISA)的分子流行病学现状,为有效预防hVISA的传播提供依据。方法采用万古霉素琼脂平皿筛选法对263株金黄色葡萄球菌进行初筛,菌群分析-曲线下面积(PAPAUC)法对初筛阳性的hVISA可疑株进行确认。采用多位点序列分型(MLST)、葡萄球菌A蛋白基因(spa)分型和脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型方法对hVISA菌株进行分子分型和同源性分析。结果本院初筛出113株hVISA可疑株,最终确认为hVISA的菌株共22株。MLST分型以ST72型(5株)为主,其次为ST59和ST25型(各4株);spa分型主要为t002、t437以及t2431(各3株)。PFGE聚类分析共得到12种PFGE型别,命名为H1-H12型,相似值处于62.6%~100%之间,其中最主要的是H3型(共6株),其次为H1型(共4株)。结论hVISA在本院为散发,22株hVISA菌株共检出10种ST型,14种spa型和12种PFGE型。本院hVISA菌株的主要流行克隆为ST72-t2431-H3型,且均来源于儿科,儿科可能存在ST72-t2431-H3型hVISA的流行。

金黄色葡萄球菌SPA分型及毒力基因检测

目的:研究临床分离金黄色葡萄球菌(SA)的蛋白A基因多态性及其所携带的毒力基因,为控制SA的感染和传播提供基础理论依据。方法:选取2018年10月—2019年3月北京航天总医院检验科微生物室分离得到的临床来源非重复金黄色葡萄球菌50株,其中来源于痰液35株、血液6株、脓液3株。其他来源6株(包括尿液、胸水、腹水等)。检测菌株携带mecA基因和杀白细胞毒素(PVL)基因等7种毒力基因的情况,并对菌株进行SPA基因分型分析。结果:50株SA菌株中,共检出耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)28株(56.0%),其中mecA基因阳性28株(100%);甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)22株(44.0%),mecA基因均为阴性。MRSA分为4个SPA型别,以t030(82.1%)为主,MSSA共分为12个葡萄球菌蛋白A(SPA)型别,以t1451、t091和t078位列前3位,分别占22.7%、18.2%和13.6%,检出2株PVL阳性菌株。结论:t030是MRSA临床分离株中的SPA优势型别,在本医院内广泛传播。MSSA遗传多样性高,以t1451、t091和t078位列前3位。

金黄色葡萄球菌的蛋白A基因多态性分型

目的建立金黄色葡萄球菌的蛋白A基因(spa)多态性分型方法,并初步测定了结核患者鼻腔定植的金黄色葡萄球菌的spa基因型。方法采用PCR方法扩增10株金黄色葡萄球菌spa基因的X区,测序后通过数据库(http://www.ridom.de/spaserver/)进行分型,并与脉冲场凝胶电泳(PFGE)结果相比较。结果5例患者抗结核治疗前后前鼻腔定植的金黄色葡萄球菌spa分型相同,结果与PFGE一致。5例患者定植的金黄色葡萄球菌spa型分别为:t795、t179、t189、t758和t796,其中t795、t758和t796为新发现的型。结论spa分型是一个较好的金黄色葡萄球菌快速基因分型方法。

猪肉源金黄色葡萄球菌生物膜能力与MLST分型检测

金黄色葡萄球菌在生鲜猪肉中有较高的检出率,是污染生鲜猪肉的主要食源性致病菌之一,对食品安全和人体健康造成巨大威胁。采用刚果红琼脂法定性,96孔微量板定量结合扫描电镜检测其成膜能力,用PCR法检测其成膜基因和黏附基因,最后对分离株进行多位点序列分型分析(MLST)。结果表明,刚果红琼脂法定性试验显示84.93%(62/73)的菌株成生物膜阳性,96孔微量板定量试验显示94.52%(69/73)的菌株成生物膜阳性,扫描电镜观察到不同黏附能力的菌株在钢板上梯度富集,PCR试验发现分离株均含有多重黏附基因,其中同时携带icaD、clfA、clfB、fnbA、fnbB;icaD、clfA、clfB、fnbA、fnbB、cna;icaA、icaD、clfA、clfB、fnbA、fnbB、cna多重黏附基因的菌株数最多,分别为30.14%(22/73),20.55%(15/73),15.07%(11/73)。MLST试验中73株菌分为26个ST型,夏季20个、冬季12个,夏季以CC1、CC5为优势克隆群,冬季以CC15、CC1、CC5为优势克隆群。系统发育树中,分离株与国内食源性、医源性和动物源性分离株有一定的相关性,呈现遗传多样性。研究结果可为生鲜猪肉的安全监管和金黄色葡萄球菌的传播及溯源调查提供一定的科学依据。

烧伤科分离MRSA菌株的耐药特征和葡萄球菌蛋白A基因分型

目的研究我院烧伤科2010年4～6月分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)菌株耐药性及分子流行病学特点,找出流行菌株,为指导临床经验用药提供参考。方法采用纸片扩散法(K-B法)及葡萄球菌A蛋白基因(spa)分型技术对分离的24株MRSA进行药物敏感性试验和同源性分析。结果分离的菌株对青霉素、苯唑西林、阿莫西林/克拉维酸、亚胺培南、美罗培南全部耐药,其余抗菌药物除万古霉素外耐药率均在50%以上,未发现万古霉素耐药株。spa基因分型发现3个spa型,t030型共22株,t3226和t632型各1株,提示分离菌株具有高度的同源性。结论我院烧伤科MRSA菌株具有多重耐药的特征,spa t030型菌株是其主要型别。

30株不同来源的金黄色葡萄球菌耐药性及分型分析

目的 分析不同来源的金黄色葡萄球菌(SAU)的耐药性及分型,为临床科学用药提供指导。方法 对2021-2022年荣昌区各级医疗机构细菌耐药监测点送检的分泌物、脓液、血液、鼻咽部、尿液样本368份,按照规范方法开展SAU的分离、鉴定和培养,采用梅里埃全自动微生物鉴定及药敏分析系统进行药敏实验,采用脉冲场凝胶电泳进行SAU的分型及聚类分析。结果 共检测出SAU 30株,检出率为8.15%(30/368),菌株主要来自痰液(53.33%),其次是分泌物(20.00%)和脓液(13.33%)。SAU对青霉素耐药率为100.00%,对红霉素(60.00%)、克林霉素(40.00%)、四环素(36.67%)、头孢西丁(30.00%)、苯唑西林(26.67%)、左氧氟沙星(16.67%)、庆大霉素(13.33%)、呋喃妥因(3.33%)、利福平(3.33%)均产生一定程度的耐药性;未检出对替考拉宁、万古霉素、达托霉素、复方磺胺甲噁唑、利奈唑胺、红霉素/克林霉素复合物的耐药菌株。结论 荣昌区SAU检出率相对较低,应进一步加强对SAU耐药性的监测,动态掌握SAU耐药性的变化。