茯苓多糖合成途径磷酸葡萄糖变位酶和UDP-葡萄糖焦磷酸化酶基因鉴定

采用已报道的灵芝磷酸葡萄糖变位酶(PGM)和UDP-葡萄糖焦磷酸化酶(UGPP)基因序列对茯苓基因组进行搜索比对,获得茯苓WcPGM和WcUGPP候选基因序列;以茯苓的cDNA为模板,成功克隆获得WcPGM和WcUGPP基因;随后利用pPIC9K构建2个基因的表达载体,并转化至毕赤酵母进行异源表达。序列分析表明WcPGM和WcUGPP基因全长分别为2021 bp和2144 bp,其中WcPGM基因含有5个外显子和4个内含子,编码564个氨基酸;WcUGPP基因含有11个外显子和10个内含子,编码502个氨基酸。氨基酸序列比对表明,WcPGM和WcUGPP与来源于绣球菌的ScPGM和ScUGPP的同源性分别为87%和91%。酶活测定表明,重组酶WcPGM可转化葡萄糖-1-磷酸(G1P)为葡萄糖-6-磷酸(G6P),酶活达1540 U·mL^(-1);重组酶WcUGPP可催化G1P和尿苷三磷酸(UTP)合成UDP-葡萄糖(UDP-Glc),酶活达660 U·mL^(-1),表明从茯苓中筛选到的2个酶WcPGM和WcUGPP具有PGM和UGPP活性。分子模拟表明,WcPGM在催化可逆反应过程中S114为磷酸供体和受体,R24和K379作为催化酸和碱实现底物的磷酸化和去磷酸化,而E366和S368可实现底物的2种朝向,保障了中间产物葡萄糖-1,6-二磷酸的翻转,确保了WcPGM的可逆反应;而WcUGPP活性中心的核苷酸结合Loop和糖结合Loop保障了底物的正确朝向,K390作为催化碱实现了底物UTP/G1P与UDP-Glc的可逆反应。该研究为茯苓多糖合成途径的解析和代谢工程提升茯苓多糖产量奠定了基础。

人血中磷酸葡萄糖变位酶的提取及其抗血清研制

作者用大柱制备电泳法从人红细胞解离波中分离提取磷酸葡萄糖变位酶（ＰＧＭ），并以此为抗原，免疫新西兰家兔，制备得到了兔抗ＰＧＭ血清．经ＳＤＳ—ＰＡＧＥ检测，纯ＰＧＭ为单体，分子量为５０，７１３道尔顿；经琼脂双扩散法检测，兔抗ＰＧＭ血清效价为１：１６，可检出ＰＧＭ的最低浓度为１５．６μｇ／ｍｌ，兔疫电泳表明，该抗血清与ＰＧＭ２—１型及ＰＧＭ２—２型人红细胞解离液产生单一的沉淀线，特异性较好。用戊二醛法将该抗血清标记ＨＲＰ，ＥＬＩＳＡ测得酶一抗体结合物最适工作浓度为１：１２８稀释度。

内蒙古鄂伦春人红细胞酯酶D和磷酸葡萄糖变位酶Ⅰ表型分布及基因频率的研究

人类红细胞酪酶D(EsD)和磷酸葡萄糖变位酶Ⅰ(PGM_1)的表型及基因定位已有报道。作为重要的基因标志用于法医学亲子鉴定和个体识别;在群体遗传学中分析种族,民族差异;人类学中探讨民族融合、族源、迁移;在临床器官移植方面也有应用价值。不同种族和民族间EsD和PGM_1表型分布和基因频率不同,为了解内蒙古鄂伦春人EsD和PGM_1的分布和基因频率情况,我们进行了调查研究。

