葡萄籽原花青素低聚体治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠的机制研究

目的探讨葡萄籽原花青素低聚体(GPC)对自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠的作用机制,为多发性硬化症的药物开发提供药效学依据。方法通过文献检索,收集具有神经保护作用的GPC成分。使用PharmMapper和STITCH数据库预测药物靶点,Uniprot数据库标准化靶基因,人类基因数据库(GeneCards)和人类孟德尔遗传数据库(OMIM)预测多发性硬化症相关基因。从药物与疾病之间的交叉靶点获得GPC治疗多发性硬化症的靶点。利用STRING 11.0数据库和Cytoscape 3.6.1软件构建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络。利用DAVID数据库对潜在靶点进行基因本体(GO)功能富集和京都基因和基因组百科全书(KEGG)通路富集分析,筛选出重要的生物学过程和通路。采用EAE小鼠模型研究GPC的治疗机制。结果共获得42个靶点与GPC治疗多发性硬化症相关。KEGG富集分析涉及32条通路。药理实验表明,GPC改善EAE小鼠的临床症状,抑制了中枢神经系统炎症细胞浸润,减少髓鞘脱失。GPC可抑制中枢神经系统氧化应激指标和炎性因子表达,降低蛋白激酶B(Akt)、细胞外信号调节激酶(ERK)、c-Jun氨基端激酶(JNK)的磷酸化表达。结论GPC对EAE小鼠的治疗作用与抑制丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路和磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/Akt信号通路有关,为GPC的临床应用提供理论依据。

低共熔溶剂温浸提取葡萄皮籽渣中原花青素的工艺优化研究

目的采用低共熔溶剂温浸提取葡萄皮籽渣中原花青素,优化主要影响因素,建立绿色高效的提取工艺。方法联合单因素考察与中心组合实验设计,以葡萄皮籽渣中原花青素提取含量为评价指标,逐步优选提取溶剂、提取方法以及低共熔溶剂含水量、料液比、提取温度、提取时间等工艺参数。结果提取工艺是以含水量16.47%的氯化胆碱-乳酸(1∶2)为提取溶剂,料液比为1∶10.63,在50℃、磁力搅拌提取40 min条件下原花青素提取含量达143.53 mg·g^(-1),是传统的乙醇回流提取工艺的2.3倍;实验结果与响应面模型预测值接近。结论相较于传统乙醇回流浸提法,低共熔溶剂温浸法提取葡萄皮籽渣中原花青素的效率明显提高。该方法具有简便、高效特点,可为低共熔溶剂提取天然活性产物提供参考。

低聚体葡萄籽原花青素对顺铂损伤HEK293细胞及抗癌活性的影响

目的:探讨低聚体葡萄籽原花青素(grape seed proanthocyanidins extract,GSPE)及其结构单元儿茶素(catechin,C)对顺铂(cis-dichlorodiamineplatinum(II),DDP)损伤HEK293人胚肾细胞的保护作用以及对DDP抗A549人肺腺癌细胞活性的影响。方法:体外培养HEK293细胞和A549细胞,以DDP建立损伤模型,分别用不同质量浓度的低聚体GSPE和儿茶素对细胞进行预处理,四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法测定细胞抑制率和存活率。结果:当低聚体GSPE质量浓度为16 mg/L时,对DDP诱导的HEK293细胞损伤的保护作用最佳,与DDP损伤组相比有显著差异(P<0.05),并且在达到此质量浓度时可显著增强DDP对A549细胞的损伤效果(P<0.05)。相同条件下儿茶素对DDP诱导的HEK293细胞损伤无显著影响(P>0.05)。结论:体外培养条件下,一定质量浓度的低聚体GSPE对DDP诱导的HEK293细胞损伤具有一定的保护作用,同时能增强DDP对A549细胞的杀伤作用。儿茶素对DDP诱导HEK293细胞损伤的保护作用不明显。

