新疆驼乳源金黄色葡萄球菌MLST分型与毒力基因检测

为了解驼乳源金黄色葡萄球菌多位点序列分型(multilocus sequence typing, MLST)与毒力基因携带情况,本试验对新疆驼乳源分离得到的金黄色葡萄球菌进行MLST、药物敏感性检测、生物被膜形成能力和溶血性检测以及毒力基因检测。结果表明,金黄色葡萄球菌在健康生驼乳中的分离率为5%(4/80);4株金黄色葡萄球菌分别属于ST8114、ST8119、ST2073和ST130(其中ST8114和ST8119为新的序列型),对12种抗菌药物全部敏感;在4株驼乳源金黄色葡萄球菌中可检测到sei、hla、hlb、clfA和clfB等毒力基因,并且均具有生物被膜形成能力和溶血活性。说明新疆驼乳源金黄色葡萄球菌分型丰富,在宿主致病和食品生产安全等方面存在隐患。本研究可为新疆驼乳源金黄色葡萄球菌的相关研究提供基础试验数据。

金黄色葡萄球菌SPA分型及毒力基因检测

目的:研究临床分离金黄色葡萄球菌(SA)的蛋白A基因多态性及其所携带的毒力基因,为控制SA的感染和传播提供基础理论依据。方法:选取2018年10月—2019年3月北京航天总医院检验科微生物室分离得到的临床来源非重复金黄色葡萄球菌50株,其中来源于痰液35株、血液6株、脓液3株。其他来源6株(包括尿液、胸水、腹水等)。检测菌株携带mecA基因和杀白细胞毒素(PVL)基因等7种毒力基因的情况,并对菌株进行SPA基因分型分析。结果:50株SA菌株中,共检出耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)28株(56.0%),其中mecA基因阳性28株(100%);甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)22株(44.0%),mecA基因均为阴性。MRSA分为4个SPA型别,以t030(82.1%)为主,MSSA共分为12个葡萄球菌蛋白A(SPA)型别,以t1451、t091和t078位列前3位,分别占22.7%、18.2%和13.6%,检出2株PVL阳性菌株。结论:t030是MRSA临床分离株中的SPA优势型别,在本医院内广泛传播。MSSA遗传多样性高,以t1451、t091和t078位列前3位。

异质性万古霉素中介金黄色葡萄球菌的分子分型和同源性分析

目的了解滨州医学院附属医院异质性万古霉素中介金黄色葡萄球菌(hVISA)的分子流行病学现状,为有效预防hVISA的传播提供依据。方法采用万古霉素琼脂平皿筛选法对263株金黄色葡萄球菌进行初筛,菌群分析-曲线下面积(PAPAUC)法对初筛阳性的hVISA可疑株进行确认。采用多位点序列分型(MLST)、葡萄球菌A蛋白基因(spa)分型和脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型方法对hVISA菌株进行分子分型和同源性分析。结果本院初筛出113株hVISA可疑株,最终确认为hVISA的菌株共22株。MLST分型以ST72型(5株)为主,其次为ST59和ST25型(各4株);spa分型主要为t002、t437以及t2431(各3株)。PFGE聚类分析共得到12种PFGE型别,命名为H1-H12型,相似值处于62.6%~100%之间,其中最主要的是H3型(共6株),其次为H1型(共4株)。结论hVISA在本院为散发,22株hVISA菌株共检出10种ST型,14种spa型和12种PFGE型。本院hVISA菌株的主要流行克隆为ST72-t2431-H3型,且均来源于儿科,儿科可能存在ST72-t2431-H3型hVISA的流行。

金黄色葡萄球菌的蛋白A基因多态性分型

目的建立金黄色葡萄球菌的蛋白A基因(spa)多态性分型方法,并初步测定了结核患者鼻腔定植的金黄色葡萄球菌的spa基因型。方法采用PCR方法扩增10株金黄色葡萄球菌spa基因的X区,测序后通过数据库(http://www.ridom.de/spaserver/)进行分型,并与脉冲场凝胶电泳(PFGE)结果相比较。结果5例患者抗结核治疗前后前鼻腔定植的金黄色葡萄球菌spa分型相同,结果与PFGE一致。5例患者定植的金黄色葡萄球菌spa型分别为:t795、t179、t189、t758和t796,其中t795、t758和t796为新发现的型。结论spa分型是一个较好的金黄色葡萄球菌快速基因分型方法。

