饲粮中复合添加马齿苋、柠檬酸和葡萄糖氧化酶对肉兔生长性能、屠宰性能以及免疫和抗氧化功能的影响

本试验旨在研究饲粮中复合添加马齿苋、柠檬酸和葡萄糖氧化酶对肉兔生长性能、屠宰性能以及免疫和抗氧化功能的影响。试验选取200只健康的35日龄断奶伊拉商品肉兔(公母各占1/2),按照体重和性别随机分为4组,每组50个重复,每个重复1只兔。对照组饲喂基础饲粮,试验1组饲喂在基础饲粮中添加3%马齿苋替换等量麸皮的饲粮,试验2组和试验3组分别饲喂在试验1组饲粮基础上添加1%柠檬酸和1%柠檬酸+200 mg/kg葡萄糖氧化酶的饲粮。预试期7 d,正试期35 d。结果表明:1)与对照组相比,试验2组和试验3组肉兔终末体重显著提高(P<0.05),死亡率显著降低(P<0.05),腹泻频率有降低趋势(0.05<P<0.10);试验2组肉兔平均日增重和平均日采食量显著提高(P<0.05);试验3组肉兔料重比和平均日采食量显著低于试验1组和试验2组(P<0.05)。2)与对照组相比,3个试验组肉兔半净膛屠宰率显著提高(P<0.05),试验1组和试验2组肉兔全净膛屠宰率显著提高(P<0.05)。3)与对照组相比,3个试验组肉兔血清免疫球蛋白G含量显著提高(P<0.05),试验1组和试验2组肉兔血清白细胞介素-1β含量显著降低(P<0.05),试验2组和试验3组肉兔血清白细胞介素-6(IL⁃6)含量显著降低(P<0.05);试验3组肉兔胸腺指数显著高于试验1组(P<0.05),血清IL⁃6含量显著低于试验1组(P<0.05)。4)各组间肉兔肝脏抗氧化指标均无显著差异(P>0.05)。综上所述,饲粮中复合添加马齿苋、柠檬酸和葡萄糖氧化酶能够提高肉兔生长性能和屠宰性能,提高机体免疫力,降低死亡率和腹泻频率。

葡萄糖氧化酶和植物乳杆菌抑菌性能的研究

采用牛津杯法研究葡萄糖氧化酶(GOD)和植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)对鸡源、猪源大肠杆菌(Escherichia coli)和沙门氏菌(Salmonella)的抑菌作用。结果表明,牛津杯法检测到GOD对不同来源致病菌均具有抑菌性,且在一定浓度范围内随浓度增加抑菌性能增强,在GOD酶活10 U/mL时仍具有抑菌作用,抑菌圈直径均≥9.25 mm。GOD酶在37~75℃干热处理10 min后仍具有较好的抑菌活性,65℃时对猪源大肠杆菌K88和37℃时对沙门氏菌0533抑菌作用最强,抑菌圈直径分别为10.75 mm和12.25 mm。植物乳杆菌BLCC2-0126对被试病原菌抑菌圈直径最大,对猪源大肠杆菌K99和沙门氏菌0533抑菌圈直径为13.75 mm。总之,GOD和BLCC2-0126均具有抑菌作用,且可共用于实际生产中。

