葡萄球菌染色体mec盒多位点复合PCR分型测定

目的研究用多位点复合PCR分型法高效、快速、准确地测定金黄色葡萄球菌SCCmec型别。方法采用正交设计和平行对比分析,对影响测定结果的退火温度、延伸时间,MgCL2、dNTP、Taq DNA聚合酶、引物的用量进行了测试。结果获得多位点PCR测定的最佳退火温度为55℃、延伸时间为1 min,以及MgCl2、dNTP、TaqDNA聚合酶和各位点引物的最佳用量。结论多位点PCR测定是一种高效、快速、实用的SCCmec分型方法,可用于大规模的MRSA分子流行病学研究。

医院获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌57株的葡萄球菌染色体mec基因盒基因分型及耐药性分析

目的了解上海长征医院临床分离的医院获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(HA-MRSA)的葡萄球菌染色体mec基因盒(SCCmec)的基因分型及耐药状况。方法收集上海长征医院2010年8月—2011年8月从医院获得性肺炎下呼吸道分离的57株HA-MRSA。应用聚合酶链反应(PCR)检测mecA基因,多重PCR方法对HA-MRSA进行SCCmec基因分型。采用标准的K-B纸片扩散法测定HA-MRSA对β内酰胺类抗生素(青霉素、苯唑西林、头孢西丁、头孢曲松)和非β内酰胺类抗生素[环丙沙星、左氧氟沙星、红霉素、克林霉素、利福平、万古霉素、替考拉宁、利奈唑胺和复方磺胺甲基异口恶唑(TMP-SMZ)]的敏感性。结果 57株HA-MRSA的mecA基因均为阳性,有39株明确分型,其中SCCmecⅡ型11株(19.3%),SCCmecⅢ型19株(33.3%),SCCmecⅣb型1株(1.7%),SCCmecⅣc型1株(1.7%),SCCmecⅣd型7株(12.3%),未发现SCCmecⅠ型和SCCmecⅤ型。另有18株(31.6%)mecA基因阳性菌株未能分型。全部57株对青霉素、苯唑西林、头孢西丁、头孢曲松耐药;55株(96.5%)对左氧氟沙星耐药,1株中度敏感,1株敏感;56株(98.2%)对环丙沙星耐药,1株敏感;54株(94.7%)对红霉素耐药,1株中度敏感,2株敏感;47株(82.5%)对克林霉素耐药,2株中度敏感,8株敏感;25株(43.9%)对TMP-SMZ耐药,1株中度敏感,31株敏感;10株(17.5%)对利福平耐药,47株敏感;57株对替考拉宁、万古霉素、利奈唑胺均敏感,耐药率为0。结论上海长征医院临床分离HA-MRSA的SCCmec基因型以Ⅲ型、Ⅱ型为主,除1株携带SCCmecⅣb型的HA-MRSA外,其余56株(包括SCCmecⅡ、Ⅲ、Ⅳc、Ⅳd型)均具有多重耐药的特征。

老年病房耐甲氧西林金黄色葡萄球菌葡萄球菌染色体mec基因盒基因型和杀白细胞素基因的检测及特点

目的了解复旦大学附属华东医院老年科临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)葡萄染色体mec基因盒(SCCmec)的分布和杀白细胞毒素(PVL)基因的携带状况。方法收集复旦大学附属华东医院老年科病房2011年2—7月从临床标本中分离的不重复MRSA共57株。运用多重聚合酶链反应检测金黄色葡萄球菌16SrRNA基因、PVL基因和mecA基因,并同时检测SCCmec的基因型及亚型。采用琼脂稀释法进行13种药物的药物敏感试验。结果 57株MRSA中,SCCmecⅠ型1株(1.8%),SCCmecⅠA型5株(8.7%),SCCmecⅡ型30株(52.6%),SCCmecⅢ型15株(26.3%),SCCmecⅢA型2株(3.5%),4株(7.0%)未能分型。57株MRSA中,PVL基因均为阴性。MRSA菌株最敏感的药物为万古霉素和利奈唑胺(敏感率均为100.0%),其次为呋喃妥因和甲氧苄啶-磺胺甲口恶唑(98.2%、96.5%)。结论复旦大学附属华东医院老年科临床分离的MRSA呈多重耐药,其SCCmec型别主要以SCCmecⅡ型和SCCmecⅢ型为主,未发现PVL基因阳性菌株。