烧伤科分离MRSA菌株的耐药特征和葡萄球菌蛋白A基因分型

目的研究我院烧伤科2010年4～6月分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)菌株耐药性及分子流行病学特点,找出流行菌株,为指导临床经验用药提供参考。方法采用纸片扩散法(K-B法)及葡萄球菌A蛋白基因(spa)分型技术对分离的24株MRSA进行药物敏感性试验和同源性分析。结果分离的菌株对青霉素、苯唑西林、阿莫西林/克拉维酸、亚胺培南、美罗培南全部耐药,其余抗菌药物除万古霉素外耐药率均在50%以上,未发现万古霉素耐药株。spa基因分型发现3个spa型,t030型共22株,t3226和t632型各1株,提示分离菌株具有高度的同源性。结论我院烧伤科MRSA菌株具有多重耐药的特征,spa t030型菌株是其主要型别。

CSOM患者分泌物中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的基因分型及耐药特征

目的 探究慢性化脓性中耳炎(chronic suppurative otitis media, CSOM)患者中耳分泌物耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant staphylococcus aureus, MRSA)分离株的基因分型及耐药特征。方法 选取2019年1月至2020年12月锦州医科大学附属第一医院收治的120例CSOM患者,治疗时采集患者中耳分泌物进行细菌分离,对分离病原菌进行培养、鉴定及药敏试验,分析CSOM患者中耳积液的病原菌临床分布特征,根据金黄色葡萄球菌感染情况,分为MRSA和甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant staphylococcus aureus, MRSA),采用PCR扩增法检测MRSA的基因分型,采用K-B纸片扩散法检测不同基因型MRSA和MSSA对临床常用抗菌药物的耐药性。结果 120份中耳分泌物标本中共培养分离出病原菌149株,其中,革兰氏阴性菌45株(30.20%),以铜绿假单胞菌(19株,12.75%)和肺炎克雷伯菌(16株,10.74%)为主;革兰氏阳性菌96株(64.43%),以金黄色葡萄球菌(73株,48.99%)为主;检出真菌8株(5.36%),均为假丝酵母菌。73株金黄色葡萄球菌经药敏试验共检出MRSA 26株,MSSA 47株;26株MRSA菌株的mecA基因携带率为100%,多重PCR法共检出SCCmecⅡ型7株(26.92%),SCCmecⅢ型15株(57.69%),SCCmecⅣa型4株(15.38%)。MRSA菌株对青霉素、苯唑西林、庆大霉素、左氧氟沙星、利福平和呋喃妥因的耐药率明显高于MSSA菌株(P<0.05);不同SCCmec基因分型MRSA菌株对左氧氟沙星、环丙沙星和莫西沙星的耐药率比较,SCCmecⅢ型>SCCmecⅡ型>SCCmecⅣa型(P<0.05)。结论 金黄色葡萄球菌是CSOM患者常见的感染病原菌,分离的MRSA菌株均携带mecA基因,SCCmec基因型以SCCmecⅢ型为主,其余为SCCmecⅡ型和SCCmecⅣa型;MRSA的药敏性明显高于MSSA,且不同SCCmec基因型的MRSA耐药性存在明显差异,临床应根据药敏结果合理使用抗菌药物。