饲粮复合添加丁酸梭菌和葡萄糖氧化酶对生长肉兔生长性能、屠宰性能、免疫和抗氧化功能以及盲肠微生物区系的影响

本试验旨在研究饲粮复合添加丁酸梭菌和葡萄糖氧化酶对生长肉兔生长性能、屠宰性能、免疫和抗氧化功能以及盲肠微生物区系的影响。选取250只体重相近的35日龄断奶伊拉商品肉兔,随机分为5组,每组50个重复,每个重复1只兔。对照组饲喂基础饲粮,抗生素组饲喂在基础饲粮中添加有效含量为75 mg/kg金霉素和20 mg/kg恩拉霉素的饲粮,试验组分别饲喂在基础饲粮中添加300 g/t丁酸梭菌(试验1组)、200 g/t丁酸梭菌+200 g/t葡萄糖氧化酶(试验2组)和300 g/t丁酸梭菌+200 g/t葡萄糖氧化酶(试验3组)的饲粮。预试期7 d,正试期35 d。结果表明:1)与对照组相比,试验2组和试验3组肉兔平均日增重(ADG)显著提高(P<0.05),料重比(F/G)显著降低(P<0.05),且这2个组与抗生素组相比均无显著差异(P>0.05);试验2组死亡率显著低于对照组(P<0.05),且腹泻频率和死亡率与抗生素组无显著差异(P>0.05)。由此可见,试验2组替抗效果最好。2)各组肉兔屠宰性能和免疫器官指数均无显著差异(P>0.05)。3)与对照组相比,试验2组肉兔血清促炎细胞因子白细胞介素-1β(IL-1β)含量有降低趋势(P=0.085),血清白细胞介素-6(IL-6)含量显著降低(P<0.05)。4)与对照组相比,试验2组肉兔肝脏谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性显著提高(P<0.05)。5)与对照组相比,试验2组肉兔盲肠微生物群落丰富度和进化多样性有提高的趋势(0.05<P<0.10)。6)与对照组相比,试验2组肉兔盲肠微生物特有扩增子序列变异(ASV)数提高了42.79%,2组间显著差异的标志物种可能是ASV_19729(P<0.05),属于厚壁菌门的梭菌属。综上所述,肉兔饲粮中复合添加200 g/t丁酸梭菌和200 g/t葡萄糖氧化酶能够提高其生长性能和成活率,降低机体炎症反应,增强肝脏抗氧化能力,改善盲肠微生物群落结构,替代抗生素效果较好。

基于葡萄糖氧化酶作用的黑小麦粉面团理化性质及加工性能研究

为改善黑小麦粉面团理化特性及加工性能,探究葡萄糖氧化酶(GOD)添加量对黑小麦粉糊化、热机械学面团拉伸、流变学等特性及微观结构的影响,并从蛋白质组分变化角度加以解释。结果表明:适量添加GOD能显著降低黑小麦粉面团中游离巯基的含量,同时增加二硫键的含量,从而加深蛋白质交联程度,对黑小麦粉面团理化特性有显著改善作用。当GOD添加量为0.8%时,面团结构和性质改善效果最佳,且此时麦醇溶蛋白与麦谷蛋白比值(0.81)接近最适比(1.0)。此研究为开发黑小麦食品、提高其食用品质提供了一定参考。

葡萄糖氧化酶的研究与应用进展

葡萄糖氧化酶(glucose oxidase,GOD)作为一种需氧脱氢酶,能够利用分子氧专一性将β⁃D⁃葡萄糖氧化生成过氧化氢和葡萄糖酸,基于这一反应机理,葡萄糖氧化酶表现出良好的杀菌和抑菌活性,因此被广泛应用于食品、饲料、临床诊断、生物技术等领域。然而,不同领域对GOD的应用环境不同,因此需要根据GOD不同的特性需求,采用先进的生物技术对GOD的特性进行优化,开发具有针对性的酶制剂。该文从来源、性质、异源表达和多领域应用等方面对葡萄糖氧化酶进行阐述,以期为葡萄糖氧化酶的开发与产业化应用提供思路。

葡萄糖氧化酶及其配伍控制仔猪肠道损伤及腹泻的作用

仔猪腹泻控制是实现生猪高效养殖生产的关键之一,传统高效的抗生素、高锌等腹泻控制饲料技术因为存在安全隐患和环境污染问题,国内外已经禁止或逐步限制其在饲料中使用。“替抗减锌”技术研究发现,酶制剂、酸化剂、植物精油和单宁酸等表现出改善畜禽生长性能、免疫功能、肠道健康等积极作用及其可靠的替代效果。相对抗生素,单独替抗产品的应用效果都存在一定不足,葡萄糖氧化酶和酸化剂、植物精油和单宁酸具有配伍协同效应,其中葡萄糖氧化酶和柠檬酸在改善仔猪健康和生长性能方面的组合效应最为显著。