葡萄球菌盒式染色体在耐药中的作用

金黄色葡萄球菌可通过获得携带mec基因的葡萄球菌盒式染色体(SCCmec)产生对甲氧西林和其他多种抗生素的耐药.SCCmec是一种不同于噬菌体和转座子的可移动元件.本文详细介绍了SCCmec的结构和分型,并对其发现、起源及其与耐药的关系等进行综述.

甲氧西林金黄色葡萄球菌的葡萄球菌盒式染色体基因分型及耐药特性分析

目的探讨耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)SCCmec基因分型及耐药特性,为临床有效治疗不同感染类型的菌株提供理论支持。方法收集2019年1—12月本院住院患者检出的MRSA96株进行16种抗菌药物耐药性检测,采用聚合酶链反应(PCR)技术对MRSA的mecA及SCCmec基因进行检测。结果96株MRSA对万古霉素、利奈唑胺、喹努普汀/达福普汀、替加环素敏感率为100%,对青霉素G、苯唑西林、头孢西丁耐药率为100%,对克林霉素、红霉素、庆大霉素、左氧氟沙星、莫西沙星、利福平、复方新诺明、四环素、环丙沙星耐药率分别为76.04%、77.08%、8.33%、22.92%、14.58%、6.25%、6.25%、37.5%、27.08%。96株MRSA中mecA基因阳性为86株(89.58%),SCCmec基因分型结果显示:SCCmecⅡ型16株(16.67%)、SCCmecⅢ型25株(26.04%)、SCCmecⅣa型51株(53.13%)、SCCmecⅣb型1株(1.04%),未分型3株(3.12%)、未检出SCCmecⅠ型、SCCmecⅣc型、SCCmecⅣd型、SCCmecⅤ型。结论我院分离的MRSA菌株以SCCmecⅣa型为主,临床治疗MRSA感染时应根据细菌药敏结果合理选用抗菌药物。

合肥地区耐甲氧西林金黄色葡萄球菌SCCmec分型及耐药性分析

目的 研究合肥地区临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)携带mec基因簇的葡萄球菌盒式染色体(SCCmec)分型及药物敏感性,了解合肥地区MRSA流行株的耐药表型和分型特征。方法 从5所教学医院随机选取2016年1月至2021年12月的264株非重复MRSA菌株,利用头孢西丁纸片扩散法筛选MRSA,采用PCR扩增mec A基因,采用多重PCR进行MRSA的SCCmec分型分析。采用WHONET 5.6软件分析不同SCCmec型别MRSA菌株对抗菌药物的敏感性。结果 264株MRSA菌株中,SCCmecⅡ型156株(59.1%),Ⅳa型92株(34.8%),Ⅲ型4株(1.5%),12株(4.5%)未分型。SCCmecⅡ型和Ⅳa型MRSA对达托霉素、替加环素、利奈唑胺和万古霉素的敏感率均为100.0%。SCCmecⅡ型MRSA对环丙沙星、左氧氟沙星、莫西沙星和庆大霉素的耐药率高于SCCmecⅣa型,差异均有统计学意义(P均<0.05)。不同分型的MRSA菌株对红霉素、克林霉素、四环素、复方磺胺甲唑和利福平的耐药率差异无统计学意义(P均>0.05)。结论 合肥地区MRSA菌株SCCmec分型以Ⅱ型和Ⅳa型为主,不同分型MRSA对某些抗菌药物的耐药性存在差异,动态监测这类细菌的分型和药物敏感性有一定临床意义。

