医务人员鼻定植金黄色葡萄球菌的筛查和spa分型

目的 了解医务人员鼻腔金黄色葡萄球菌定植情况,以及鼻定植金黄色葡萄球菌spa类型与psmmec、pvl、qacA/B、mecA基因分布。方法 收集复旦大学附属上海市第五人民医院247名医务人员鼻拭子,采用质谱仪进行菌种鉴定。采用聚合酶链反应(PCR)检测spa类型和psm-mec、pvl、qacA/B、mecA基因。采用自动化鉴定药敏仪进行甲氧西林敏感性试验。采用高通量测序技术对甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌(MRSA)进行分子分型。结果 医务人员鼻腔金黄色葡萄球菌定植率为23.89%(59/247),MRSA定植率为4.45%(11/247)。鼻定植金黄色葡萄球菌主要spa类型依次为t084(8/59,13.56%)、t309(5/59,8.47%)和t338(5/59,8.47%)、t034(4/59,6.78%)、t701(3/59,5.08%)。基于spa基因构建的进化树将鼻定植金黄色葡萄球菌归为3个主要进化支。MRSA分离株以ST398-t034-SCCmecⅤ型(36.36%,4/11)为主,甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)分离株以t084型(16.67%,8/48)为主,MRSA和MSSA菌株spa类型分布差异有统计学意义(χ^(2)=49.843,P=0.017)。psm-mec、pvl、qacA/B、mecA基因检出率分别为3.39%(2/59)、11.86%(7/59)、6.78%(4/59)、18.64%(11/59)。psm-mec(χ^(2)=59.000,P=0.001)、pvl(χ^(2)=40.582,P<0.001)和mec A(χ^(2)=18.724,P=0.001)在不同spa类型中的分布差异有统计学意义。结论 医务人员鼻定植金黄色葡萄球菌spa类型多样,MRSA的SCCmec类型和ST类型多样,毒力基因和耐药基因在不同spa类型中存在分布差异。

金黄色葡萄球菌临床分离株spa分型和耐药特征研究

目的研究临床分离金葡菌的耐药性和分子特征。方法对2011年5—11月在成都某医院分离的56株金葡菌进行抗菌药物敏感性检测,检测菌株携带mecA基因和pvl基因情况,并进行spa基因分型分析。结果 56株金葡菌中,共检出耐甲氧西林金葡菌(MRSA)21株(37.5%),其中mecA基因阳性20株(95.2%);甲氧西林敏感金葡菌(MSSA)35株(62.5%)。与MSSA相比,MRSA对利福平、左氧氟沙星、莫西沙星、环丙沙星、庆大霉素和四环素的敏感率显著降低(P<0.05),MRSA对万古霉素、利奈唑胺、替加环素、喹奴普丁-达福普汀和呋喃妥因全部敏感。MRSA分为6个spa型别,以t030(66.7%)为主,MRSA-t030、MRSA-t002具有突出的多药耐药特征。MSSA共分为18个spa型别,以t189、t377和t034列前3位,分别占14.3%、14.3%和11.4%,并在脓液标本检出1株新spa基因型new1。检出5株杀白细胞毒素(PVL)阳性菌株,其中3株为MSSA-t189。结论 t030是医院MRSA临床分离株中的spa优势型别,具有突出的多药耐药特征,在医院内广泛传播。MSSA遗传多样性高,以t189、t377和t034列前3位。

牛源金黄色葡萄球菌spa基因多态性分型研究

目的为了研究引起奶牛乳房炎的主要病原菌金黄色葡萄球菌的35个分离株进行spa基因多态性分型研究。方法在河北、内蒙古、山东、黑龙江、湖北、河南等省份采集奶牛乳房炎奶样,经实验室分离鉴定,从中择35株金黄色葡萄球菌,采用PCR方法扩增spa基因的X区域,测序后根据数据库(http://www.ridom.de/spaserver/)进行分型。结果35株菌可分成11个型,分别为t521型有8株,t518型和t2788型各5株,t246型和t519型各4株,t359型和t2756型各3株,t189型t、224型t、267型t、2759型各有1株;同时发现3个新型,分别为t2788、t2756t、2759。结论研究显示spa基因分型方法具有快速、分辨力强、易于标准化等特点,可用于牛源金黄色葡萄球菌的基因分型及生态学等研究。