桔青霉 Uv-7 菌株固体发酵产葡萄糖氧化酶的分离与纯化

葡萄糖氧化酶(Glucose oxidase,GOD)是一种需氧脱氢酶,能将葡萄糖氧化为葡萄糖酸和过氧化氢。本文采用紫外诱变筛选得到1株名为桔青霉Uv-7的葡萄糖氧化酶产生菌,以木薯叶为固体基质,采用优化后的最适培养基组分和发酵条件进行GOD的发酵生产。实验中,加入40 mL、pH 7.0的磷酸缓冲液抽提获取粗酶液,粗酶液经1∶0.5(V/V)的丙酮初步纯化,并经过Sephadex G75、Sephacryl S-200和DEAE-Sephadex A50离子交换层析,得到单组分的GOD,纯化倍数为23.46,比活力为158.3 U/mg,酶活回收率为21.06%。分子质量约为90 kDa,为单亚基酶。

铜负载葡萄糖氧化酶纳米药物用于肝癌的化学动力学治疗

目的:为了达到靶向肿瘤部位实现肝癌的精准治疗,设计合成一种负载葡萄糖氧化酶(GOx)和铜离子(Cu2 )的纳米药物(Cu@GoxNM),通过化学动力学治疗达到对肿瘤细胞的杀伤作用。方法:通过“一锅法”合成铜负载葡萄糖氧化酶的纳米药物,通过扫描电镜和元素映射检测相关元素来验证纳米药物的合成。验证该纳米药物的级联催化产生活性氧作用。通过MTT细胞毒活实验,细胞活性氧的检测和活死细胞染色实验来验证其对细胞的影响,由此来证明化学动力学治疗的效果。结果:成功合成了铜负载葡萄糖氧化酶的纳米药物Cu@GoxNM;Cu@GoxNM对HUH7细胞的促凋亡作用与其浓度呈正相关;与对照细胞相比Cu@GoxNM致HUH7细胞产生更多的活性氧并发生细胞凋亡。结论:Cu@GoxNM纳米药物能明显促进肝癌细胞的凋亡,其是通过产生过量的活性氧达到化学动力学疗法作用。

检测冷冻面团储藏期间葡萄糖氧化酶对理化特性的影响

为了改善冷冻面团品质下降的现象,本文以冷冻玉米面团为原料,通过对玉米面团的持水特性、谷蛋白溶胀指数和玉米饼的质构特性的测定,探讨了葡萄糖氧化酶(GOX)对面团冻藏前后玉米饼品质的影响。结果表明,当GOX的添加量为0.010%时,改良效果最好,与对照组相比,其面团保水性提高了30.44%,谷蛋白溶胀指数提高了13.12%;产品硬度下降了20%左右。本研究为添加GOX改善玉米饼的品质提供理论参考。

葡萄糖氧化酶对公牛生长性能、养分消化和瘤胃发酵的影响

为研究葡萄糖氧化酶(GOD)对公牛生长性能、养分消化和瘤胃发酵的影响,将32头体重(596.48±23.31)kg、(22±0.8)月龄的荷斯坦公牛随机分为对照组、LGOD组、MGOD组和HGOD组,分别在基础日粮中添加0、30、60、90 mg/kg GOD。试验牛单栏饲养,试验预试期20 d、正试期60 d。结果表明:LGOD组和MGOD组干物质采食量和平均日增重高于对照组(P<0.05),饲料转化率低于对照组和HGOD组(P<0.05);GOD组养分表观消化率高于对照组(P<0.05),MGOD组高于HGOD组(P<0.05);MGOD组和HGOD组瘤胃pH、丙酸摩尔比低于LGOD组和对照组(P<0.05),总挥发性脂肪酸浓度高于对照组(P<0.05);MGOD组细菌、真菌、原虫、主要纤维降解菌和蛋白质降解菌数量高于对照组(P<0.05);LGOD组和MGOD组血液总蛋白含量高于HGOD组和对照组(P<0.05),白蛋白含量高于对照组(P<0.05);MGOD组血液总抗氧化能力活性高于对照组(P<0.05);GOD组肿瘤坏死因子和转化生长因子-β含量高于对照组(P<0.05)。由此可知,补充GOD能改善公牛的生长性能、养分消化和瘤胃发酵,推荐水平为60 mg/kg。