新的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌染色体基因盒型别与其产毒性和耐药性的研究

目的探讨新的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）染色体基因盒（SCCmec）型别的耐药性和产毒性，进一步明确SCCmec型别的多重耐药模式。方法采用多重聚合酶链反应（PCR）扩增法，对临床分离出的金黄色葡萄球菌菌株进行SCCmec分型及其相关毒力基因耐药性测定。 结果本实验应用9对位点特异性引物对13株MRSA进行了多位点PCR分型测定，共检测到5种不同的测定位点构成图谱，其中3种图谱与已有的ⅢD型、ⅡD型和Ⅳ型相同，2种图谱为未见报道的Ⅱ型和Ⅲ型新亚型。ⅢD型、ⅡD型和Ⅳ型分别发现1株、1株和2株，Ⅱ型新亚型发现6株，Ⅲ型新亚型发现3株，新的SCCmec型别亚型比例较高，占69.2%（913）。新Ⅱ型亚型含有Ⅱ型上游位点B和C,下游位点G，缺乏Ⅱ型下游特异性位点D；新Ⅲ型亚型含有Ⅲ型的上游位点C、E和下游位点F，缺乏下游位点G，多了一个Ⅱ型的下游位点D；其对应菌株的毒力基因检测含有femA、see、etb和tst基因。结论新的SCCmec型别的MRSA，它的基因型与已报道的基因型有所不同，新的菌株同时产3种毒素基因，而且还含有femA基因，故新的菌株不仅是MRSA的高度耐药株，同时产毒性高、耐药性高、抗药谱广，值得引起高度重视和关注。

社区和医院获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌MLST联合SCCmec基因分型及耐药性比较

目的了解社区获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(CA-MRSA)和医院获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(HAMRSA)分离株的耐药性及遗传背景。方法对CA-MRSA和HA-MRSA进行多位点序列分型(MLST)检测,应用多重聚合酶链式反应(PCR)技术对CA-MRSA和HA-MRSA进行SCCmec基因分型;采用Walk WAY96PLUS PC33药敏板联合K-B纸片扩散法检测CA-MRSA和HA-MRSA抗菌药物敏感性。结果 63株HA-MRSA共检测出2个基因型,4株CA-MRSA共检测出4个基因型,二者遗传背景完全不同。HA-MRSA对红霉素、克林霉素、四环素、庆大霉素、左氧氟沙星和环丙沙星耐药率显著高于CAMRSA(均P<0.05)。结论滨州医学院附属医院CA-MRSA和HA-MRSA分型及主要流行株存在差异,CA-MSSA药物敏感性明显高于HA-MRSA;MLST联合SCCmec基因分型方法是MRSA分子流行病学分析的有效方法。

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌MLST联合SCCmec基因分型与耐药性分析

目的了解滨州医学院附属医院MRSA菌株多位点序列分型(MLST)联合SCCmec基因型分布和各种基因型的耐药特征。方法采用聚合酶链反应(PCR)对MRSA菌株进行MLST联合SCCmec基因分型;采用Walk WAY96PLUS PC33药敏板检测MRSA抗菌药物敏感性。结果 SCCmec基因分型结果以Ⅲ型为主(63/67株,占94.03%),MLST分型共检测出6种基因型:ST88、ST121、ST221、ST82、ST239及ST399,其中以ST239(61/67,91.04%)为主,耐药性分析显示SCCmecⅢ型MRSA菌株表现为多重耐药。结论ST239-MRSA-SCCmecⅢ型菌株为鲁北地区MRSA主要流行菌株,该型菌株对多种抗生素呈多重耐药;MLST联合SCCmec基因分型方法是MRSA遗传背景研究简便快速的方法。

