葡萄籽原花青素调控Nrf2/HO-1通路减弱多柔比星诱导的心脏毒性

目的:观察葡萄籽原花青素对多柔比星(DOX)诱导的心脏毒性以及核因子E2相关基因(Nrf2)/血红素加氧酶-1(HO-1)通路的作用。方法:通过DOX构建小鼠急性心脏毒性模型,本实验分为对照组(正常小鼠)、葡萄籽原花青素组、DOX组、DOX+葡萄籽原花青素组、DOX+葡萄籽原花青素+ML385组。超声心动图检查小鼠心功能;苏木精-伊红(HE)染色观察小鼠心肌病理改变;原位末端标记测定法(TUNEL)检测小鼠心肌细胞凋亡情况;酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平;试剂盒检测心肌组织中活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平;蛋白质免疫印迹法(Western Blot)测定Nrf2/HO-1通路蛋白表达水平。结果:与对照组比较,DOX组小鼠心肌损伤加重,左心室舒张末期内径(LVEDD)、左心室收缩末期内径(LVESD),血清CK-MB、IL-6、IL-1β水平及心肌组织ROS、MDA及心肌细胞凋亡率升高(P<0.05),射血分数(EF)、短轴缩短分数(FS)、心肌组织SOD、Nrf2、HO-1蛋白水平降低(P<0.05);葡萄籽原花青素组小鼠心肌损伤,LVESD、LVEDD、EF、FS水平,血清CK-MB、IL-6、IL-1β水平,心肌组织ROS、MDA、SOD、Nrf2、HO-1蛋白,心肌细胞凋亡率差异均无统计学意义(P>0.05)。与DOX组比较,DOX+葡萄籽原花青组小鼠心肌损伤减轻,LVESD、LVEDD降低,血清CK-MB、IL-6、IL-1β水平降低,心肌组织ROS、MDA、心肌细胞凋亡率降低(P<0.05),EF、FS及心肌组织SOD、Nrf2、HO-1蛋白水平升高(P<0.05);与DOX+葡萄籽原花青素组比较,DOX+葡萄籽原花青素+ML385组小鼠心肌损伤加重,LVESD、LVEDD及血清CK-MB、IL-6、IL-1β水平、心肌组织ROS、MDA、心肌细胞凋亡率升高(P<0.05),EF、FS、心肌组织SOD、Nrf2、HO-1蛋白水平降低(P<0.05)。结论:葡萄籽原花青素可能通过激活Nrf2/HO-1通路,对DOX诱导的心脏毒性小鼠发挥保护作用。

Box-Behnken响应面法优化葡萄籽原花青素柔质体的制备工艺

目的优化葡萄籽原花青素柔质体(grape seed proanthocyanidins flexiblenano-liposomes,GSP-LPs)的制备工艺,评价其体外释放及透皮释放能力。方法采用薄膜分散超声法制备GSP-LPs,以包封率、粒径、电位、PDI值为指标,在查阅文献和单因素实验的基础上,用响应曲面法优化葡萄籽原花青素的制备工艺,并对脂质体的表征、体外释放规律进行考察。结果优化后的GSP-LPs的包封率约为70.79%±0.02%,载药量为1.16%±0.01%,PDI为0.26±0.01,粒径为(156.47±7.03)nm,电位为(-42.35±4.00)mV,透射电镜下其呈圆球形,体外透皮释放和透析袋释放均符合Weibull释放规律。结论优化的制备工艺稳定、可行,制得的GSP-LPs粒径均匀,具有一定的缓释效果,有望进一步制备缓释制剂。

葡萄籽原花青素柔质体凝胶剂的制备工艺研究

目的探究葡萄籽原花青素柔质体(GSP-FL)的体外释放规律及葡萄籽原花青素柔质体凝胶(GSP-FLG)的制备工艺。方法采用正交试验法,以卡波姆-940、甘油、三乙醇胺的用量为影响因素,以pH值、光泽度、失水率、均匀度、稳定性、涂展性等为评价指标,筛选出GSP-FLG的最佳制备工艺,并对GSP-FL及GSP-FLG的透皮性能及体外释放能力进行考察。结果GSP-FL的透皮释放及透析袋释放曲线均符合Weibull释放动力学方程。最终优化得到的GSP-FLG制备工艺为每50 g凝胶中含有0.5%卡波姆940,10%甘油及1%三乙醇胺,GSP-FLG的透皮释放符合Weibull释放动力学方程,透析袋释放曲线符合Ritger-peppas释放动力学方程,具有一定的缓释效果;且GSP-FLG的药物皮肤滞留量显著高于葡萄籽原花青素凝胶(P<0.05)。结论以柔质体为载体,将葡萄籽原花青素进一步制备成凝胶剂,有利于皮肤局部给药并具有缓释效果,易于发挥柔质体和凝胶剂的优势,具有广阔的应用前景。

葡萄籽原花青素及其柔性纳米脂质体的抗氧化及对酪氨酸酶活性的抑制作用

目的探讨葡萄籽原花青素(GSP)及其柔性纳米脂质体(GSP-FL)的抗氧化活性,以及对酪氨酸酶活性的影响。方法体外测定GSP及GSP-FL对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)、2,2’-联氮-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸(ABTS)、2-苯基-4,4,5,5-四甲基咪唑啉-1-氧基-3-氧化物(PTIO)自由基的清除率,以及对三价铁离子(Fe3+)的还原能力。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测GSP对过氧化氢(HO)诱导的细胞氧化损伤的保护作用。体外测定GSP及GSP-FL对酪氨酸单酚酶、酪氨酸二酚酶活性的影响。以3,4-二羟基苯丙氨酸(L-DOPA)为底物,测定GSP及GSP-FL对Melan-a细胞胞内酪氨酸酶活性的影响;采用氢氧化钠裂解法测定GSP-FL对Melan-a细胞胞内黑色素含量的影响。结果GSP及GSP-FL均具有良好的抗氧化活性。与GSP比较,GSP-FL可显著降低对Melan-a细胞的毒性(P<0.05);与模型组(250μmol/L HO)比较,GSP质量浓度为12.5~50.0 mg/mL时可显著提高氧化损伤细胞的存活率(P<0.05)。GSP及GSP-FL均可抑制细胞内酪氨酸酶的活性,并减少细胞黑色素的生成。结论GSP-FL具有抗氧化活性,能降低药物的细胞毒性,且可通过抑制酪氨酸酶的活性来抑制黑色素的生成,有望进一步开发成具有美白功效的化妆品制剂。