四甲基联苯胺催化荧光法测定葡萄糖氧化酶活性

基于四甲基联苯胺(TMB)催化荧光法测定葡萄糖氧化酶(GOD)活性。在pH 4.5的乙酸盐缓冲液及37℃水浴条件下,GOD作用下的葡萄糖定量生成H_(2)O_(2),当有Fe^(2+)存在时,H_(2)O_(2)氧化TMB生成具有较强荧光信号的TMB氧化产物(TMBox),TMBox荧光强度与GOD活性有关联。分析过程分3个阶段:创建H_(2)O_(2)标准曲线方程;完成酶催化反应和TMB荧光反应;测定TMBox荧光强度。结果表明,GOD活性检测范围为3.33×10^(-5)~3.33×10(-3)U/mL,检测限(3σ/k)为1.11×10^(-6)U/mL。所建立方法具有操作简单、方法灵敏度高和成本低的优点。利用TMB催化荧光法测定了食品添加剂中GOD的活性,加标回收率在94.60%~102.0%之间。

葡萄糖氧化酶对产蛋后期蛋鸡生产性能、免疫力及抗氧化功能的影响

试验旨在研究不同水平的葡萄糖氧化酶对产蛋后期海兰褐蛋鸡的产蛋性能、机体免疫力及抗氧化能力的影响。选择健康的海兰褐蛋鸡1 000只,随机分成5组,每组10个重复,每个重复20只。对照组、试验1组、试验2组、试验3组和试验4组海兰褐蛋鸡分别饲喂含有0 (对照组)、100、200、400、800 mg/kg的葡萄糖氧化酶的试验饲粮。预试期7 d,正式试验期56 d。结果表明,试验2组、试验3组和试验4组海兰褐蛋鸡的产蛋率、平均日产蛋重显著高于对照组(P<0.05),料蛋比显著低于对照组和试验1组(P<0.05)。试验3组和试验4组鸡蛋的哈夫单位显著高于对照组和试验1组(P<0.05)。试验3组和试验4组蛋鸡血清中免疫球蛋白A和免疫球蛋白M水平显著高于对照组和试验1组(P<0.05),试验2组、试验3组和试验4组蛋鸡血清中免疫球蛋白G水平显著高于对照组(P<0.05)。试验2组、试验3组和试验4组蛋鸡血清中干扰素-γ、白细胞介素-2及白细胞介素-10水平显著高于对照组(P<0.05),而肿瘤坏死因子-α水平显著低于对照组和试验1组(P<0.05)。试验2组、试验3组和试验4组蛋鸡血清中总抗氧化能力和谷胱甘肽过氧化物酶、超氧化物歧化酶活力显著高于对照组(P<0.05),试验3组和试验4组血清超氧化物歧化酶活力显著高于试验1组(P<0.05);所有葡萄糖氧化酶组血清丙二醛水平均显著低于对照组(P<0.05)。研究表明,葡萄糖氧化酶可以提高蛋鸡产蛋性能、机体免疫力及抗氧化功能,葡萄糖氧化酶的适宜添加水平为400 mg/kg。

直接电位滴定法测定葡萄糖氧化酶活度

本文建立了电位滴定测定面粉添加剂葡萄糖氧化酶活度的新方法。葡萄糖氧化酶催化氧化葡萄糖产生H_(2)O_(2),高价铈(Ce^(4+))与H_(2)O_(2)发生2∶1的定量反应,当用Ce^(4+)标准溶液滴定H_(2)O_(2)时,H_(2)O_(2)生成量直接体现了葡萄糖氧化酶活度,考察了滴定条件,系统分析了方法的准确度和精密性。结果表明,葡萄糖氧化酶活度在0.00~3.40 U/mL范围内与Ce^(4+)标准溶液滴定体积呈线性关系:∆V(Ce^(4+))=6.061X(U/mL)-0.0223,相关系数为0.9988,方法的最低检出量为4.94×10^(-3)U/mL。自配葡萄糖氧化酶工作液作测试液,平行6次测定,相对标准偏差RSD<5%。

