基于葡萄糖/葡萄糖氧化酶/H_2O_2/L-酪氨酸/辣根过氧化物酶反应体系的荧光毛细分析法测定血糖

建立了葡萄糖(G)/葡萄糖氧化酶(GOD)/H2O2/L-酪氨酸/辣根过氧化物酶(HRP)新荧光反应新体系,并将此反应体系与荧光毛细分析法(FCA)结合,开发一种能够真正实现血糖测定的新葡萄糖酶荧光毛细分析法(GE-FCA)。经优选得到的新反应体系最佳条件为:GOD和HRP浓度均为2000U/L,L-酪氨酸浓度为1.0mmol/L,磷酸盐缓冲液的pH=8.5,反应温度为35℃,反应时间为20min。通过测定葡萄糖标准样品,得到GE-FCA法测定葡萄糖的线性范围是5.0～140μmol/L;相对标准偏差<4.0%;检出限为2.65μmol/L。本方法已成功用于临床血清样品中葡萄糖的测定,其回收率在98%～104%之间。GE-FCA荧光增强法操作简单,样品和试剂用量极少(9μL),线性响应范围宽、抗干扰能力强,易于普及推广。

基于葡萄糖氧化酶-辣根过氧化物酶催化体系的葡萄糖SERS定量分析研究

葡萄糖氧化酶法(glucose oxidase,GOx)是生物体系以及葡萄糖检测中常用的方法,其中葡萄糖氧化酶可以专一地催化葡萄糖生成葡萄糖酸以及过氧化氢(H2O2)。葡萄糖氧化酶内部的黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)则是其主要的活性成分,在葡萄糖的催化氧化过程中起着电子传递的作用。传统的葡萄糖氧化酶法主要是通过借助辣根过氧化物酶(horse radish peroxidase,HRP)/TMB显色体系完成对葡萄糖的定量分析,即葡萄糖氧化酶可以特异地催化氧化葡萄糖,产生H2O2。在H2O2存在的体系中,辣根过氧化物酶可以将底物分子四甲基联苯胺(TMB)催化氧化。表面增强拉曼光谱(surface-enhanced Raman scattering,SERS)是一种超灵敏检测手段并且被广泛应用于生物检测中[1]。经研究发现,TMB分子具有很高的SERS活性,并且TMB分子经过催化反应之后,其SERS光谱发生明显的增强,我们以此实现葡萄糖的定量分析研究。

用铁（Ⅱ）－EGTA络合物代替辣根过氧化物酶荧光测定葡萄糖氧化酶

用铁（Ⅱ）－ＥＧＴＡ络合物代替辣根过氧化物酶荧光测定葡萄糖氧化酶李庆阁，许金钩，黄贤智，陈国珍（厦门大学化学系，厦门３６１００５）测定葡萄糖氧化酶（ＧＯＤ）的方法常用的有电化学法、分光光度法和荧光光度法￣［１］，其中最灵敏的荧光光度法须使用辣根过氧化...

β-环糊精构筑模拟酶催化法测定葡萄糖

采用 β 环糊精 ( β cyclodextrin,β CD)二间羧基苯磺酸酯同三氯化铁构筑模拟酶催化法 ,对葡萄糖制剂中的葡萄糖进行测定并寻找最佳测定检测条件。方法简便 ,灵敏度和重现性理想 ,线性范围 1 2 0～4 0 0mg/L ,检测下限为 60mg/L,精密度试验RSD为 1 .9% (n=8)。

模拟过氧化物酶Fe[Ⅱ]-丁二酮肟络合物催化显色反应及分析应用

研究了Fe[Ⅱ ] 丁二酮肟的络合物作为模拟过氧化物酶对过氧化氢、4 氨基安替比林和苯酚显色反应的催化活性 .将显色反应与葡萄糖氧化酶反应偶联 ,测定了葡萄糖注射液及五味子蜜中葡萄糖的含量 。

葡萄糖氧化酶-辣根过氧化物酶-葡萄糖-愈创木酚-荧光反应体系测定血糖

利用愈创木酚的荧光特性,将其导入葡萄糖-葡萄糖氧化酶(GOD)-辣根过氧化物酶(HRP)的荧光猝灭反应体系,并与荧光毛细分析技术结合,开发了一种能测定微量葡萄糖的新方法。本方法的的最佳测定条件为:反应时间15 m in,反应温度30℃,GOD和HRP的浓度分别为4500U/L、2500U/L,愈创木酚浓度为150μmol/L,缓冲液为磷酸盐(pH 7.5)。血糖线性范围为10～160μmol/L,RSD<2.6%,检出限范围为1.15～5.32μmol/L,添加回收率在96.8%～103.7%之间。在测定人血清时,结果与葡萄糖试剂盒法一致。