β2-微球蛋白、糖化血红蛋白、脂蛋白相关磷脂酶A2和磷酸葡萄糖变位酶联合检测在冠心病诊断中的价值

目的:探讨β2-微球蛋白(β2M)、糖化血红蛋白(HbA1c)、脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)、磷酸葡萄糖变位酶(PGM)联合检测诊断冠心病(CHD)的价值。方法:选择135例CHD患者为CHD组,另选择本院同期健康体检者70例作为对照组,收集血液样本,放射免疫法检测β2M,免疫比浊法检测HbA1c,酶联免疫吸附法检测Lp-PLA2、PGM,采用Logistics回归分析CHD发生的相关因素,采用ROC分析诊断试验的灵敏度和特异度。结果:CHD组血清β2M、HbA1c、Lp-PLA2、PGM水平均显著高于对照组(P<0.05);Logistics回归分析显示,高水平β2M、HbA1c、Lp-PLA2、PGM是发生CHD的危险因素;β2M(临界值2.65μg·mL^-1)、HbA1c(临界值5.00%)、Lp-PLA2(临界值197.20 ng·mL^-1)、PGM(临界值34.52 U·L^-1)联合检测诊断CHD的AUC为0.949,准确度为95.12%,灵敏度为95.56%,特异度为94.29%,均明显高于单项检测。结论:CHD患者β2M、HbA1c、Lp-PLA2、PGM水平显著升高,联合检测诊断CHD的准确度和灵敏度更高。

小桐子磷酸葡萄糖变位酶cPGM与pPGM基因的克隆及原核表达分析

为了探究磷酸葡萄糖变位酶(PGM)在植物蔗糖与淀粉代谢中的重要作用,基于同源序列比对的方法,在小桐子基因组中鉴定到1个细胞质型PGM基因(命名为JccPGM)与1个叶绿体型PGM基因(命名为JcpPGM),利用qRT-PCR方法检测JccPGM与JcpPGM基因在小桐子不同器官与低温条件下的表达特性,同时,构建了pGEX-4T-1-JccPGM与pGEX-4T-1-JcpPGM原核表达载体并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行了表达分析。结果表明:两者分别编码582,637 aa的蛋白质。聚类分析表明,小桐子pPGM在其N端包含叶绿体定位信号肽,而cPGM较pPGM多4段肽链序列-^(108)VGVDGS^(113)-、-^(183)SGPE^(186)-、-^(283)GKSNSE^(288)-、-^(470)SLGEVN^(475)-。qRT-PCR表达分析显示,小桐子cPGM与pPGM基因都在叶片中高表达,而在根与种子中表达量较低。通过BL21(DE3)诱导表达,分别得到90.7,97.0 ku的蛋白条带,与理论融合蛋白的分子量一致。综上所述,本研究为开展小桐子cPGM与pPGM基因表达蛋白的功能分析以及其在蔗糖与淀粉积累、逆境应答中的机制研究奠定了基础。

微生物磷酸葡萄糖变位酶的研究进展

从磷酸葡萄糖变位酶对碳代谢和细菌细胞形态的影响、细菌致病性、在细菌高效产氢中的作用、细菌脂多糖生物合成中的作用和维持酵母细胞内Ca2+平衡的作用等方面,介绍了微生物磷酸葡萄糖变位酶的研究进展。

人磷酸葡萄糖变位酶5对肝癌细胞生长和迁移的影响

目的:构建带有Flag标签的人磷酸葡萄糖变位酶5(PGM5)基因的真核表达载体,研究PGM5对肝癌细胞生长、迁移的影响。方法:以人乳腺文库为模板,采用PCR技术扩增PGM5基因编码序列,酶切后插入pcDNA3.0-Flag载体;将空载体与重组质粒分别转染293T细胞,Western印迹检测PGM5的表达;CCK8生长曲线实验研究PGM5对肝癌细胞生长的影响,细胞划痕实验检测PGM5对肝癌细胞迁移的影响。结果:双酶切及测序结果显示pcDNA3.0-Flag-PGM5真核表达载体构建成功;Western印迹表明PGM5在293T细胞中获得表达;生长曲线和划痕实验显示PGM5可以显著抑制肝癌细胞的生长和迁移。结论:构建了pcDNA3.0-Flag-PGM5表达载体,并发现PGM5可以抑制肝癌细胞生长和迁移,为进一步研究PGM5在癌症发生发展中的作用奠定了基础。