ICU耐甲氧西林金黄色葡萄球菌SCCmec基因分型及耐药性研究

目的了解医院重症监护病房(ICU)分离的MRSA菌株SCCmec基因型及耐药特征。方法通过多重PCR进行SCCmec基因分型;采用AST GP67药敏试剂盒进行药敏检测。结果 120株MRSA菌株,SCCmecⅡ型15株(12.5%),SCCmecⅢ型96株(80%),SCCmec未定型9株(7.5%);120株MRSA菌株对β内酰胺类抗生素、喹诺酮类抗生素高度耐药;SCCmecⅡ型对克林霉素耐药性高(93.3%),而对四环素耐药性低(26.7%);SCCmecⅢ型对庆大霉素耐药高(91.7%);SCCmec未定型对复方磺胺甲噁唑耐药性高(77.8%)。不同SCCmec基因型MRSA对奎奴普汀、万古霉素、呋喃妥因100%敏感。结论目前医院的流行的MRSA多为SCCmecⅡ型和SCCmecⅢ型,各型对β-内酰胺类抗生素、喹诺酮类抗生素、氨基糖苷类、四环素类、大环内酯类均表现不同程度的耐药,今后应加强耐药基因的监测有效控制MRSA感染流行。

医院感染甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌的SCCmec分型及同源性研究

目的研究多重耐药的甲氧西林耐药金葡菌（MRSA）菌株的SCCmec基因分型,并对菌株进行同源性分析。方法纳入26株耐药谱相同的MRSA菌株,采用多重PCR检测SCCmec的分型;应用Rep-PCR法采用DiversiLb系统对菌株进行同源性分析。结果 26株MRSA的SCmec多数为Ⅲ型,占84.6%,另检出Ⅱ型2株、Ⅳ型1株,1株未能分型;未发现I型SCCmec。DiversiLab分析结果显示MRSA可分为10组,同源性介于40%～100%。其中SCCmee-Ⅱ亚型2株完全相同。SCCmec-Ⅲ亚型subtype 1型相似性在90%以上;subtype 3型4株为同一组、MRSA相似性在95%以上;subtype 2型可分为5组,相似性在90%以上。结论医院感染多重耐药的MRSA多数以SCCmec-Ⅲ型为主,医院内存在一定流行,应引起临床医师及感染控制部门重视。

金黄色葡萄球菌的药敏表型和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的SCCmec基因分型

目的研究从临床标本中分离的金黄色葡萄球菌（SA）的耐药性、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的发生率及其葡萄球菌盒式染体色mec（SCCmec）基因分型。方法采用纸片琼脂扩散法进行SA耐药性检测及MRSA测定,应用多重聚合酶链反应（PCR）进行SCCmec各基因型及PV杀白细胞素（PVL）基因型的检测。结果 102株SA中检出39株MRSA,检出率为38.2%（39/102）。甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌（MSSA）对克林霉素、复方磺胺甲口恶唑、四环素3种抗菌药物耐药率较高,分别为39.7%、31.7%、22.2%;对庆大霉素及喹诺酮类耐药率较低,为6.3%~14.3%。而MRSA对克林霉素、β-内酰胺类抗菌药物100%耐药,对其他药物表现为多重耐药。未检出万古霉素耐药菌株。MRSA菌株的SCCmec基因型以SCCmecⅢ型为主,占71.2%,SCCmecⅣa占10.3%,未检测出PVL基因。结论临床分离的SA中,MRSA耐药率较MSSA高且表现为多重耐药,其SCCmec基因分型主要表现为SCCmecⅢ型,其次是SCCmecⅣa。

社区获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌SCCmec分型及耐药性研究

目的探讨武汉地区社区获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(CA-MRSA)葡萄球菌盒染色体mec(SCCmec)基因型和耐药现状。方法采用前瞻性研究,选取武汉5所医疗机构门诊就诊的1400例皮肤软组织感染(SSTI)患者,采集病灶标本进行细菌培养。采用纸片扩散法对所有分离到的金黄色葡萄球菌进行药敏试验。应用多重PCR对CA-MRSA进行SCCmec分型。结果从1400例SSTI中共分离到203株金黄色葡萄球菌,分离率为14.50%(203/1400),其中有21株CA-MRSA,分离率为10.34%(21/203),SCCmec分型为10株SCCmecⅣ型、11株SCCmecⅤ型,SCCmecⅣ型有两种亚型(9株SCCmecⅣa、1株SCCmecⅣh)。药敏结果显示,CA-MRSA对红霉素敏感性低,为14.29%;对多西环素、复方磺胺甲噁唑敏感性较高,分别为95.24%、61.90%;有9.52%为多重耐药菌,均为SCCmecⅣ型;MSSA对大部分抗菌药物较敏感。结论 CA-MRSA在武汉地区SSTI患者中的分离率较低,对大多数非β-内酰胺类抗菌药物较为敏感,多重耐药率较低,经验治疗宜选择复方磺胺甲噁唑和多西环素。