葡萄糖氧化酶对断奶仔猪生长性能、血清生化指标及经济效益的影响

试验旨在研究葡萄糖氧化酶对断奶仔猪生长性能、血清生化指标及养殖经济效益的影响。选取200头断奶仔猪,随机分为4组,每组5个重复,每个重复10头断奶仔猪。对照组断奶仔猪饲喂基础日粮,试验组分别在基础日粮中添加50、100、150 mg/kg水平的葡萄糖氧化酶。试验期28 d。结果显示,100 mg/kg组、150 mg/kg组仔猪平均日增重(ADG)显著高于对照组(P<0.05),100 mg/kg组和150 mg/kg组仔猪料重比(F/G)显著低于对照组(P<0.05),各试验组仔猪腹泻率显著低于对照组(P<0.05)。100 mg/kg组仔猪血清总抗氧化能力(T-AOC)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性显著高于对照组(P<0.05),各试验组仔猪血清超氧化物歧化酶(SOD)活性显著高于对照组(P<0.05),100 mg/kg组仔猪血清丙二醛(MDA)含量显著低于对照组(P<0.05)。100 mg/kg组仔猪血清中免疫球蛋白G(IgG)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量显著高于对照组(P<0.05),试验组仔猪血清白细胞介素-6 (IL-6)含量均显著高于对照组(P<0.05)。100 mg/kg组、150 mg/kg组仔猪背最长肌IGF-2基因的表达量显著高于对照组(P<0.05)。试验组仔猪养殖利润分别比对照组高7.80、29.28、16.14元/头。研究表明,葡萄糖氧化酶可以提高仔猪生长性能,改善机体健康,建议在断奶仔猪日粮中添加100 mg/kg葡萄糖氧化酶。

葡萄糖氧化酶产生菌的分离及固体发酵条件优化

采用Fiedure.K.J显色法,从土壤中分离得到1株命名为LJ-1的葡萄糖氧化酶产生菌。经过形态学观察并基于ITS-rDNA序列分析构建系统发育树对菌株LJ-1进行鉴定。采用固体发酵法和单因素试验法研究培养基组成和发酵条件对菌株LJ-1产葡萄糖氧化酶活力的影响,在单因素试验结果的基础上,采用响应面法对影响葡萄糖氧化酶活力较大的因素进行优化。结果表明:菌株LJ-1被鉴定为褐红篮状菌LJ-1(Talaromyces pinophilus LJ-1)。适宜的发酵培养基组成为:葡萄糖14%,硝酸钠0.64%,KH_(2)PO_(4)0.2%,MgSO_(4)·7H_(2)O 0.25%,CaCl20.2%,ZnSO_(4)0.25%,吐温801%;优化后的发酵条件为:固水比1:0.85,发酵温度33℃,发酵时间8 d,装量17.5 g/250 mL三角瓶,初始pH 6.5,接种量6%。在此条件下,葡萄糖氧化酶活力达到46.30 U/g干基。试验结果为葡萄糖氧化酶的生产提供了新的途径。

