葡萄糖氧化酶和植物乳杆菌抑菌性能的研究

采用牛津杯法研究葡萄糖氧化酶(GOD)和植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)对鸡源、猪源大肠杆菌(Escherichia coli)和沙门氏菌(Salmonella)的抑菌作用。结果表明,牛津杯法检测到GOD对不同来源致病菌均具有抑菌性,且在一定浓度范围内随浓度增加抑菌性能增强,在GOD酶活10 U/mL时仍具有抑菌作用,抑菌圈直径均≥9.25 mm。GOD酶在37~75℃干热处理10 min后仍具有较好的抑菌活性,65℃时对猪源大肠杆菌K88和37℃时对沙门氏菌0533抑菌作用最强,抑菌圈直径分别为10.75 mm和12.25 mm。植物乳杆菌BLCC2-0126对被试病原菌抑菌圈直径最大,对猪源大肠杆菌K99和沙门氏菌0533抑菌圈直径为13.75 mm。总之,GOD和BLCC2-0126均具有抑菌作用,且可共用于实际生产中。

电化学法测量黑曲霉孢子萌发过程中葡萄糖氧化酶的活性

建立了电化学循环伏安法测定葡萄糖氧化酶活性的方法。该方法引入二茂铁甲醇作为氧化还原探针,以玻碳电极作为工作电极、饱和甘汞电极作为参比电极、铂丝电极作为辅助电极,采用循环伏安法,得到不同酶活的峰电流值,在酶浓度为0.128~2.377U/mL,酶浓度与峰电流之间存在线性关系,相关系数为0.998,检测下限为0.128 U/mL。运用该法测定了孢子萌发过程中酶活的变化,随着孢子的萌发,酶活先增加,达到最大值(2.130U/mL)后再次下降,同时采用传统滴定法进行对照。结果表明,相较于传统方法,电化学方法具有准确、快速和简便的特点。

纳米金-还原氧化石墨烯修饰葡萄糖氧化酶传感器的制备及其电流法检测饮料中的葡萄糖

利用纳米金(Au NPs)与还原氧化石墨烯(rGO)复合纳米材料制备了葡萄糖氧化酶生物传感器并用于饮料中葡萄糖含量的检测。将壳聚糖作为还原剂及稳定剂,通过一步法合成了Au NPs-rGO复合材料,并通过物理吸附固定葡萄糖氧化酶(GOx)来制作GOx生物传感器。该传感器在磷酸盐缓冲溶液(0.1 mol/L,p H6.0)中,-0.45 V(vs.Ag/Ag Cl)电位下电流法检测葡萄糖含量,线性检测范围为0.01~0.88 mmol/L,灵敏度为22.54μA·mmol-1·L·cm-2,检出限为1.01μmol/L,且表观米氏常数为0.497 mmol/L。该传感器用于多种饮料中葡萄糖含量的直接检测,结果满意。

基于葡萄糖/葡萄糖氧化酶/H_2O_2/L-酪氨酸/辣根过氧化物酶反应体系的荧光毛细分析法测定血糖

建立了葡萄糖(G)/葡萄糖氧化酶(GOD)/H2O2/L-酪氨酸/辣根过氧化物酶(HRP)新荧光反应新体系,并将此反应体系与荧光毛细分析法(FCA)结合,开发一种能够真正实现血糖测定的新葡萄糖酶荧光毛细分析法(GE-FCA)。经优选得到的新反应体系最佳条件为:GOD和HRP浓度均为2000U/L,L-酪氨酸浓度为1.0mmol/L,磷酸盐缓冲液的pH=8.5,反应温度为35℃,反应时间为20min。通过测定葡萄糖标准样品,得到GE-FCA法测定葡萄糖的线性范围是5.0～140μmol/L;相对标准偏差<4.0%;检出限为2.65μmol/L。本方法已成功用于临床血清样品中葡萄糖的测定,其回收率在98%～104%之间。GE-FCA荧光增强法操作简单,样品和试剂用量极少(9μL),线性响应范围宽、抗干扰能力强,易于普及推广。