低聚葡萄籽原花青素对顺铂所致人胚肾细胞线粒体损伤的保护作用

目的:探究低聚葡萄籽原花青素(oligomeric grape seed proanthocyanidins,O-GSP)对顺铂(cis-diamminedichloroplatinum,CDDP)导致的人胚肾细胞HEK293中线粒体损伤的保护作用及其作用机制。方法:通过试剂盒检测O-GSP、CDDP及O-GSP+CDDP处理后细胞中丙二醛(malondialdehyde,MDA)、还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)、活性氧(reaction oxygen species,ROS)含量、细胞质内糖代谢酶(己糖激酶和乳酸脱氢酶)活力和线粒体糖代谢酶(苹果酸脱氢酶)活力变化情况,并采用流式细胞术对各组细胞ATP含量、线粒体膜电位变化以及细胞凋亡率进行检测。结果:O-GSP预处理极显著改善了CDDP引起的细胞内MDA含量升高,还原型GSH、ROS、ATP含量及线粒体膜电位降低和糖代谢异常(P<0.01),从而减轻了CDDP诱发的线粒体损伤,对HEK293细胞凋亡有极显著的缓解作用(P<0.01)。结论:O-GSP对CDDP所致HEK293细胞线粒体损伤具有拮抗作用,并且该作用与O-GSP的抗氧化活性有关。

葡萄籽低聚原花青素体外抗氧化活性研究

以实验室分离纯化得到的葡萄籽低聚原花青素为研究对象,水溶性维生素E和维生素C为对照,分别考察葡萄籽低聚原花青素对DPPH自由基、ABTS自由基、超氧阴离子自由基(O_2^-·)的清除能力以及铁离子还原能力(FRAP)。结果表明,葡萄籽低聚原花青素对DPPH自由基、ABTS自由基以及超氧阴离子自由基具有较高的清除能力,IC50值分别为23.52μg/mL、51.38μg/mL和684.46μg/mL,具有较高的还原能力,且均优于对照水溶性维生素E。与维生素C相比,原花青素对ABTS自由基的清除能力以及还原能力均优于维生素C,两者DPPH自由基的清除能力相当,原花青素和水溶性维生素E在极低质量浓度(0.05~1.00μg/mL)范围内,对超氧自由基具有清除能力,清除率为30%~40%,随着质量浓度的增加,维生素C的超氧阴离子自由基清除能力优于葡萄籽低聚原花青素。

葡萄籽中低聚原花青素提取条件研究

研究了葡萄籽中低聚原花青素的提取条件,考察了提取温度,时间,磷酸浓度对提取液总酚含量的影响,并对提取物的溶解性作了分析。结果表明:3%磷酸的乙酸乙酯-水溶液作提取剂,室温下搅拌提取10h的条件最适,所得产物颜色淡,水溶性好,其低聚原花青素提取率大于2.0%,总酚含量大于70%。

葡萄籽中低聚原花青素研究进展

低聚原花青素作为一种强力抗氧化剂,已经引起人们极大的关注。综述了从葡萄籽中提取、纯化、分析低聚原花青素的研究进展概况。

葡萄籽低聚原花青素提取及性质分析

考察了提取温度、时间、磷酸体积分数对提取液低聚原花青素质量浓度的影响,并对提取物的理化性质作了分析。结果表明:φ(水)=8%、φ(磷酸)=3%的乙酸乙酯溶液作提取剂,室温下搅拌提取10h的条件最适,所得产物颜色淡,水溶性好,聚合度值为3 8±0 2,其低聚原花青素质量分数大于70%,提取率达2 2%。

脱脂葡萄籽中低聚原花青素的提取

研究了葡萄籽中低聚原花青素的提取 .采用石油醚脱脂的干葡萄籽为原料 ,以乙醇为溶剂热提取后 ,通过调节pH除去蛋白质 ,再用乙酸乙酯萃取分离粗提物 ,最后用石油醚沉淀纯化产品 .