医院获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌Spa和SCCmec分型研究

目的对医院获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(HA-MRSA)A蛋白(Spa)和葡萄球菌mec基因盒(SCCmec)分型同源性研究,为预防和控制医院感染提供依据。方法采用药敏纸片法(K-B法)、SCCmec分型及Spa分型技术,收集自2013年8月至2014年4月80株HA-MRSA,进行药敏试验和同源性分析,并检测毒力基因杀白细胞毒素(pvl)基因和毒性休克综合征(tsst)基因。结果药敏结果显示,80株HA-MRSA对青霉素、氨苄西林/舒巴坦、亚胺培南均耐药,对环丙沙星耐药率为90.0%,对克林霉素耐药率为58.8%,对复方磺胺类耐药率为13.8%,对万古霉素、利奈唑胺、替考拉宁均敏感。SCCmec分型结果显示,80株MRSA中SCCmecⅡ型占73.75%、SCCmecⅢ型(13.75%)、SCCmecⅤ型(12.5%)。Spa分型,28株为t2460型(35%)、9株为t002型(11%)、6株为t030型(8%)、7株为t632型(9%)、5株为t037型(6%),其他Spa型相对分散。pvl基因阳性率为7.5%(6株),tsst基因为阴性。结论 HA-MRSA SCCmec分型以Ⅱ为主,Spa分型以t2460型为主,有较高的同源性;HA-MRSA对多种药物具有较高的耐药性并且存在多重耐药。

金黄色葡萄球菌的蛋白A基因多态性分型

目的建立金黄色葡萄球菌的蛋白A基因(spa)多态性分型方法,并初步测定了结核患者鼻腔定植的金黄色葡萄球菌的spa基因型。方法采用PCR方法扩增10株金黄色葡萄球菌spa基因的X区,测序后通过数据库(http://www.ridom.de/spaserver/)进行分型,并与脉冲场凝胶电泳(PFGE)结果相比较。结果5例患者抗结核治疗前后前鼻腔定植的金黄色葡萄球菌spa分型相同,结果与PFGE一致。5例患者定植的金黄色葡萄球菌spa型分别为:t795、t179、t189、t758和t796,其中t795、t758和t796为新发现的型。结论spa分型是一个较好的金黄色葡萄球菌快速基因分型方法。

烧伤科分离MRSA菌株的耐药特征和葡萄球菌蛋白A基因分型

目的研究我院烧伤科2010年4～6月分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)菌株耐药性及分子流行病学特点,找出流行菌株,为指导临床经验用药提供参考。方法采用纸片扩散法(K-B法)及葡萄球菌A蛋白基因(spa)分型技术对分离的24株MRSA进行药物敏感性试验和同源性分析。结果分离的菌株对青霉素、苯唑西林、阿莫西林/克拉维酸、亚胺培南、美罗培南全部耐药,其余抗菌药物除万古霉素外耐药率均在50%以上,未发现万古霉素耐药株。spa基因分型发现3个spa型,t030型共22株,t3226和t632型各1株,提示分离菌株具有高度的同源性。结论我院烧伤科MRSA菌株具有多重耐药的特征,spa t030型菌株是其主要型别。

金黄色葡萄球菌抗生素耐药相关基因检测及蛋白A基因多态性分型研究

目的 检测2011-2012年深圳市南山区某医院及环境样本中金黄色葡萄球菌（staphylococcus aureus,SA）耐药基因,对SA进行蛋白A基因多态性分型（single locus DNA-sequencing of the repeat region of the Staphylococcus protein Agene,Spa）研究.了解SA耐药基因分布情况以及Spa分型特点.方法 采用PCR技术检测SA的12种耐药基因,对SA蛋白A基因进行扩增,PCR产物测序,序列上传数据库进行比对.结果 27株菌分离自院内病人样本,13株检出mecA基因.其中15株菌检出2种以上耐药基因,3株菌未检出任何耐药基因.16株菌分离自环境样本,未检出mecA基因.15株菌检出ant（4＇,4＂）基因,仅1株菌检出Aac（6＇）/aph（2＂）基因,其余耐药基因未检出.43株SA分为15种Spa型,t091型为优势型别,检出率为27.9％（12/43）,此型别在所有类型的样本中均有检出.结论 院内样本中,不同样本分离菌株携带耐药基因存在差异,院内病人样本分离菌株呈多重耐药.Spa分型,利于深圳市SA分子分型数据库的建立,对于疾病溯源有着重要意义.

