胃动素受体激动剂红霉素对大鼠下丘脑葡萄糖反应神经元的作用

目的:通过观察胃动素受体激动剂红霉素对大鼠下丘脑中葡萄糖反应神经元电活动的影响,探讨中枢胃动素对摄食活动调控的机制。方法:应用细胞外记录神经元单位放电的方法,记录麻醉大鼠LHA及VMH的神经元电活动。左颈总动脉注射0.56mol/L葡萄糖溶液0.2ml鉴别GSNs及GRNs;侧脑室注射红霉素4μg,观察其对葡萄糖反应神经元及非葡萄糖反应神经元自发放电频率的影响;侧脑室注射GM-109(胃动素受体拮抗剂)与红霉素的混合剂(1∶50的比例配制),观察上述效应是否可重复出现。结果:在LHA,红霉素对GSNs有明显的兴奋作用,与其对该核团NGSNs的作用相比较,差别有统计学意义(P<0.05);在VMH,红霉素对GRNs有明显的抑制作用,与其对该核团NGRNs的作用相比较,差别有统计学意义(P<0.01)。对红霉素有反应的神经元在给予GM-109和红霉素的混合剂后,神经元的放电频率无明显变化。结论:胃动素受体激动剂红霉素可兴奋LHA-GSNs同时抑制VMH-GRNs,这一途径可能是中枢胃动素促进摄食活动的神经调节机制之一。

GABA受体激动剂对氧-葡萄糖剥夺诱导皮层神经元死亡的保护作用

目的:研究GABA受体激动剂对氧-葡萄糖剥夺诱导皮层神经元死亡的保护作用。方法:培养12d的皮层神经元更换为Earle's平衡盐溶液(Earle's balanced salts,EBSS)后置于37℃三气缺氧(N2:CO2:O2=94%:5%:1%)培养箱内培养,4h后恢复正常条件培养,同时在培养液内加入GABA A受体和B受体激动剂作用24h,用Hoechst33342/PI的染色方法检测其死亡情况。结果:GABA A受体激动剂(musci mol)和GABA B受体激动剂(baclofen)均分别能显著降低神经细胞死亡率49.9%和35.3%。结论:GA-BA A受体激动剂和B受体激动剂对氧-葡萄糖剥夺诱导的皮层神经元死亡均有显著的保护作用。

氧葡萄糖剥夺-再恢复后抑制小胶质细胞TLR9激活对神经元的保护作用

目的:观察氧葡萄糖剥夺-再恢复(OGDR)后小胶质细胞BV-2 Toll样受体9(TLR9)激活对神经元凋亡的影响。方法:对BV-2细胞或TLR9-siRNA转染的BV-2细胞进行OGDR处理4 h后,将细胞上清添加至OGDR处理4 h的小鼠原代皮层神经元中,继续正常培养24 h后,倒置显微镜下观察神经元形态变化,TUNEL染色检测神经元凋亡,Western blotting检测神经元caspase-3蛋白的表达。实验分为正常BV-2组、negative control-siRNA组、TLR9-siRNA组、OGDR组、OGDR+NC-siRNA组、OGDR+TLR9-siRNA组和对照组(神经元OGDR后不添加BV-2细胞上清)。结果:OGDR后神经元胞体肿胀,折光性下降,出现空泡样变,轴突变细、扭曲、断裂。TUNEL染色各组均可见绿染凋亡小体。与对照组比较,其它组的caspase-3蛋白表达升高(P<0.05);与正常BV-2组比较,OGDR组和TLR9-siRNA组的caspase-3蛋白表达升高(P<0.05);OGDR+TLR9-siRNA转染组与TLR9-siRNA转染组和OGDR组比较,caspase-3蛋白表达下降(P<0.05)。结论:OGDR后BV-2细胞TLR9激活致神经元凋亡增多,caspase-3蛋白表达升高;抑制TLR9表达后,神经元损伤减轻。