布鲁氏菌磷酸葡萄糖变位酶对胚胎滋养层细胞的致炎作用

【目的】本文研究布鲁氏菌磷酸葡萄糖变位酶(pgm)基因缺失株和PGM蛋白对胚胎滋养层细胞(HPT-8)的损伤作用及其引起炎症反应时细胞因子的变化,探讨布鲁氏菌pgm基因的生物学功能。【方法】本文分别用布鲁氏菌pgm基因缺失株和纯化的PGM蛋白感染胚胎滋养层细胞,通过细胞形态学的观察和酶联免疫反应检测其对细胞的损伤作用以及细胞因子的变化。【结果】本实验获得了纯化的PGM蛋白,成功构建了pgm基因缺失株,采用该基因缺失株免疫小鼠后,采集血液分离血清,虎红平板实验和试管凝集实验结果显示为阴性;pgm缺失株和PGM蛋白感染HPT-8细胞均能诱发贴壁细胞脱落;而且pgm基因缺失株侵袭HPT-8细胞的能力较M5-90明显降低。pgm基因缺失株侵袭HPT-8细胞诱导产生的细胞因子IL-6、TNF-α和LDH均高于M5-90对照组,差异极显著(P<0.01),而细胞因子IL-10的分泌变化不明显,PGM蛋白感染HPT-8细胞时,其细胞因子LDH表达水平高于PBS对照组,差异极显著(P<0.01),而IL-6、IL-10和TNF-α的表达水平明显低于PBS对照组,差异显著(P<0.05)。【结论】本研究表明,PGM蛋白和pgm缺失株可致胚胎滋养层细胞损伤,且引发滋养层细胞细胞因子的表达变化,为进一步研究布鲁氏菌感染宿主细胞的分子机制奠定了基础。

五种海洋生物葡萄糖磷酸变位酶和磷酸葡萄糖异构酶的同工酶分析

采用水平淀粉凝胶电泳方法对虾夷马粪海胆(Strongylocentrotus intermedius)、刺参(Apostichopus japonicusSelenka)、半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)、文蛤(Meretrix meretrix)和虾夷扇贝(Pecten yessoensis)不同组织中的葡萄糖磷酸变位酶(PGM)和磷酸葡萄糖异构酶(GPI)进行了检测分析。结果发现,虾夷马粪海胆肌肉组织和成熟性腺组织中的PGM有较强的表达活性和表达位点差异,两种组织中GPI活性稍差。刺参的肠道组织和肌肉组织只有PGM和GPI表达活性的差异,而无位点差异。半滑舌鳎肌肉组织检测到两个PGM位点,三个GPI位点。文蛤闭壳肌组织PGM表现出非常高的多态性,而GPI表现为单态。虾夷扇贝闭壳肌组织的PGM和GPI各只检测到一个位点,遗传变异程度比较低。以PGM和GPI为指标,对我国北方5种重要海水养殖品种的同工酶遗传变异水平和其它相关遗传参数进行了分析,对群体遗传结构可能的变化规律以及与某些性状的相关性进行了探讨,这些参数对它们的遗传选育有一定的指导作用。

微藻葡萄糖磷酸变位酶研究进展

葡萄糖-1-磷酸是光自养生物淀粉合成的前体物质。葡萄糖磷酸变位酶(phosphoglucomutase,PGM)属于磷酸己糖变位酶家族,具有较高的保守性,能介导葡萄糖-6-磷酸与葡萄糖-1-磷酸相互转化,调节植物和藻类细胞淀粉合成。与高等植物相比,微藻具有独特的光合系统,一些微藻藻株可以利用有机碳源进行异养培养或混养培养,这可能赋予微藻葡萄糖磷酸变位酶特殊的结构和淀粉代谢功能,调节微藻光合固碳、糖类代谢等通路的水平。本文综述了微藻PGM分子特性、生物学功能和调控PGM活性潜在机制及策略,阐明PGM调节微藻淀粉合成对胞内蛋白质、油脂等代谢通路的潜在影响机制,为微藻固碳和高值化开发微藻资源提供理论依据,助力我国“双碳”目标奠定理论基础。

柚品种的等位酶变异

研究柚的48个品种的等位酶变异。利用等位酶分析技术对柚的脂酶(EST)、6—磷酸葡萄糖异构酶(PDI)、6—磷酸葡萄糖变位酶(PGM)、莽草酸脱氢酶(SKD)、超氧化物歧化酶(SOD)

酶法测定1-磷酸葡萄糖的含量

建立反应液中1-磷酸葡萄糖(G-1-P)的测定方法.分别在样品中加入PGluM(EC5.4.2.2)、G6P-DH(ECl.1.1.49)和氧化型辅酶Ⅱ(β-NADP),通过测定还原型辅酶Ⅱ(β-NADPH)吸光值的变化(△A)来确定样品中G-1-P的含量.G-1-P在0～400 mg/L范围内与△A呈线性关系,r2=0.999 8,其平均回收率为100.88%(RSD=0.52%).该法快速、灵敏、准确.