金黄色葡萄球菌Spa蛋白在不同感染类型中的差异分析

目的对临床采集的82例金黄色葡萄球菌进行DLST-spa基因扩增、测序及生物信息学分析,探讨金黄色葡萄球菌Spa蛋白在定植及感染中的异同。方法收集入院患者不同来源的标本及临床资料,经VITEK MS质谱仪鉴定进行药物敏感性测试与冻存;复苏菌株,扩增DLST-spa目的基因;运用生物信息数据库分析DLST-spa基因序列,比较不同来源标本中分离出的金黄色葡萄球菌Spa蛋白的异同,探讨Spa蛋白在定植及感染的金黄色葡萄球菌中的表达差异。结果 82株金黄色葡萄球菌菌株DLST-spa基因核苷酸主要的突变种类为A-T,G-T,A-G及C-T突变。菌株来源于静脉血、无菌体液的DLST-spa基因相较于痰、咽拭子标本存在更多突变,且在MRSA中突变频率更高;同时Spa X区蛋白长度在金黄色葡萄球菌定植或感染中存在差异,菌株来源于静脉血、无菌体液的Spa X区蛋白相较于痰、咽拭子的长度更短,且在MRSA中Spa X区蛋白长度相较于MSSA更短。结论来源于无菌体液标本感染中的金黄色葡萄球菌DLST-spa基因的突变种类和数量更多,Spa X区蛋白长度更短;相较于社区感染,来源于院内感染中分离的金黄色葡萄球菌DLST-spa基因的突变种类和数量更多,Spa X区蛋白长度更短。

市售凉皮中金黄色葡萄球菌的肠毒素基因、耐药特征检测及SPA分型

为监测并研究凉皮中金黄色葡萄球菌的污染情况,选取连锁超市、流动摊点、小餐馆和学校餐厅4种销售渠道,在陕西杨凌地区进行为期一年的凉皮跟踪采样,共得样本432个,金黄色葡萄球菌检出率为24.3%(105/432)。检测sea、seb、sec、sed、see、seg、seh、sei、sej 9种肠毒素基因,sea携带率最高为96.2%(101/105),see次之为64.8%(68/105),还有部分seb和sec检出,检出率分别为54.3%(57/105)和49.5%(52/105),seh检出率为1.0%(1/105),sed、seg、sei、sej的检出率则均为0.0%(0/105)。研究针对青霉素、氨苄西林和苯唑西林等14种常见药物进行耐药性实验,105株来自阳性样本的金黄色葡萄菌全部具有耐药性,对青霉素和甲氧苄啶/磺胺甲恶唑耐受率为100.0%(105/105),对头孢哌酮、环丙沙星、万古霉素和阿米卡星均敏感。此外,多重(n≥3)耐药率高达90.5%(95/105),表型为青霉素-氨苄西林-甲氧苄啶/磺胺甲恶唑-阿莫西林/克拉维酸的耐药率最高,为61.9%(65/105)。检测105株金黄色葡萄球菌的SPA型别,共包括4种结果,优势型别为t701(81.9%,86/105),其次是t441(16.2%,17/105),t127和t796占比最少均为1.0%(1/105)。最终,发现该地区所售凉皮除学校餐厅外,其余3种销售渠道的检出率均较高,且菌株具有较高的肠毒素基因携带率和耐药性,优势SPA型别为t701和t441,为相应监管部门提供一定理论指导。

金黄色葡萄球菌SPA分型及毒力基因检测

目的:研究临床分离金黄色葡萄球菌(SA)的蛋白A基因多态性及其所携带的毒力基因,为控制SA的感染和传播提供基础理论依据。方法:选取2018年10月—2019年3月北京航天总医院检验科微生物室分离得到的临床来源非重复金黄色葡萄球菌50株,其中来源于痰液35株、血液6株、脓液3株。其他来源6株(包括尿液、胸水、腹水等)。检测菌株携带mecA基因和杀白细胞毒素(PVL)基因等7种毒力基因的情况,并对菌株进行SPA基因分型分析。结果:50株SA菌株中,共检出耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)28株(56.0%),其中mecA基因阳性28株(100%);甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)22株(44.0%),mecA基因均为阴性。MRSA分为4个SPA型别,以t030(82.1%)为主,MSSA共分为12个葡萄球菌蛋白A(SPA)型别,以t1451、t091和t078位列前3位,分别占22.7%、18.2%和13.6%,检出2株PVL阳性菌株。结论:t030是MRSA临床分离株中的SPA优势型别,在本医院内广泛传播。MSSA遗传多样性高,以t1451、t091和t078位列前3位。