医院获得性感染中出现携带SCCmec Ⅳ/Ⅴ的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（英文）

目的研究某院临床分离的医院获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(HA-MRSA)的葡萄球菌染色体mec盒(SCCmec)分型及分子流行病学特征。方法收集中南大学湘雅医院2012年1月~2012年12月临床分离的71株HA-MRSA,采用多重PCR进行SCCmec分型,PCR检测PVL毒素基因,并用脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析菌株间的同源性。结果 71株HA-MRSA以SCCmecⅢ型为主,占69.0%(49/71),其次为SCCmecⅣ型、SCCmecⅤ型和SCCmecⅡ型,分别占14.1%(10/71)、4.2%(3/71)和4.2%(3/71),另有6株(8.5%)菌株未能分型。HA-SCCmecⅣ/ⅤMRSA感染者年龄显著低于HA-SCCmecⅠ/Ⅱ/ⅢMRSA感染者,携带PVL基因阳性率显著高于HA-SCCmecⅠ/Ⅱ/ⅢMRSA感染者,而两者入院至检出菌株的时间及住院天数均未见明显差异。HA-SCCmecⅣ/ⅤMRSA对左旋氧氟沙星、环丙沙星、利福平、庆大霉素、四环素等的耐药率均显著低于HA-SCCmecⅠ/Ⅱ/ⅢMRSA(P<0.05)。13株HA-SCCmecⅣ/ⅤMRSA菌株在55%的相似度水平形成一个大的组群。按照≥85%的相似度,这些菌株共形成3个PFGE簇以及4个单一菌株的PFGE型。结论在国内首次发现携带SCCmecⅤ型的HA-MRSA菌株,HASCCmecⅣ/ⅤMRSA已有在医疗机构传播的趋势,并成为医院内感染的重要来源。

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的两种新SCCmec型别及其抗药性研究

为探明本地区耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)的耐药性、流行病学分布状况及携带的葡萄球菌染色体mec盒(SCCmec)型别,用K-B琼脂扩散法、E-test和多位点PCR,对临床分离的金黄色葡萄球菌菌株进行了SCCmec分型及耐药性测定。结果发现了两种新的SCCmec型别,新1型含Ⅱ型的mecA上游特异性位点B和位于mecA内的M位点以及Ⅲ型的下游位点F,缺乏Ⅱ型上游位点C和下游位点D、G;新2型含Ⅰ、Ⅱ型的上游特异性位点A、B和两个Ⅲ型的下游位点F、H,同样缺乏位点C、D、G,可能分别为原有Ⅱ型和Ⅰ、Ⅱ型与Ⅲ型的基因重组株;且携带有新SCCmec型别的MRSA菌株,其流行病学分布特点及抗药性也与国外已报导的菌株不同,多分自门诊病人,且耐药性高,抗药谱广,值得引起高度重视和关注。