金黄色葡萄球菌抗生素耐药相关基因检测及蛋白A基因多态性分型研究

目的 检测2011-2012年深圳市南山区某医院及环境样本中金黄色葡萄球菌（staphylococcus aureus,SA）耐药基因,对SA进行蛋白A基因多态性分型（single locus DNA-sequencing of the repeat region of the Staphylococcus protein Agene,Spa）研究.了解SA耐药基因分布情况以及Spa分型特点.方法 采用PCR技术检测SA的12种耐药基因,对SA蛋白A基因进行扩增,PCR产物测序,序列上传数据库进行比对.结果 27株菌分离自院内病人样本,13株检出mecA基因.其中15株菌检出2种以上耐药基因,3株菌未检出任何耐药基因.16株菌分离自环境样本,未检出mecA基因.15株菌检出ant（4＇,4＂）基因,仅1株菌检出Aac（6＇）/aph（2＂）基因,其余耐药基因未检出.43株SA分为15种Spa型,t091型为优势型别,检出率为27.9％（12/43）,此型别在所有类型的样本中均有检出.结论 院内样本中,不同样本分离菌株携带耐药基因存在差异,院内病人样本分离菌株呈多重耐药.Spa分型,利于深圳市SA分子分型数据库的建立,对于疾病溯源有着重要意义.

儿童患者分离金黄色葡萄球菌的临床分布特点及基因型

目的了解某地区儿童患者分离金黄色葡萄球菌(SA)的临床分布特点、耐药性,以及耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌(MRSA)的SCC mec分型、PVL基因表达情况,为预防及治疗MRSA感染提供依据。方法回顾性分析2016—2021年苏州某儿童医院各类临床标本中检出SA及MRSA的临床分布及耐药性特点。聚合酶链反应(PCR)法检测161株MRSA的mec A、SCC mec分型及PVL基因表达情况。结果2016—2021年该院共检出SA 4967株,其中MRSA 1730株(34.83%),2018年MRSA检出率(39.25%)最高。MRSA主要来源于痰(1091株)、脓液(382株)及耳脓(149株)。住院患儿不同年份间MRSA检出率比较,差异有统计学意义(P<0.001),而门诊患儿不同年份间MRSA检出率比较,差异无统计学意义(P=0.885)。SA对青霉素耐药率较高,未检出万古霉素、替考拉宁及利奈唑胺耐药菌株。MRSA对大环内酯类、四环素类抗生素的耐药率高于甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌(MSSA)(P<0.01),但对喹诺酮类、氨基糖苷类、复方磺胺甲噁唑耐药率低于MSSA组(P<0.01)。161株MRSA全部表达mec A基因,不表达PVL基因。SCC mec分型以SCC mecⅡ型(63.98%)为主,其次为SCC mecⅤ(16.77%)、SCC mecⅢ(12.42%)。结论近年来该医院MRSA检出率虽有下降,但仍在30%左右,社区获得性感染是MRSA的重要来源。该地区儿童MRSA控制除应加强抗菌药物管理、细菌耐药监测及医院感染控制等措施外,还需加强社区管理,以降低MRSA的发生率。

乳房炎奶牛金黄色葡萄球菌毒素基因的检测及PFGE分型研究

作者针对临床及亚临床乳房炎奶牛乳汁中金黄色葡萄球菌分离株的毒素基因进行检测和脉冲场凝胶电泳(PFGE)基因分型,比较2种类型乳房炎金黄色葡萄球菌分离株的差异。无菌法采集奶样,采用国际标准方法从中分离金黄色葡萄球菌,用多重PCR方法扩增nuc基因和mecA基因以确证金黄色葡萄球菌(SA)和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)。进一步用PCR方法检测SA的各种毒素基因(SEs、ETs、TSST-1和PVL基因等)。利用限制性内切酶SmaⅠ对SA基因组DNA进行酶切和PFGE分析,最后利用BioNumerics软件进行聚类分析。结果:19.3%(23/119)的临床乳房炎奶样和14.8%(26/176)的亚临床乳房炎奶样确定为金黄色葡萄球菌阳性样品,分别从中分离鉴定出43株和26株金黄色葡萄球菌,其中临床乳房炎分离株中有5株为mecA基因阳性。临床乳房炎奶牛奶样中检测到SA的SEA、SEB、SED、SEJ和PVL毒素基因,检出率分别为3.8%(1株)、11.5%(3株)、19.2%(5株)、7.7%(2株)和31.2%(10株);亚临床乳房炎奶牛乳样中仅检测到SA的SEA和PVL毒力基因,检出率分别为7.0%(3株)和84.1%(37株)。表明临床与亚临床乳房炎奶牛乳汁中SA菌株携带的毒素基因不一样,SEs可能是临床乳房炎菌株的重要致病基因,PVL可能是亚临床乳房炎菌株的重要致病基因。69株SA使用SmaⅠ酶切分型后,可分为7个大簇、50个基因型,来源相同的SA分型后大部分位于同一簇内。临床乳房炎奶牛乳汁中检测到MRSA菌株,PVL基因在亚临床乳房炎中的检出率为临床乳房炎的2.7倍。PFGE方法能较好的区分临床乳房炎和亚临床乳房炎的SA分离菌株。