复合葡萄糖氧化酶与过氧化氢酶对肉鸡生长性能、养分消化率、血清指标及肠道形态的影响

本试验旨在研究复合葡萄糖氧化酶(GOD)与过氧化氢酶(CAT)对肉鸡生长性能、养分消化率、血清指标及肠道形态的影响。选用健康的1日龄罗斯308白羽肉鸡600只,随机分成6组,每组10个重复,每个重复10只鸡(公母各占1/2)。对照组饲喂基础饲粮,试验组在基础饲粮中分别添加250 g/t GOD、250 g/t CAT、250 g/t GOD+125 g/t CAT、250 g/t GOD+250 g/t CAT和250 g/t GOD+500 g/t CAT。试验分为1~21日龄和22~42日龄2个阶段,试验期42 d。结果表明:1)1~21日龄,与对照组相比,250 g/t GOD+250 g/t CAT组的21日龄体重和平均日增重显著升高(P<0.05),料重比(F/G)显著降低(P<0.05)。2)与对照组相比,250 g/t GOD+250 g/t CAT组1~21日龄粗脂肪消化率显著升高(P<0.05),干物质、粗蛋白质和总能消化率分别提高了1.94%、1.47%和2.37%(P>0.05)。3)与对照组相比,250 g/t GOD组21日龄血清白蛋白含量显著升高(P<0.05),250 g/t CAT组血清免疫球蛋白G含量显著升高(P<0.05),250 g/t GOD+125 g/t CAT组血清免疫球蛋白A含量显著升高(P<0.05)。4)与对照组对比,250 g/t CAT组21日龄血清超氧化物歧化酶活性显著降低(P<0.05),250 g/t GOD+125 g/t CAT组血清丙二醛含量显著升高(P<0.05)。5)与对照组相比,250 g/t GOD+125 g/t CAT组和250 g/t GOD+250 g/t CAT组21日龄回肠隐窝深度显著降低(P<0.05)。综上所述,饲粮中添加250 g/t GOD+250 g/t CAT可提高肉鸡1~21日龄的生长性能和养分消化率,添加250 g/t GOD+125 g/t CAT和250 g/t GOD+250 g/t CAT可促进肉鸡肠道发育。

丁酸梭菌、葡萄糖氧化酶和迷迭香提取物组方对肉兔生长性能、屠宰性能、免疫功能和盲肠微生物区系的影响

本试验旨在研究饲粮中添加丁酸梭菌、葡萄糖氧化酶和迷迭香提取物组方对肉兔生长性能、屠宰性能、免疫功能和盲肠微生物区系的影响,为家兔替抗产品研发提供理论参考。试验选用28日龄断奶的商品伊拉肉兔500只(公母各占1/2),随机分为5组,每组10个重复,每个重复10只。对照组(Ⅰ组)饲喂基础饲粮,试验组分别饲喂添加100 g/t丁酸梭菌+1 kg/t迷迭香提取物(Ⅱ组)、100 g/t丁酸梭菌+100 g/t葡萄糖氧化酶(Ⅲ组)、1 kg/t迷迭香提取物+100 g/t葡萄糖氧化酶(Ⅳ组)及100 g/t丁酸梭菌+1 kg/t迷迭香提取物+100 g/t葡萄糖氧化酶(Ⅴ组)的试验饲粮。预试期7 d,正试期30 d。结果表明:1)Ⅴ组的终末体重、平均日增重和成活率显著高于对照组(P<0.05),腹泻率显著低于对照组(P<0.05)。Ⅴ组的宰前活体重显著高于对照组(P<0.05)。2)Ⅱ组、Ⅳ组和Ⅴ组的十二指肠谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性显著低于对照组(P<0.05),Ⅳ组和Ⅴ组的十二指肠丙二醛(MDA)含量显著高于对照组(P<0.05),Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组和Ⅴ组的十二指肠总抗氧化能力(T-AOC)显著高于对照组(P<0.05)。3)Ⅴ组的空肠绒毛高度显著高于对照组(P<0.05)。4)Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组和Ⅴ组的回肠黏膜分泌型免疫球蛋白A(sIgA)含量显著高于对照组(P<0.05),回肠黏膜干扰素-γ(IFN-γ)含量显著低于对照组(P<0.05);Ⅴ组的回肠黏膜肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量显著高于其他各组(P<0.05)。5)Ⅲ组和Ⅴ组的盲肠疣微菌门(Verrucomicrobiota)相对丰度显著高于对照组(P<0.05),Ⅲ组、Ⅳ组和Ⅴ组的盲肠酸杆菌门(Acidobacteriota)相对丰度显著低于对照组(P<0.05)。Ⅴ组的盲肠克曼菌属(Akkermansia)、果胶单核菌属(Monoglobus)和疣微菌属UCG-010(Verrucomicrobium_UCG-010)相对丰度显著高于对照组(P<0.05),Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组和Ⅴ组的盲肠马赛菌属(Mas-silia)相对丰度显著低于对照组(P<0.05)。由此可见,饲粮中添加丁酸梭菌、葡萄糖氧化酶和迷迭香提取物组方能够提高伊拉肉兔生长性能,改善肠道形态结构和盲肠微生物区系,提高机体肠道黏膜免疫功能和抗氧化能力,有益于维持肠道健康,提高成活率。