荧光素-GOD-HRP体系分光光度法测定植物果实组织中的葡萄糖

植物组织中的葡萄糖在葡萄糖氧化酶 (GOD)作用下产生的过氧化氢可在辣根过氧化物酶 (HRP)的催化作用下使荧光素产生褪色反应 ,基于这一现象建立了一种选择性测定植物果实组织中葡萄糖含量的方法 .该方法可以根据检测对象的不同调整检测范围和灵敏度 ,同时具备了安全 ,方便的优点 .利用此法对苹果、鸭梨、酥梨中的葡萄糖含量进行了测定 。

基于原位电聚合硫堇的双酶型葡萄糖传感器的研究

提出了一种基于电聚合硫堇作为电子传递媒介的辣根过氧化物酶-葡萄糖氧化酶（HRP-GOD）的双酶型葡萄糖传感器的制备方法。该法采用碳糊包埋HRP和硫堇，通过原位电聚合形成聚硫堇修饰的碳糊电极，以壳聚糖膜修饰该电极表面，用戊二醛交联固定GOD制得葡萄糖传感器。葡萄糖在1．0×10^-4～8．0×10^-3mol／L浓度范围内与传感器的响应电流呈线性关系，检出限为5×10^-5mol／L。该传感器有良好的选择性和稳定性，经一个月的连续使用后，仍能保持其初始活性的80％。

亚甲基蓝为介体的丝网印刷双酶修饰电极测定葡萄糖

以亚甲基蓝作为电子媒介,通过壳聚糖固定葡萄糖氧化酶和辣根过氧化酶在丝网印刷电极上,制备成葡萄糖生物传感器。循环伏安法和恒电位法用于研究修饰电极的电化学特性,在优化的实验条件下,获得传感器对葡萄糖响应的线性范围为8．0×10^(-5)～3．5×10^(-3)mol/L。此方法测定葡萄糖抗干扰能力强、重现性好、准确度高,电极制作简单,使用方便。

葡萄糖浓度的酶联荧光毛细分析法测定

该文以葡萄糖氧化酶和辣根过氧化物酶为催化剂，使含有对甲基酚的葡萄糖溶液体系通过酶偶联催化反应生成荧光物质，从而实现对葡萄糖浓度的测定。优化的实验条件为：反应时间20min；NH3-NH4Cl缓冲溶液（pH10．4）；对甲基酚浓度30．0μmol／L。分别采用荧光毛细分析法和荧光光谱分析法测定了相同浓度的系列葡萄糖溶液的荧光强度。在5．0-500．0μmol／L范围内，两种方法测得的荧光强度均与葡萄糖浓度的对数成正比。通过对比测试结果分析了两种方法的优缺点。

海藻酸钠凝胶固定化双酶快速检测葡萄糖综合实验设计

通过海藻酸钠凝胶共固定葡萄糖氧化酶(GOx)和辣根过氧化物酶(HRP)构建了快速检测葡萄糖含量的双酶级联反应器。实验采用扫描电子显微镜和傅里叶红外光谱分析了海藻酸钠凝胶的微观形貌及化学组成。同时,对固定化双酶级联催化的葡萄糖反应体系进行优化并应用于饮料样本检测中。该实验以酶促反应为基础,利用双酶级联反应的机理建立了高效专一的葡萄糖检测方法,为酶催化的生物检测实验的设计提供了思路。

基于固定化纳米金增强化学发光双酶传感器测定葡萄糖

研制了一种新型流动注射化学发光(CL)双酶传感器,用于葡萄糖的检测.该传感器将掺杂金纳米粒子(GNPs)的壳聚糖膜包覆在硅烷化试剂预处理的玻璃微珠上,用于吸附固定葡萄糖氧化酶(GOD)和辣根过氧化物酶(HRP).葡萄糖在GOD的催化下发生氧化反应生成H2O2,生成的H2O2在HRP的催化作用下与鲁米诺发生反应,并产生化学发光信号.实验表明,壳聚糖中掺杂的GNPs不仅能够有效的吸附酶分子并保持其生物活性,还对Luminol-H2O2-HRP化学发光体系具有增敏作用.通过化学发光光谱和紫外光谱表征,详细研究了固定化GNPs增强Luminol-H2O2-HRP体系的化学发光机理.在优化的实验条件下,该传感器对葡萄糖检测的线性范围为0.01～6.0mmol/L,检测限为5.0μmol/L(3σ).将所建立的方法用于临床血清样品中葡萄糖含量的测定,获得了满意的结果.