甲氧西林耐药/敏感金黄色葡萄球菌基因分型和毒力基因检测

目的分析耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(金葡菌)(MRSA)和甲氧西林敏感金葡菌(MSSA)临床分离株基因分型及毒力基因分布特征是否存在差异,了解金葡菌耐药性演变与毒力变迁之间的相关性。方法采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)方法和多位点序列分型(MLST)方法对呼和浩特地区住院患者中分离的30株MRSA和30株MSSA进行分子分型,同步采用聚合酶链反应(PCR)方法检测菌株毒力基因。结果 60株金葡菌PFGE分型共分19个型,MSSA菌株分布在I和H型等16个基因型中,而MRSA株主要集中分布在K和M2个基因型中。20株不同PFGE型菌株MLST分型结果显示,MRSA株主要为ST-239型;MSSA株呈多样性分布特征,主要以ST-5型、ST-7型、ST-15型为主。毒力基因在MRSA和MSSA中分布差异显著。MSSA毒力基因整体携带率明显高于MRSA(53.9%对40.0%,χ2=32.7,P<0.01)。MRSA株sea、cna和cap8基因携带率明显高于MSSA携带率(P<0.01),而sec、seg、sei、sem、sen、seo、fnbB、ebpS、cap5基因携带率明显低于MSSA(P<0.05)。结论呼和浩特地区金葡菌临床分离株基因型呈现多样化分布特点,MRSA主要以ST-239型为主。MSSA毒力基因携带率高,特定毒力因子在MRSA和MSSA株中呈现一定聚集分布特征,金葡菌特定耐药性的获得可能伴随特定毒力特征的变化。

牛源金黄色葡萄球菌spa基因多态性分型研究

目的为了研究引起奶牛乳房炎的主要病原菌金黄色葡萄球菌的35个分离株进行spa基因多态性分型研究。方法在河北、内蒙古、山东、黑龙江、湖北、河南等省份采集奶牛乳房炎奶样,经实验室分离鉴定,从中择35株金黄色葡萄球菌,采用PCR方法扩增spa基因的X区域,测序后根据数据库(http://www.ridom.de/spaserver/)进行分型。结果35株菌可分成11个型,分别为t521型有8株,t518型和t2788型各5株,t246型和t519型各4株,t359型和t2756型各3株,t189型t、224型t、267型t、2759型各有1株;同时发现3个新型,分别为t2788、t2756t、2759。结论研究显示spa基因分型方法具有快速、分辨力强、易于标准化等特点,可用于牛源金黄色葡萄球菌的基因分型及生态学等研究。

奶牛源金黄色葡萄球菌新疆流行株的耐药特性、毒力基因及分子分型

旨在了解引起奶牛乳房炎和子宫内膜炎的金黄色葡萄球菌(SA)新疆流行株的耐药性、毒力基因及其分子流行病学特征。对2014—2016年新疆地区155株SA奶牛临床分离株的耐药表型进行分析,并对耐甲氧西林SA(MRSA)进行鉴定;通过PCR技术对SA的耐药基因、毒力基因进行检测及SCCmec、MLST分子分型。结果在155株SA中检出22株MRSA,检出率为14.2%;MRSA流行株的耐药性明显高于甲氧西林敏感SA(MSSA);不同的毒力基因在MSSA和MRSA中的检出率有所差异;SCCmecⅠ为新疆地区SA主要基因型;MLST分型共检出14种ST型,分别为ST188、ST584、ST9、ST805、ST2373、ST968、ST2139、ST1、ST2700、ST903、ST2454、ST2990、ST63、STX,其中ST1和ST9检出率相对较高,在MSSA菌株中ST9型的检出率最高,MRSA菌株中ST1检出率最高。研究表明,新疆地区奶牛源SA中主要流行株为MSSA,但MRSA耐药性更强,且毒力基因分布多样,ST9为MSSA流行株的主要基因型,ST1-SCCmecⅠ为MRSA流行株的主要基因型。