胶质芽孢杆菌葡萄糖磷酸变位酶基因的克隆、表达与酶学性质研究

胶质芽孢杆菌所产胞外多糖作为絮凝剂在食品工业废水处理方面比传统的工业絮凝剂具有更好应用效果而引起了广泛的关注。葡萄糖磷酸变位酶（PGM,EC5.4.2.2）能将葡萄糖-6-磷酸转变成葡萄糖-1-磷酸而被认为是多糖合成路径上的关键酶之一。本研究克隆获得来源于自胶质芽孢杆菌GIM1.16编码PGM的基因pgm。序列分析表明,该基因包含一个1710bp的读码框。在大肠杆菌中表达了pgm基因并纯化了重组蛋白,SDS-PAGE电泳结果显示重组的PGM分子量约为63kDa。重组的PGM最适反应温度为40℃,但当反应温度超过55℃时,PGM基本丧失活性,PGM在酸性（pH4-6）及碱性溶液（pH8.5-10）中均表现出低活性,其最适合反应pH值为7.5。PGM对底物葡萄糖-1-磷酸的Kcat和Km值分别为684min-1和0.24mM-1。本研究为胶质芽孢杆菌菌株的基因工程改造和代谢工程研究奠定了坚实基础。

中药天麻成分对灰树花胞外多糖合成及相关关键酶的影响

采用液体深层发酵方式研究中药天麻对灰树花胞外多糖合成的影响,并用苯酚-硫酸法测定总糖含量。结果表明:天麻添加量为7g/L时能显著促进灰树花胞外多糖产量的增加。此时灰树花产胞外多糖产量平均为3.91g/L,与对照组的3.72g/L相比提高了5.1%。同时,对灰树花多糖合成代谢途径中的两个重要酶的酶活力进行测定。说明添加天麻成分发酵后,磷酸葡萄糖异构酶酶活力有所降低,磷酸葡萄糖变位酶酶活力则无明显变化。

植物葡萄糖磷酸变位酶的研究进展

葡萄糖磷酸变位酶(PGM)是生物新陈代谢的关键酶,可催化葡萄糖-1-磷酸和葡萄糖-6-磷酸相互转化。在植物中,PGM分为胞质型PGM和质体型PGM。胞质型PGM参与蔗糖的代谢;质体型PGM参与淀粉的合成。近期发现,PGM在植物生长发育中起到重要作用。本文主要对植物中葡萄糖磷酸变位酶的分类、分子性质及功能等方面进行综述。

红细胞同工酶EsD-PGM_1-GLOI同步电泳分型方法的建立

综合、改良了分别分型的方法,建立了红细胞同工酶EsD-PGM_1-GLOI同步电泳分型方法,为EsD、PGM_1和GLOI三种红细胞同工酶在法医学鉴定中更广泛的应用提供了一种可靠、经济、实用的方法。

云南22个少数民族人群红细胞酶EsD、PGM_1、GLOI、EAP、ADA和AK_1多态分布调查

酯酶D（EsD）、磷酸葡萄糖变位酶—1（PGM1）、乙二醛酶Ⅰ（GLOI）、红细胞酸性磷酸酶（EAP）、腺苷脱氨酶（ADA）和腺苷酸激酶（AK1）都是存在于人类红细胞及某些组织中的具有遗传多态性的同工酶类,它们的表型分布在不同人类群体中不尽一致,因而受到人类群体遗传学、法医学及临床医学等研究领域的重视。为了解上述6种红细胞酶在云南少数民族人群中的分布状况,以提供遗传学、人类学、民族学。