葡萄籽低聚原花青素化学成分及抗氧化研究

对葡萄籽低聚原花青素中的原花青素B2进行了分离纯化,并将葡萄籽低聚原花青素(opc's)、原花青素B2对比白藜芦醇、红酒提取物、苹果多酚、VC、VE和水溶性V(ETrolox)的抗氧化活性进行了研究。结果表明,原花青素B2和opc's对DPPH自由基和羟自由基都具有较好的清除活性。对DPPH自由基的清除作用与VE相当,其IC50分别为1.20μg/mL和1.39μg/mL,明显强于VC和Trolox;原花青素B2和opc's对羟自由基的抑制率明显高于VC、VE和Trolox。opc's经过层析分离纯化后得到的原花青素B2清除DPPH自由基的效果有所提高,但对于羟自由基的清除活性提高不明显。

超声微波双辅助提取葡萄籽低聚原花青素的研究

以新疆吐鲁番的赤霞珠葡萄籽为研究对象,利用超声微波双辅助法提取其中的低聚原花青素。以低聚原花青素提取率为考察指标,研究固液比、微波功率、微波辐照时间、作用次数、乙醇体积分数5个单因素对葡萄籽低聚原花青素提取率的影响。并采用响应面分析法对提取结果进行优化。结果表明,采用超声微波双辅助萃取技术得到的低聚原花青素提取率较单独采用超声或微波辅助得到的原花青素提取率高。在以70.3%vol的乙醇为提取溶剂、固液比为1∶14.6(g∶mL)、超声处理30min、微波功率400W、微波时间30s的条件下,得到的低聚原花青素提取率最大为7.62mg/g。

葡萄籽中低聚原花青素的研制

研究了从葡萄籽中提取低聚花青素 (OPC’s)。采用石油醚脱脂的干葡萄籽为原料 ,以乙醇为溶剂热提取后 ,通过调节pH除去杂质性蛋白 ,再用乙酸乙酯萃取分离粗提物 ,石油醚沉淀精制产品 ,最后经过聚酰胺柱层析得到纯度较高抗氧化性能优良的OPC’s产品。同时对不同层次产品的抗氧化性进行了考察 ,二聚体的抗氧化性最高。

低聚葡萄籽原花青素对异丙肾上腺素诱导心肌细胞肥大的影响

目的:在原代培养的新生大鼠心肌细胞上观察低聚葡萄籽原花青素(oligomeric grape seed proanthocyanidins,GSP)对异丙肾上腺素(isoproterenol,Iso)诱导心肌细胞肥大的影响。方法:采用SD大鼠乳鼠原代心肌细胞培养法,BCA法测定心肌细胞总蛋白含量;流式细胞仪检测心肌细胞内氧自由基(reactive oxygen species,ROS)含量;比色法检测丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果:1×10-5 mol/L Iso能明显诱导心肌细胞肥大,GSP可剂量依赖性地抑制Iso诱导心肌细胞肥大,抑制细胞内ROS的生成,降低MDA含量、提高SOD活性。结论:GSP对Iso诱导的心肌细胞肥大具有明显的逆转作用,其机制至少部分与抑制ROS生成、降低氧化应激水平有关。

微波对葡萄籽中低聚原花青素(OPC’s)提取的影响

探索了微波对从葡萄籽中提取低聚原花青素的影响 ,实验结果为 :功率为 5 0 0W ,时间为 15min ,料液比为 1∶9。在此条件下提取率达到 38% ,超过传统水煮法。

薄层色谱法分离葡萄籽中的低聚原花青素

通过对不同溶剂展开体系的选取 ,确定低聚原花青素分离的薄层色谱展开体系为v(甲苯 )∶v(丙酮 )∶v(乙酸 ) =3∶3∶1.从原花青素中分离制备得到儿茶素的单体、二聚体、三聚体 ,运用高效液相色谱对其进行了分析验证 .

十一种植物中原花青素单体和低聚体的比较分析

对十一种植物花瓣、籽、果实或果皮中的原花青素主要单体和低聚体进行检测,分析比较不同植物中原花青素组成和含量的差异.十一种植物样品分别经85%乙醇超声提取、Oasis PRiME HLB固相萃取净化后,采用高效液相色谱法(HPLC)分离分析其中的儿茶素、表儿茶素、没食子酸、原花青素B_(2)、原花青素B_(4)、原花青素A_(2).结果表明,在所选色谱条件下,十一种植物中都能检出原花青素单体或低聚体,且含量以原花青素低聚体为主.其中葡萄籽中原花青素含量最高、种类最多,六种原花青素单体和低聚体均有检出;其次是玫瑰花瓣、花生红衣,分别检出儿茶素和没食子酸两种原花青素单体和原花青素B_(2)、原花青素B_(4)、原花青素A_(2)三种低聚体;蓝莓、核桃仁、黑枸杞和紫甘蓝除检出一种原花青素单体外,蓝莓和核桃仁中三种原花青素低聚体均有检出,而黑枸杞和紫甘蓝只检出了原花青素B_(2)和原花青素B_(4)两种低聚体;红皮土豆皮和紫薯皮中仅检测到了原花青素低聚体;火龙果皮和红辣椒中原花青素单体和低聚体种类少,含量低.此外,葡萄籽和皮、花生红衣和花生仁为同一植物的不同部位,其原花青素种类和含量差别很大.不同植物中原花青素的种类和含量不同;同种植物不同部位的原花青素种类和含量也不同.原花青素在不同植物中分布情况、组成差别和含量上的差异,为植物原花青素的构效关系研究及其开发利用奠定了基础.