半胱氨酰白三烯受体1拮抗剂孟鲁司特对缺血性损伤后神经元形态的作用

目的:观察半胱氨酰白三烯受体1拮抗剂孟鲁司特对原代神经元缺血性损伤后形态变化的作用。方法:在不同浓度孟鲁司特存在条件下,以缺氧缺糖(OGD)2 h和再灌(R)24 h(OGD/R)诱导大鼠原代神经元及皮层混合培养细胞的神经元损伤;以免疫染色法检测神经元数量、胞体大小、胞体总神经突起数量、一级神经突起数量、长度及其分支数量等指标,观察神经元形态的变化。结果:OGD/R可明显减少神经元的数量,显著改变神经元的形态。而孟鲁司特(0.0001～1μmol/L)能减轻单独神经元培养中OGD/R诱导的神经元数量减少,抑制一级神经突起分支数量增加;在混合培养中,孟鲁司特(0.0001～0.1μmol/L)增加OGD/R后一级神经突的长度,减少神经突起数量以及一级神经突起分支数量。结论:半胱氨酰白三烯受体1拮抗剂孟鲁司特对大鼠原代神经元缺血性损伤有保护作用。

芍药甙对离体大鼠下丘脑腹内侧核神经元电活动的影响

目的:研究芍药甙(PF)对正常大鼠下丘脑腹内侧核(VMH)神经元兴奋性的影响。方法:应用脑片全细胞膜片钳技术记录了35个正常的VMH神经元的自发放电,观察PF对它们的作用。结果:①当脑片用含PF(300μmol/L)的人工脑脊液灌流后,有22个神经元放电频率明显减少,平均放电频率从(7.1±2.2)Hz减少到(3.2±0.7)Hz(P<0.01);在去极化方波刺激下放电数目也明显减少,洗脱后恢复;②PF对VMH的葡萄糖受体神经元(GRN)表现为明显的抑制作用,与其对非葡萄糖受体神经元的作用相比,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:PF能够降低VMH GRN的放电频率,调节下丘脑饱中枢神经元的兴奋性,从而影响动物的摄食行为。

孤儿核受体NR4A1表达对氧-葡萄糖剥夺诱导培养大鼠小脑颗粒神经元凋亡的影响

目的探讨孤儿核受体NR4A1表达对氧一葡萄糖剥夺（oxygen．glucose deprivation，OGD）诱导培养大鼠小脑颗粒神经元凋亡的影响及其可能机制。方法大鼠小脑颗粒细胞原代培养7～8d后给予OGD处理。应用四甲基偶氮唑蓝法检测细胞活性，流式细胞术检测细胞凋亡率，蛋白质印迹法检测NR4A1、胱天蛋白酶-3和细胞色素c蛋白表达，实时定量聚合酶链反应检测NR4A1 mRNA表达。用编码NR4A1的慢病毒载体转染大鼠小脑颗粒神经元，并检测转染大鼠小脑颗粒神经元OGD后凋亡率以及细胞色素c和胱天蛋白酶-3表达。结果随着OGD时间的延长，培养大鼠小脑颗粒神经元活性显著性降低，凋亡率显著性增高，NR4A1mRNA和蛋白以及胱天蛋白酶-3和细胞色素c蛋白表达均显著性上调。转染NR4A1的大鼠小脑颗粒神经元过表达NR4A1，OGD后凋亡率显著性降低，胱天蛋白酶-3和细胞色素C蛋白表达显著性下调。结论NR4A1过表达能通过下调胱天蛋白酶-3和细胞色素c表达减少OGD诱导的大鼠小脑颗粒神经元凋亡。