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌基因分型研究

目的了解本地区耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)流行株的来源和遗传背景。方法回顾分析华西医院127例MRSA感染者的病例资料,用SCCmec多重PCR技术、葡萄球菌A蛋白(spa)分型技术和多位点测序分型技术对其中10株MRSA临床分离株进行基因分型,并检测其杀白细胞毒素基因。结果病例资料显示127株MRSA中3株为社区获得性MRSA(CA-MRSA),其余均为医院获得性MRSA(HA-MRSA)。进行分型研究的10株MRSA中,7株HA-MRSA为SCCmec Ⅲ-ST239-PVL(-),呈现高度的克隆一致性,spa分型进一步显示4株为t030,另外3株为t037;CA-MRSAs19165分型为ST8-t008,与USA300属同一克隆,并且携带SCCmecⅣa和PVL基因,符合USA300一般基因特征。另外2株CA-MRSAs35301、s29635均为SCCmecⅣa-ST59-t437,与我国其他地区的报道不同。结论该院分离的MRSA仍以医院获得性为主(124/127),HA-MRSA呈现高度的克隆一致性,并与我国的主要流行株为同一克隆;分离到与美国主要CA-MRSA流行株USA300相同克隆的菌株,另外分离到的CA-MRSAST59-t437克隆株在我国其他地区未有报道。MLST和spa分型技术是金黄色葡萄球菌分子流行病学研究的更为简便快速的方法。

葡萄球菌蛋白A吸附治疗对群体反应性抗体水平的影响

目的 研究葡萄球菌蛋白A(StaphylococcalProteinA .SPA)吸附治疗对群体反应性抗体 (PRA)水平的影响。方法 采用SPA吸附系统对 32例等待肾移植的致敏受者进行体外吸附实验、体内吸附实验和临床移植观察。结果 ①单次SPA吸附治疗可处理循环血浆 4 5 0～ 6 0 0ml;其饱和吸附的IgG量为 (3.98±0 .5 1)g ;实验终点饱和吸附的IgG量 (M1)为 (19.5 4± 3.13)g/L ,吸附后血浆IgG(M2 )水平降低 5 1.2 % ;②本组体内吸附实验前 ,PRA为 98%～ 5 1%者 5例 ,PRA为 5 0 %～ 4 0 %者 15例 ,PRA为 39%～ 2 5 %者 12例。每次SPA吸附治疗的循环血浆量为 70 0 0～ 90 0 0ml。本组经 (6 .70± 3.11)次SPA吸附治疗后 ,2 9例 (占90 .6 2 % )PRA降至 <12 % ;③ 2 7例 (83.37% )顺利地接受肾移植手术。术后未发生超急或急性排斥反应 ,肾功能均得以恢复。结论 SPA吸附治疗可降低致敏患者体内预存的PRA水平。SPA吸附治疗辅以配型良好的肾脏及新型免疫抑制剂 ,对预防和减轻肾移植后排斥反应疗效确切。

金黄色葡萄球菌胶乳凝集试验及spa基因序列改变与万古霉素耐药关系探讨

目的研究金黄色葡萄球菌(金葡菌)胶乳凝集试验及spa基因序列改变与万古霉素耐药的关系。方法检测体外诱导对万古霉素耐药金葡菌过程中的金葡菌胶乳凝集试验结果改变情况,并利用单链构象多态性(SSCP)技术及DNA测序分析金葡菌spa基因序列有无改变。结果3株对万古霉素产生中介耐药的金葡菌在诱导过程中胶乳凝集试验发生改变,其中2株金葡菌spa基因序列有改变。结论spa基因碱基序列的改变,可能与金葡菌对万古霉素耐药有一定关联。

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌快速分型方法的研究

目的基于聚合酶链反应(PCR)-高分辨率熔解(HRM)曲线分析方法和葡萄球菌蛋白A(SPA)分型方法,建立一种适用于耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的快速分型方法。方法收集临床分离的71株MRSA作为试验菌株,采用基因测序和HRM曲线分析方法对菌株进行SPA基因分型。结果采用基因测序方法,71株MRSA菌株的SPA基因分为4个型别,分别是t570、t030、t002和t588,以t570(53例)为主要型别,其次是t030和t002(均为7例)。HRM分析对SPA基因的分型结果与基因测序方法的结果基本一致。结论 PCR-HRM分析有望成为一种快速、有效的MRSA的SPA基因分型方法,为医院感染控制提供依据。