葡萄糖氧化酶对全株玉米青贮品质的影响

本试验旨在研究葡萄糖氧化酶对全株玉米青贮品质的影响并筛选出适合的添加量。试验设4个处理组,分别为对照组(无添加)、试验Ⅰ组(10 mg/kg)、试验Ⅱ组(20 mg/kg)、试验Ⅲ组(40 mg/kg),每个处理4个重复。按照试验设计将葡萄糖氧化酶与全株玉米混匀后装入青贮袋,真空密封,60 d后取样分析。结果表明:试验组的感官评价和对照组相比差异不显著(P>0.05);试验Ⅲ组粗蛋白质含量比对照组高0.48个百分点(P<0.05);试验Ⅱ和Ⅲ组的淀粉含量比对照组高1.91个百分点和3.18个百分点(P<0.05);试验Ⅲ组的30 h中性洗涤纤维降解率(30 h NDFD)比对照组高1.33个百分点(P<0.05);试验Ⅲ组的pH比对照组低0.29(P<0.05);试验Ⅲ组乳酸含量比对照组高0.72个百分点(P<0.05);全株玉米青贮质量分级指数(CSQS)显示,试验Ⅲ组(71.21)>试验Ⅱ组(66.28)>试验Ⅰ组(63.82)>对照组(62.76)。综上所述,在全株玉米青贮中添加40 mg/kg葡萄糖氧化酶效果最好。

信号肽优化提高葡萄糖氧化酶在毕赤酵母中的表达量

葡萄糖氧化酶(glucose oxidase,GOD)广泛用于食品加工、饲料添加剂、生物传感器及工业生产等领域。较曲霉而言,毕赤酵母是更具高效生产GOD潜力的微生物,其副产物少,分离纯化简单。但由于外源基因、基因剂量以及分泌信号等因素的影响,毕赤酵母GOD产量仍然较低,限制了GOD在食品加工等领域的大规模应用。基于毕赤酵母密码子偏好性和mRNA二级结构能量,对毕赤酵母重组表达盒中的α因子信号肽进行改造,得到4种含有不同信号肽的毕赤酵母重组菌株。结果表明,使用含最高密码子频率信号肽α1重组菌株的GOD酶活力是出发菌株的2.01倍;而使用含低密码子频率信号肽α4重组菌株的GOD酶活力仅为出发菌株的41%。综上所述,毕赤酵母表达载体中的信号肽核酸序列排布能够影响重组GOD的表达量,为提高毕赤酵母重组蛋白表达量提供了新的研究思路。

黑曲霉葡萄糖氧化酶基因在毕赤酵母中的表达及性质研究

试验旨在提高葡萄糖氧化酶(glucose oxidase,E.C.1.1.3,GOD)的产量并进一步研究重组葡萄糖氧化酶的酶学性质及其对畜禽常见致病菌的体外抑菌效果。试验选取黑曲霉来源的GOD基因序列GOX4,经密码子优化后电击转入毕赤酵母,构建Pichia pastoris X33/pGAPZαA-GOX4重组菌,而后通过高浓度博来霉素筛选到一代高产葡萄糖氧化酶的重组菌。在此基础上,通过共表达糖酵解途径中的关键限速基因丙酮酸激酶基因BTS成功构建二代高产菌,并研究重组葡萄糖氧化酶的酶学性质,采用牛津杯法进行抑菌试验。结果表明:①第二代高产菌的GOD产量相比第一代提高了60%;②重组葡萄糖氧化酶的最适温度为50℃,最适pH为7.0;③稀释10倍和25倍的重组葡萄糖氧化酶发酵上清液对大肠杆菌、沙门氏菌和铜绿假单胞菌均有一定程度的抑制效果,但效果有所差异。综上所述,共表达丙酮酸激酶基因BTS提高了重组葡萄糖氧化酶的表达,重组葡萄糖氧化酶的酶学性质及体外抑菌试验表明其在畜牧行业具有良好的应用潜力。