牛源金黄色葡萄球菌凝固酶基因的分型

为了了解我国不同地区奶牛场金黄色葡萄球菌基因型的分布情况,采用凝固酶基因(Coa)扩增的分型方法,对在奶牛乳房炎奶样中所分离到的26株金黄色葡萄球菌进行了分型。结果显示,26株金黄色葡萄球菌共分为5个基因型,黑龙江省分离株以PCR 3型为主(10/16)。发现在同一牛群中的分离株可以存在相同的基因型,也可以存在不同的基因型;而不同牛群中的分离株也可属于同一基因型。这种结果提示,在某个或某些牛群中存在某一金黄色葡萄球菌的流行型,但也可能存在多个金黄色葡萄球菌的克隆。

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌基因分型研究

目的了解本地区耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)流行株的来源和遗传背景。方法回顾分析华西医院127例MRSA感染者的病例资料,用SCCmec多重PCR技术、葡萄球菌A蛋白(spa)分型技术和多位点测序分型技术对其中10株MRSA临床分离株进行基因分型,并检测其杀白细胞毒素基因。结果病例资料显示127株MRSA中3株为社区获得性MRSA(CA-MRSA),其余均为医院获得性MRSA(HA-MRSA)。进行分型研究的10株MRSA中,7株HA-MRSA为SCCmec Ⅲ-ST239-PVL(-),呈现高度的克隆一致性,spa分型进一步显示4株为t030,另外3株为t037;CA-MRSAs19165分型为ST8-t008,与USA300属同一克隆,并且携带SCCmecⅣa和PVL基因,符合USA300一般基因特征。另外2株CA-MRSAs35301、s29635均为SCCmecⅣa-ST59-t437,与我国其他地区的报道不同。结论该院分离的MRSA仍以医院获得性为主(124/127),HA-MRSA呈现高度的克隆一致性,并与我国的主要流行株为同一克隆;分离到与美国主要CA-MRSA流行株USA300相同克隆的菌株,另外分离到的CA-MRSAST59-t437克隆株在我国其他地区未有报道。MLST和spa分型技术是金黄色葡萄球菌分子流行病学研究的更为简便快速的方法。

金黄色葡萄球菌肠毒素基因的分型和分布

目的:建立金黄色葡萄球菌肠毒素基因的检测方法。初步研究生牛奶中金黄色葡萄球菌肠毒素基因的分布状况。方法:应用PCR扩增经分离鉴定的金黄色葡萄球菌肠毒素基因SEA-SEJ,电泳检测扩增结果。结果:建立了金黄色葡萄球菌肠毒素基因PCR检测方法。从生牛奶中分离的29株金黄色葡萄球菌检测到SEA-SED和SEG-SEJ基因,没有检测到SEE基因。毒素基因携带率为65.5%,同时携带2种及以上毒素基因的菌株占37.9%。有SEA基因的占51.7%,含其它传统的毒素基因类型SEB、SEC、SED和SEE基因的菌株只占17.2%,携带新发现的毒素基因SEG、SEH、SEI和SEJ的菌株占41.4%。结论:建立的PCR检测金黄色葡萄球菌的肠毒素基因的方法可用于金黄色葡萄球菌肠毒素基因分型和分布的研究。研究表明,生牛奶中分离的金黄色葡萄球菌带毒率高,而且携带新发现的肠毒素基因的较多。

