葡萄生单轴霉菌围可培养微生物多样性及潜在生防菌研究

【目的】揭示葡萄生单轴霉(Plasmopara viticola)菌围可培养细菌和真菌的多样性特征,筛选对葡萄霜霉病有较强稳定防治效果的生防菌。【方法】连续两年从我国南北方具有代表性的7个葡萄产区采集葡萄霜霉病叶,镊子夹取经保湿培养获得的新鲜霉层并配制孢子囊悬浮液,采用传统分离培养法,结合形态分类、BOX-PCR指纹图谱分析以及分子鉴定结果,对葡萄生单轴霉菌围的可培养细菌和真菌进行聚类分析;采用菌株及其发酵液与病原菌孢子囊悬浮液等体积混合培养测定其对孢子囊的抑制作用,离体叶片接种法检测该菌株及其发酵液对霜霉病的防治效果。【结果】分离获得了90株细菌和110株真菌,分别归属于8个细菌属和14个真菌属,且相同地区不同葡萄品种葡萄生单轴霉菌围的细菌和真菌在同年处于同一分支。假单胞菌属(Pseudomonas)和枝孢属(Cladosporium)稳定存在于各地区不同品种葡萄霜霉病叶上葡萄生单轴霉菌围;在两年间稳定存在的菌株占比多数在80.0%以上且均具有较高的生防作用;其中,广泛分布的6株枝顶孢属(Acremonium)真菌对葡萄霜霉病的防治效果均较好,最高可达100.0%;防治效果较高的11个菌株的无菌发酵液中,黑曲霉(Aspergillus niger)NX2F、苋楔孢黑粉菌(Thecaphora amaranthi)BJ1G和匍枝根霉(Rhizopus stolonifer)BM1L的无菌发酵液防治效果均为100.0%。【结论】葡萄生单轴霉菌围的可培养细菌和真菌群落主要受地区因素影响,有较高的稳定性和生防作用,揭示了枝顶孢属真菌在我国葡萄主要产区葡萄生单轴霉菌围附生的普遍性,为葡萄霜霉病的防治提供了丰富和宝贵的资源。

葡萄生单轴霉离体双培养研究

以葡萄生单轴霉病原菌的人工保存和培养为目的,采用寄主植物和病原菌离体双培养的方法,确定了葡萄生单轴霉离体双培养用的葡萄品种、影响葡萄苗生长的最佳生长调节剂浓度,并建立了离体双培养的操作体系。试验结果表明葡萄无菌苗的最适继代培养基为MS+BA 0.5 mg/L+IBA 0.15 mg/L;不定芽分化培养基为1/2MS+BA 0.3mg/L+IBA 0.1mg/L;最适生根培养基为1/2MS+NAA 0.1mg/L。

基于MTT染色法对葡萄生单轴霉孢子囊存活力的检测

本文利用MTT染色法和点接生物测定法对不同温度干燥处理36h后的葡萄生单轴霉孢子囊存活力和致病力进行了检测,并应用单因素试验和正交试验对其孢子囊进行了MTT染色条件的优化。结果表明:葡萄生单轴霉孢子囊MTT染色的最佳条件为温度36℃、MTT浓度0.05%、染色48h,孢子囊染色率可达83.0%。20℃恒温干燥处理36h显著提高了孢子囊存活力,葡萄生单轴霉孢子囊的蓝色染色率为79.3%,叶片点接发病率为98.9%,显著高于对照的蓝色染色率52.0%和发病率62.7%。MTT染色得到的孢子囊蓝色染色率与点接生物测定法得出的发病率存在很好的线性关系y=1.276 1x-1.939 1,R2=0.996 1,孢子囊的蓝色染色率与叶片点接发病率呈正相关。本研究表明MTT染色法可以用于葡萄生单轴霉孢子囊存活力的快速和准确检测。

葡萄霜霉病生防菌甲基营养型芽胞杆菌T3的鉴定及其防治效果

为了获得对葡萄霜霉病具有拮抗效果的生防菌株,本研究通过平板稀释法从葡萄园土壤中分离细菌,采用离体叶片混合点样法筛选拮抗菌,并进行了田间防效试验。根据菌株的形态学及16S r DNA序列分析对其进行鉴定,并检测了菌株T3的代谢产物。在分离获得的31株细菌中,菌株T1-2和T3发酵液对葡萄霜霉病菌的室内抑制率与对照枯草芽胞杆菌CN181一致,均为100%;2次田间试验均表明,在7 d时,清水对照的病情指数增加值平均为44.3,菌株T3发酵液的病病情指数增加值平均为21.0,对葡萄霜霉病的相对防治效果为52.4%,与菌株CN181发酵液无显著差异。经鉴定,菌株T3为甲基营养型芽胞杆菌Bacillus methylotrophicus,且该菌株在代谢过程中可产生蛋白酶、纤维素酶和嗜铁素等抑菌物质。研究结果表明,菌株T3对葡萄霜霉病菌具有强烈的抑制作用,并对葡萄霜霉病具有较好的防治效果。

皮尔瑞俄类芽孢杆菌防治葡萄霜霉病试验

葡萄霜霉病是由单轴霉属葡萄生单轴霉侵染所致的一种专性寄生病害，该病防治十分困难，目前尚无有效的药剂特别是生物菌剂进行防治。为了寻求一种有效的新的防治葡萄霜霉病的生物菌剂，首次使用新型生物菌剂——皮尔瑞俄类芽孢杆菌对葡萄霜霉病进行防治试验，采用喷雾、灌根以及喷雾＋灌根3种处理方法。结果表明，皮尔瑞俄类芽孢杆菌对葡萄霜霉病的防治效果为83．65％-93．50％，最佳处理方法为喷雾＋灌根，处理后还可有效改善葡萄品质，单粒重、可溶性固形物含量以及维生素C含量均得到明显提升，并且叶面、果面和根系周围土壤的有益微生物菌落数明显增加。

葡萄霜霉病立体化综合防控技术

葡萄霜霉病是由葡萄生单轴霉引起的病害,在陕西关中局部区域已成为葡萄生产第一大病害。近年来,随着葡萄种植集约化程度的提高,连年超负荷挂果,以及多雨等气候因素综合影响,该病呈现发病提前并逐年加重趋势。