低聚葡萄籽原花青素联合顺铂对人肺腺癌细胞A549凋亡的影响

目的:研究低聚葡萄籽原花青素(oligomeric?grape?seed?proanthocyanidins,O-GSP)联合顺铂对人肺腺癌细胞A549抗氧化、细胞凋亡及凋亡相关蛋白表达的影响。方法:细胞分为对照组、顺铂(5 mg/L)组、O-GSP(4 mg/L)组、O-GSP(4 mg/L)+顺铂(5 mg/L)组。硫代巴比妥酸法测定细胞中丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量;二硫代二硝基苯甲酸法测定谷胱甘肽(glutathione,GSH)含量;黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(superoxide?dismutase,SOD)活力;流式细胞术检测细胞内活性氧(reactive?oxygen?species,ROS)含量和细胞凋亡率;Western?blot检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和caspase-3的表达。结果:顺铂导致A549细胞MDA、ROS含量显著升高(P<0.05),GSH含量和SOD活力显著降低(P<0.05),O-GSP对细胞内MDA含量、GSH含量、SOD活力无显著影响(P>0.05)。O-GSP+顺铂组相对于顺铂组,细胞内MDA、GSH、SOD水平无显著性变化(P>0.05),而ROS含量明显降低(P<0.05)。顺铂、O-GSP以及两者联用均能显著促进细胞凋亡(P<0.05),并且能够显著提高Bax及Bax/Bcl-2值,顺铂和O-GSP+顺铂可显著降低Bcl-2的表达(P<0.05),同时激活caspase-3。结论:O-GSP联合顺铂可促进A549细胞的凋亡,其机制与O-GSP的抗氧化作用没有显著联系,而是与两者可共同调节凋亡相关蛋白基因表达有关。

低聚葡萄籽原花青素联合顺铂对A549细胞增殖及细胞周期的影响

目的:探讨低聚葡萄籽原花青素(oligomer grape seed proanthocyanidins,O-GSP)联合顺铂(cisdichlorodiamineplatinum(Ⅱ),DDP)对A549细胞增殖、细胞周期及细胞周期相关蛋白表达的影响。方法:体外培养A549细胞,四甲基偶氮唑蓝法检测DDP和O-GSP单独及联合用药对A549细胞存活率的影响;流式细胞仪检测O-GSP联合DDP对A549细胞周期的影响;Western Blot检测促细胞周期相关蛋白CDK 4、Cyclin D1和p-Rb的表达。结果:DDP(≥5 mg/L)和O-GSP(≥16 mg/L)单独用药均对A549细胞增殖有抑制作用,且两者同时作用对细胞增殖抑制具有联合作用。5 mg/L DDP单独用药可以于S期阻滞A549细胞,4 mg/L O-GSP单独用药可以于G_0/G_1期阻滞A549细胞,两者联合可显著降低细胞周期调控蛋白CDK 4、Cyclin D1和p-Rb的表达(P<0.05)。结论:O-GSP可以联合DDP抑制A549细胞增殖,且这种联合作用与Cyclin D1-CDK 4-Rb通路介导的细胞周期调控有关。

葡萄籽中低聚原花青素提取工艺初探

通过对各影响因素的实验,在中心组合实验基础上,运用响应面分析法确定出提取低聚原花青素的最优工艺条件:料液比1:7,提取温度48.6℃,提取时间30min,乙醇浓度61.4%,提取3次。在此条件下提取率达90%以上。