下丘脑室旁核外源性orexin-A对肥胖大鼠摄食的影响及NPY受体信号的调控

目的:探讨饮食诱导肥胖(DIO)大鼠神经肽Y(NPY)受体信号通路是否参与下丘脑室旁核(PVN)外源性注射食欲素A(orexin-A)对摄食和葡萄糖敏感(GS)神经元兴奋性的调控。方法:采用荧光免疫组织化学实验观察PVN中orexin-A受体(即食欲素1型受体,OX1R)和NPY受体Y5(NPY-5R)的表达;采用单细胞外放电记录观察orexin-A对PVN内GS神经元兴奋性的影响;分别于SD大鼠和DIO大鼠PVN埋置套管,经套管注射orexinA、OX1R拮抗剂SB-334867和NPY-5R拮抗剂CGP-71683,观察大鼠0~2 h和0~4 h摄食量。结果:DIO大鼠PVN中OX1R和NPY-5R的表达显著高于SD大鼠。Orexin-A抑制PVN内葡萄糖抑制性(GI)神经元,兴奋葡萄糖兴奋性(GE)神经元,但是orexin-A对GS神经元的兴奋或抑制效应可被NPY-5R拮抗剂CGP-71683部分阻断,且与SD大鼠相比,orexin-A对DIO大鼠PVN内GS神经元兴奋或抑制效应更加明显。PVN内注射orexin-A可增加SD大鼠和DIO大鼠摄食量。但是orexin-A诱导的促摄食效应被NPY-5R拮抗剂CGP-71683部分阻断。与SD大鼠相比,orexin-A诱导的促摄食效应在DIO大鼠中更加明显。结论:PVN内外源性注射orexin-A可能主要通过OX1R信号通路参与大鼠摄食和GS神经元兴奋性调控,NPY-5R信号也参与了该过程调控,在DIO大鼠中更敏感。

δ阿片受体激动剂DADLE对大鼠皮质神经元缺氧损伤的影响

目的探讨δ阿片受体激动剂DADLE对于体外培养的大鼠皮质神经元抗物理缺氧损伤是否具有保护作用。方法将体外培养8d的大鼠皮质神经元进行MAV2免疫荧光鉴定后，随机分为4组：缺氧组（n=6），缺氧＋DADLE预处理组（H=6），对照组（n=6），对照＋DADLE预处理组（n=6）。缺氧细胞置入含体积分数1％02，5％CO2及94％N2的缺氧箱内37℃培养72h。DADLE预处理组在将细胞置入孵箱之前加入DADLE（终浓度为10μmol／L）；对照组则将细胞置入含95％空气和5％CO2的恒温培养箱中培养。用hochest33258核染色法评价细胞凋亡情况，检测细胞乳酸脱氢酶LDH漏出量；检测各组细胞上清液葡萄糖水平，以评价其葡萄糖／能量代谢状况。应用单因素方差分析LDH漏出量及葡萄糖水平，X2检验分析神经元生存率。结果皮质神经元培养8d后，经MAP2免疫荧光鉴定为95％细胞为神经元。DADLE预处理缺氧细胞组细胞存活率为（71．88±1．77）％，高于未处理缺氧细胞组的（43．58±3．07）％，P〈0．05，DADLE预处理＋缺氧组的LDH活力单位为（3824．27±294．86），低于未处理缺氧组的（4516．59±605．02），P〈0．05。DADLE预处理＋缺氧组细胞上清液葡萄糖水平为（11．92±2．05）mmol／L，高于未处理缺氧组的（9.88±0．71）mmoL／L，P〈0．05。结论δ阿片受体激动剂DADLE对体外培养的大鼠皮质神经元抗缺氧损伤具有保护作用，可能作用机制为其降低缺氧皮质神经元的葡萄糖／能量代谢需求，减轻缺氧损伤时细胞的葡萄糖／能量代谢障碍。

下丘脑对血糖的调节

下丘脑腹内侧核(VMH)中存在的血糖感受神经元参与全身血糖稳定状态的调节。其中分为两种不同功能的血糖感受神经元:葡萄糖兴奋神经元——当细胞外周环境中葡萄糖浓度升高时能降低其代谢率;葡萄糖抑制神经元——当外周葡萄糖浓度升高时能提高其代谢率。除VMH外,脑中还有更高级的血糖调节中枢,能和VMH部位通过促肾上腺皮质激素释放因子(CRF)、尿皮质醇及促肾上腺皮质激素释放因子受体(CRFRs)相互作用。1型糖尿病患者对低血糖的负调节反应(CRRs)存在缺陷,导致在胰岛素治疗的过程中发生低血糖事件。研究VMH部位对血糖调节的机制能为其治疗提供新的线索。