长链非编码RNA葡萄糖磷酸变位酶样蛋白5反义1通过靶向调控微小RNA-484对乳腺癌细胞的影响

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)葡萄糖磷酸变位酶样蛋白5反义1(PGM5-AS1)靶向微小RNA(miR)-484对乳腺癌细胞增殖、细胞周期分布和凋亡的影响及其临床意义。方法53例乳腺癌患者来源于2016年1月至2018年10月南开大学附属第四中心医院确诊患者。收集患者肿瘤组织和癌旁组织(距离癌灶>5 cm处正常组织)。实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测乳腺癌组织、癌旁组织、人乳腺上皮细胞株MCF-10A、乳腺癌细胞(MCF-7、MDA-MB-231、SKBR-3)中PGM5-AS1和miR-484的表达水平。将MCF-7细胞分为正常对照(NC)、pcDNA、pcDNA-PGM5-AS1、抗miR-con、抗miR-484、pcDNA-PGM5-AS1+miR-con、pcDNA-PGM5-AS1+miR-484组。采用噻唑蓝(MTT)实验、流式细胞术检测细胞的增殖活力、细胞凋亡率以及细胞周期分布。两组比较采用t检验;多组比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用SNK-q检验。结果与癌旁组织比较,乳腺癌组织PGM5-AS1表达(0.61±0.26比1.07±0.14)降低,miR-484表达(3.15±0.84比1.04±0.17)升高(t=11.341、17.924,P<0.05),差异有统计学意义。与MCF-10A细胞比较,乳腺癌细胞PGM5-AS1表达(0.28±0.03比1.04±0.07、0.37±0.05比1.04±0.07、0.35±0.04比1.04±0.07)降低,miR-484表达(4.75±0.34比1.07±0.12、3.89±0.48比1.07±0.12、3.58±0.42比1.07±0.12)升高(F=459.394、167.657,P<0.05),差异有统计学意义。与pcDNA组比较,pcDNA-PGM5-AS1组MCF-7细胞存活率[(68.28±4.78)%比(98.63±6.57)%]降低,凋亡率[(13.44±1.28)%比(4.63±0.59)%]、G0~G1期细胞比例[(72.42±3.64)%比(56.80±2.47)%]升高(F=89.925、363.156、81.190,P<0.05),差异有统计学意义。与抗miR-con组比较,抗miR-484组MCF-7细胞存活率[(64.64±7.26)%比(102.49±6.84)%]降低,凋亡率[(19.54±2.88)%比(4.17±0.57)%]、G0~G1期细胞比例[(68.38±2.60)%比(55.16±2.78)%]升高(F=97.967、253.890、59.086,P<0.05),差异有统计学意义。PGM5-AS1靶向负调控miR-484表达。结论PGM5-AS1通过靶向miR-484可抑制乳腺癌细胞增殖,引起细胞凋亡和G0~G1期阻滞。

尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶活性测定试剂盒及其方法

本方法公开了一种尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶活性测定试剂盒及其方法，该试剂盒包括：由Tris、蒸馏水、HCl、乙二胺四乙酸二钠盐、DTY和蔗糖混匀后制成的提取液，由所述提取液、蒸馏水、MgCl2、UDPG混匀后制成的试剂一，由NADP组成的试剂二，由6一磷酸葡萄糖脱氢酶组成的试剂三，由磷酸葡萄糖变位酶组成的试剂四，由PPi与蒸馏水溶解后制成的试剂五。本方法的试剂盒对本发明的尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶活性测定方法中的提取液成分及测定体系做了大量的摸索调整实验，最终达到了提取液成分简单、提取效果良好、测定体系小，操作简便迅速的效果。

PGM5-AS1抑制miR-4728-5p对宫颈癌细胞侵袭、转移的影响

目的 研究长链非编码RNA(lncRNA)葡萄糖磷酸变位酶样蛋白5反义(PGM5-AS)1对微小RNA(miRNA)-4728-5p的靶向调控及对宫颈癌细胞侵袭、转移的影响。方法 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测宫颈癌组织中PGM5-AS1表达。在宫颈癌SiHa细胞中转染pcDNA3.1-PGM5-AS1或anti-miR-4728-5p。采用噻唑蓝(MTT)法检测SiHa细胞的增殖,平板克隆形成实验分析细胞的克隆形成,Transwell小室法评估细胞的侵袭迁移,Western印迹测定细胞中细胞增殖抗原Ki67、E钙黏蛋白(E-cadherin)、N钙黏蛋白(N-cadherin)蛋白表达。生物信息学预测与双荧光素酶报告实验验证PGM5-AS1对miR-4728-5p的靶向调控。qRT-PCR检测miR-4728-5p的表达。结果 宫颈癌组织中PGM5-AS1的表达量明显减少(P<0.05)。转染pcDNA3.1-PGM5-AS1显著降低SiHa细胞的细胞存活率、克隆形成数、迁移细胞数、侵袭细胞数、Ki67和N-cadherin蛋白水平,并明显提高E-cadherin蛋白水平(P<0.05)。PGM5-AS1靶向抑制miR-4728-5p的表达。转染anti-miR-4728-5p明显减少SiHa细胞的细胞存活率、克隆形成数、迁移细胞数、侵袭细胞数、Ki67和N-cadherin蛋白表达量,而显著增加高E-cadherin蛋白表达量(P<0.05)。结论 PGM5-AS1通过靶向miR-4728-5p,抑制宫颈癌细胞的增殖、侵袭、转移。