耐甲氧西林葡萄球菌HVR基因分型及其与耐药性的关系

目的 为获得成都地区耐甲氧西林葡萄球菌的 HVR- PCR基因型 ,比较 HVR基因型与耐药谱的关系 ,从而指导临床合理选用抗生素 ,并初步探讨其在分子流行病学分析中的作用。方法 从成都地区四家三甲医院收集到临床分离的葡萄球菌 114株。其中 86株 MRSA、10株 MRSE(Mcr S.epidemidis)、5株 MSSE(Mcs S.epidemidis)、8株 MRSH(Mcr S.haemolyticus)和 5株 MSSH(Mcs S.haemolyticus) ,用琼脂平皿二倍稀释法测定其MIC值 ,改良的碱裂解法提取 DNA,应用 PCR技术 ,扩增 mec基因高变区 (HVR区 ) ,聚丙烯酰胺凝胶垂直板和琼脂糖凝胶电泳分型。结果 根据 PCR产物片段大小 ,MRSA、MRSE和 MRSH分别被分为 4种、3种和 2种基因型 ,其中有 9株 MRSE的 PCR扩增产物片段大小与 MRSA相同。 MRSA主要为 A、D型 ,分别占 5 2 .32 %和39.5 3% ;B、C型最为耐药 ,而 D型对多种药物敏感。 MRSE的 型为高度多重耐药株 ,而 型对多种抗生素敏感。MRSH的 a型比 b型耐药。结论 HVR- PCR法对于由 MRSA引起的院内感染的流行病学调查是一种快速、简单、可靠的分型法 ,且有利于抗菌药物的选用。这种方法能够部分比较 MRSA菌株和耐甲氧西林的凝固酶阴性葡萄球菌 (Mcr CNSt)的 mec决定因子 ,从而探讨其起源。

金黄色葡萄球菌基因分型方法研究进展

金黄色葡萄球菌是引起医院和社区感染的重要致病菌之一,也是引起奶牛乳房炎的重要致病菌。为有效控制其感染及流行,并为临床采取控制措施提供理论依据,需要对菌株进行分型。本文就金黄色葡萄球菌的基因分型方法研究进展作一综述。

奶牛乳房炎病例中金黄色葡萄球菌RAPD-PCR基因分型的研究

用随机扩增多态性DNA技术(RAPD)对来自2个集约化奶牛场不同奶牛乳房炎病例分出的16株金黄色葡萄球菌进行了基因分型。分别用3个寡核苷酸引物扩增,仅OLP11引物可扩增出质量良好、具有RAPD特征的条带图谱。对反应体系的退火温度、模板浓度进行了筛选,模板原倍浓度、33℃的退火温度能使所有检测菌株产生清晰、可分辨、具有较好重复性的带谱。分型结果表明,16株菌可分为2个类群,其中14株位于同一类群,大多数菌株的相关系数差距仅为0.04,这一结果提示这些菌株可能具有相同的来源和相似的遗传背景。

医院感染耐甲氧西林金黄色葡萄球菌基因分型研究

目的分析医院不同科室来源的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)菌株基因分型同源性,为控制MRSA医院感染流行提供科学依据。方法使用细菌基因组重复序列聚合酶链反应(REP-PCR)以及高级微生物基因分型系统(DiversiLab)细菌同源性分析技术对23株医院感染的MRSA进行基因分型。结果 23株MRSA分为4个基因型,A型、D型主要分布于急诊观察室,B型、C型主要分布于中医外科。结论中医外科存在以B型、C型基因型为流行株的MRSA医院感染爆发;REP-PCR技术和DiversiLab自动化细菌同源性分型技术可成为医院感染病原研究的有效手段。

随机引物聚合酶链反应对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌基因分型的研究

目的建立耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（ＭＲＳＡ）随机引物聚合酶链反应（ＡＰ－ＰＣＲ）基因分型的方法用于；临床流行病学调查。方法优化ＡＰ－ＰＣＲ方法并与抗生素敏感谱分型法比较，评价ＡＰ－ＦＣＲ基因分型法的可靠性与分辨力；并对４９株ＭＲＳＡ进行ＡＰ－ＲＣＲ基因分型。结果４９株医院感染的ＭＲＳＡ可分为１０个ＡＰ－ＰＣＲ谱型，主要谱型为 Ａ３型，分型率 １００％；其中 ４１株 ＭＲＳＡ为流行病学相关株。结论 ＡＰ－ＰＣＲ基因分型是一种经济、快捷、可靠的分型方法；是在分子水平上对微生物感染进行病原学、发病机理及流行病学研究较理想的工具。