GOD-POD法在3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗评价中的应用

目的:通过葡萄糖氧化酶-过氧化物酶(Glucose oxidase-peroxidase,GOD-POD)法检测脂肪细胞葡萄糖消耗,建立简便、经济的脂肪细胞胰岛素敏感性的评价方法。方法:诱导分化成熟的3T3-L1脂肪细胞,分别采用高浓度葡萄糖(25 mmol/L)、地塞米松(Dexamethasone,DEX)(1.0μmol/L)诱导脂肪细胞产生胰岛素抵抗(Insulin resistance,IR),GOD-POD法测定糖浓度,动态观察诱导过程中细胞糖消耗,并计算胰岛素敏感性指数(Insulin sensitivity index,ISI);同时应用RT-PCR检测脂联素(Adiponectin)mRNA表达。结果:通过该方法检测,可以反映脂肪细胞对葡萄糖的摄取利用,以胰岛素刺激下较基础状态细胞葡萄糖消耗的增加量,计算出ISI,能够反映细胞对胰岛素的敏感性及抵抗程度。结论:GOD-POD法能够准确测定细胞总体葡萄糖消耗,可用于脂肪细胞糖摄取利用与IR评价,此方法操作简便、经济易行。

酶催化诱导制备多孔石墨烯的研究

采用Hummers法,以石墨为原料制备氧化石墨烯(GO)。再以辣根过氧化物酶(HRP)和过氧化氢(H_2O_2)的酶催化反应,诱导制备了多孔石墨烯(PGR)。采用傅里叶红外光谱、扫描电子显微镜和电化学分析法对其结构、形貌和性能表征。结果表明:10mg/mL GO溶液加入80μL 5mg/mL HRP后,再每日加入20μL(1×10^(-3))mol/L H_2O_2反应10d可以获得最佳的多孔结构。基于此构置的生物催化诱导型葡萄糖传感器,反应25min时,可在电位为0.98V处呈现Au氧化峰,使其可用于葡萄糖的高灵敏检测。

快速检测痕量汞的光电型传感方法的建立

为建立一种检测痕量汞的光电型传感方法,利用汞抑制葡萄糖氧化酶体系(即葡萄糖氧化酶—辣根过氧化物酶-葡萄糖-邻联甲苯胺—偶联反应体系)生成蓝色产物的原理,将Glu与OT固定化制成试纸条,插入自制的便携式光电型传感器,绘制出汞离子溶液浓度与对应的反射光强度值的标准曲线。实验结果表明,当汞溶液的浓度范围分别处于0.010～0.050mmoL/L时,光反射强度值与汞浓度皆呈现良好线性关系。经优化检测条件,汞溶液与双酶孵育的最佳时间为1h。该方法测定汞的检出限为1.0×10-4 mmol/L,检测时间分别为5min。由此可知,此方法检测汞快速、简便,有望实现对样品中汞含量的现场检测。

快速检测痕量铜的光电型传感器的研制

利用铜对葡萄糖氧化酶的抑制作用,以及葡萄糖氧化酶-辣根过氧化物酶-葡萄糖(Glu)-邻联甲苯胺(OT)偶联反应体系生成蓝色底物的原理,将Glu与OT固定化制成试纸条,插入自制的便携式单色光反射计,组装出检测铜的光电型传感器。当铜的质量浓度范围为1 mg/L～100 mg/L时,光反射强度值与铜的质量浓度呈良好的线性关系。在优化的试验条件下,该方法的检测限为0.064 mg/L,检测时间为5 min。

交联大豆分离蛋白的制备及流变学性质

利用二元酶系(辣根过氧化物酶、葡萄糖氧化酶)和葡萄糖,通过一步法或两步法对大豆分离蛋白进行交联处理。以修饰产物中相对二酪氨酸含量为指标,采用单因素实验确定一步法处理大豆分离蛋白的反应的适宜条件为:葡萄糖添加量1.8%、葡萄糖氧化酶添加量4.0U/g蛋白质、辣根过氧化物酶添加量200U/g蛋白质、反应时间3h。在一步法处理的反应条件下,一步法和二步法处理的大豆分离蛋白相对二酪氨酸含量分别为414和381。与大豆分离蛋白相比,交联蛋白分散液的表观黏度和黏弹性均有显著改变,同时其酸凝胶的胶凝时间缩短、胶凝温度降低。