异质性万古霉素中介金黄色葡萄球菌的分子分型和同源性分析

目的了解滨州医学院附属医院异质性万古霉素中介金黄色葡萄球菌(hVISA)的分子流行病学现状,为有效预防hVISA的传播提供依据。方法采用万古霉素琼脂平皿筛选法对263株金黄色葡萄球菌进行初筛,菌群分析-曲线下面积(PAPAUC)法对初筛阳性的hVISA可疑株进行确认。采用多位点序列分型(MLST)、葡萄球菌A蛋白基因(spa)分型和脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型方法对hVISA菌株进行分子分型和同源性分析。结果本院初筛出113株hVISA可疑株,最终确认为hVISA的菌株共22株。MLST分型以ST72型(5株)为主,其次为ST59和ST25型(各4株);spa分型主要为t002、t437以及t2431(各3株)。PFGE聚类分析共得到12种PFGE型别,命名为H1-H12型,相似值处于62.6%~100%之间,其中最主要的是H3型(共6株),其次为H1型(共4株)。结论hVISA在本院为散发,22株hVISA菌株共检出10种ST型,14种spa型和12种PFGE型。本院hVISA菌株的主要流行克隆为ST72-t2431-H3型,且均来源于儿科,儿科可能存在ST72-t2431-H3型hVISA的流行。

金黄色葡萄球菌蛋白A的提取、纯化及鉴定

为了获得纯度高、活性好的金黄色葡萄球菌蛋白A（SPA）,取改良营养肉汤培养基上生长18h的金黄色葡萄球菌培养物,采用溶菌酶裂解细胞壁释放蛋白质,用磷酸盐缓冲溶液（PBS）溶解后转入透析袋透析,透析物用小鼠IgG-sephrose4FF亲和层析柱纯化,采用二喹啉甲酸（BCA）法测蛋白质浓度。结果表明：SPA浓度为0.933mg/mL;聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）结果在42ku处有明显的电泳条带,蛋白免疫印迹（Western-blot）进一步证实小鼠IgG与SPA在42ku处发生较强的反应;以SPA为抗原,提纯的小鼠IgG为样品进行酶联免疫吸附试验（ELISA）检测,结果小鼠IgG稀释到1∶25600时仍能与SPA结合,说明提取的SPA活性较高。

金黄色葡萄球菌蛋白A的纯化

葡萄球菌蛋白A(简称SpA)是大多数金黄色葡萄球菌所具有的细胞壁成份,它能与人及多种哺乳动物血清IgG的Fo片段发生非特异性结合。为进一步研究SpA的结构和生物学特性,必须获得纯化的SpA。纯化方法有用酸沉淀和电泳或用柱层析、凝胶过滤等,但都较繁复,产率不高。Hjelm等(1972)用溶葡萄球菌素(Lysostaphin)消化细菌后再经IgG柱的亲和层析以纯化SpA,产率高,但溶葡萄球菌素来源困难,价格昂贵。我们利用现有实验条件对这一方法作些改良,获得产率较高的纯化SpA。

葡萄球菌A蛋白协同凝集试验快速检测淋球菌的报告

近年我国淋病发病率呈上升趋势,实验室检查对诊断淋病具重要作用.为改进常规检测方法敏感性低、速度慢的缺点,我们采用葡萄球菌A蛋白(SPA)协同凝集试验与涂片镜检结合检测180例临床标本,现报告如下.

我国延边地区金黄色葡萄球菌分子特征研究

目的研究我国延边地区金黄色葡萄球菌(金葡菌)的分子流行病学特点。方法收集2011年3月—2012年6月吉林省延边大学附属医院连续分离的金葡菌非重复株101株,通过PCR联合测序进行葡萄球菌染色体mec(SCCmec)分型、葡萄球菌A蛋白(spa)分型、多位点序列分型(MLST)并进行pvl基因检测。结果 SCCmec分型:以Ⅱ型为主(39/60;65.0%),其次是Ⅲ型(16/60;26.7%);spa分型:甲氧西林耐药金葡菌(MRSA)有11种,其中t2460为33株(55.0%),t030为11株(18.3%),t002、t324、t632均为3株(5.0%)。甲氧西林敏感金葡菌(MSSA)共分出29种不同的型:t796为6株(14.6%),t309为4株(9.8%),t126为3株(7.3%);共检出pvl基因阳性5株;MLST检测:MRSA共有3种分型,ST5,ST239,ST72。MSSA分型具有多样性:ST5,ST25,ST15,ST59,ST1,ST7,ST45,ST22,ST188。结论延边地区MRSA的主要克隆株为ST5-MRSA-SCCmecII-t2460和ST239-MRSA-SCCmecIII-t030,MSSA显示多克隆性。