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药性变迁及SCCmec基因分型

目的分析2011~2013年北京友谊医院耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）耐药谱变迁;了解其葡萄球菌盒式染体色mec（SCCmec）基因型分布特点。方法使用WHONET 5.6软件对2011至2013年间MRSA药物敏感结果进行数据分析。收集2013年3月至2013年10月首都医科大学附属北京友谊医院临床检验中心细菌室分离的非重复MRSA 30株,采用多重聚合酶链反应（PCR）对其进行SCCmec基因型分型。结果 2011~2013年3年的调查显示,临床标本中共分离出1 133株金黄色葡萄球菌检出MRSA 662株,检出率58.4%,3年检出率成逐渐上升趋势。MRSA检出标本来源于痰液及咽拭子最多,其次为血液、脓分泌物和尿液标本。MRSA主要分布在ICU、医保中心和急诊。662株MRSA对青霉素均为100%耐药,红霉素、克林霉素、庆大霉素、四环素耐药率均〉80%,环丙沙星、莫西沙星、左氧氟沙星耐药率97.2%~95%和96.7%~88.8%和97.2%~95.4%,对呋喃妥因、复方新诺明较敏感,耐药率〈10%,3年中未发现对万古霉素、替加环素,喹努普汀/达福普汀、利奈唑胺耐药菌。检出SCCmec III型有27株,检出率为90.0%;其余3株为未分型菌株,占10.0%。结论本次MRSA耐药监测中,其对万古霉素、利奈唑胺、替加环素均保持着高度敏感性,对呋喃妥因、复方新诺明较敏感,耐药率〈10%。其SCCmec基因分型以SCCmecⅢ型为主,与国内多数地区、医院报道的以SCCmecⅢ型为主相符。

广东省耐甲氧西林金黄色葡萄球菌SCCmec分型研究

目的分析本地区分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)葡萄球菌盒染色体mec(SCCmec)类型。方法利用3套多重PCR体系扩增耐甲氧西林金黄色葡萄球菌SCCmec型特异性位点、共同位点、鉴别位点、内参照位点以及mec基因复合物和ccr基因复合物进行SCCmec分型。结果分离的156株MRSA中,6株MRSA不能分型,可分型率为96.2%。其中,Ⅲ型SCCmec 125株,占83.3%,Ⅱ型SCCmec 11株,占7.3%,Ⅳ、Ⅴ型SCCmec各7株,占4.7%。结论本地区分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌流行携带最多耐药基因的Ⅲ型SCCmec。

重症监护病房耐甲氧西林金黄色葡萄球菌SCCmec基因分型的研究

目的：研究重症监护病房（ICU）耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）SCCmec 基因及耐药特征.方法：应用聚合酶链反应（PCR）对32株 MRSA 进行 SCCmec 基因分型,采用K-B纸片扩散法检查MRSA对18种抗生素的敏感性.结果：32株MRSA中SCCmecⅢ型28株,占87.5%,SCCmecⅡ型1株,占3.1%,SCCmecⅣ型3株,占9.4%,未发现SCCmecⅠ型株.32株MRSA对万古霉素、替考拉林、利奈唑胺均敏感,对复方新诺明、利福平、氯霉素耐药率分别为37.5%、56.3%、68.8%,其余抗生素均呈高水平耐药.结论：本院 ICUMRSA 感染以 SCCmec Ⅲ型为主,呈高度耐药性.

甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌SCCmec耐药元件及其菌株间水平转移机制

金黄色葡萄球菌（金葡菌）是人及动物正常菌群的重要组成成分。部分金葡菌可导致疾病,引起皮肤、黏膜等处的化脓性感染,甚至导致菌血症、中毒性休克综合征等危及患者生命的严重疾病,是医院感染和社区获得性感染的重要病原菌之一。自1961年出现以来,耐甲氧西林金葡菌（MRSA）的感染率逐年攀升[1]。

社区获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌基因分型及耐药性研究

目的了解社区获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(CA-MRSA)分离株的耐药性及遗传背景。方法对CA-MRSA进行多位点序列分型(MLST)检测,采用应用多重聚合酶链式反应(PCR)技术对CA-MRSA进行SCCmec基因分型;采用微量稀释法检测CA-MRSA抗菌药物敏感性。结果 76株社区获得性金黄色葡萄球菌共检测出4株CA-MRSA,分别为4个基因型,分别为ST88-MRSA-Ⅳa;ST121-MRSA-Ⅳa;ST221-MRSA-Ⅳa;ST82-MRSA-Ⅳa;CA-MRSA对非β-内酰胺类抗生素多为敏感。结论滨州医学院附属医院分离到4株CA-MRSA,表明已有CA-MRSA的散发流行,但没有发现与国际主要CA-MRSA流行株相同克隆株的发现,MLST联合SCCmec基因分型方法是CA-MRSA分子流行病学研究简便快速的方法。