葡萄糖氧化酶双试剂终点法测量模式的系统分析

目的通过系统地评价葡萄糖氧化酶双试剂终点法不同参数设置,寻求终点法最佳参数设置模式。方法比较葡萄糖氧化酶终点法5种模式对4个不同浓度样品的分析结果,评价不同参数限制所起作用的实际表现。结果终点法5种模式中模式1（有效的线性和吸光度限制）能够对不同浓度样品进行准确地分析测量,并能对高值标本的底物耗尽现象进行有效地识别判断,其余4种模式均存在一些缺陷。结论葡萄糖氧化酶双试剂终点法在岛津CL-8000全自动生化分析仪上应用时要重视参数模式的正确选择和运用,尤其是终点吸光度A值的最高检测限额要设置在1300~1400mAbs,线性范围设置在24.5mmol/L左右,才能与实际情况相符。

血糖干化学分析法与半自动生化分析仪葡萄糖氧化酶法检测的对比分析

目的:探讨德国宝灵曼活力型血糖仪及葡萄糖氧化酶法测血糖的结果相关性。方法:对102例我院门诊及住院患者末梢全血及静脉血清标本同时采用干化学法及葡萄糖氧化酶法进行测定并对测定结果进行统计学分析。结果:用宝灵曼血糖仪测定时,其末梢全血干化学法与静脉血清葡萄糖氧化酶法测定值在一定范围内其结果有高度相关性,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:干化学法测葡萄糖具有方便、快捷、可用全血进行检测、无需定标、试纸易保存等优点,适用于糖尿病患者的自我监测及临床检验科的急诊检测,但其不能完全代替静脉血清的测定结果,尤其是高值,应结合临床症状观察,并反复测定,用生化法复测后综合考虑。

LBL分子沉积法制备葡萄糖氧化酶电极

采用以静电力为主的逐层分子交替沉积技术制备葡萄糖氧化酶(GOD)电极.通过带有正电荷的聚二甲基二烯丙基铵盐酸盐(PDDA)和带有负电荷的GOD交替沉积在修饰有3-巯基-1-丙基磺酸钠(MPS)的金电极表面.以甲酸二茂铁为电子媒介体,用循环伏安法检测GOD电极对葡萄糖的响应.结果表明,当GOD电极组装层数小于4时,电流响应随着层数的增加而增大,超过4层时电流响应减小.其中4层GOD修饰电极的线性范围为0.55～6.63mmol·L-1,当pH为7.0时,响应最大.同时电极的检测重现性能良好,相对标准偏差为2.4%.

响应面法优化黑曲霉产葡萄糖氧化酶发酵条件

为了提高葡萄糖氧化酶的产量,通过响应面法对诱变后的黑曲霉菌株的发酵条件进行优化,首先利用Plackett-Burman设计筛选出对酶活影响最显著的因素:牛肉膏蛋白胨、吐温-60和磷酸氢二铵;继而用最陡爬坡实验逼近最大影响区域;最后利用Box-Behnken设计及其响应面分析确定最优的发酵培养基(g/L):蔗糖87.5,牛肉膏蛋白胨3.15,NH4NO31.88,(NH4)2HPO40.34,KH2PO40.25,Tw-60 30.47,玉米粉12.5,培养基优化后的发酵酶活为87.5 U/m L,与优化前(45.27 U/m L)相比提高了93.28%。在7 L发酵罐中对显著影响因素吐温-60的不同添加时间进行对比,确定对数期流加吐温-60可以显著提高发酵的酶活,发酵后酶活为92.88 U/m L。

溶胶-凝胶固定葡萄糖氧化酶方法的改进

生物传感器的制备过程中酶的固定是一关键步骤. 通常使用的方法有吸附法、包埋法、交联法及电聚合法,这些方法有各自的优缺点[1]. 自90年代中期以来,溶胶-凝胶法开始应用于酶的固定.

葡萄糖氧化酶法去除蛋清中葡萄糖的工艺研究

脱糖处理是干燥蛋白制品加工中的必要步骤 ,文中采用葡萄糖氧化酶 (GOD)法对蛋清的脱糖工艺进行了探讨。实验中采用酶 比色法测定葡萄糖含量 ,通过单因素试验分析了时间、pH、温度等参数对脱糖率的影响 ,并采用二次响应面法分析了GOD和双氧水的交互作用 ,确定了GOD法脱糖的最优工艺条件为 :GOD酶制剂添加量 92 . 3g/t(蛋清 )、每小时加入 7%双氧水 3. 5 g/kg(蛋清 ) ,反应体系pH5 5～ 7 0 ,温度 2 0～ 30℃ ,反应时间 2h。在此工艺条件下脱糖率达到 95 %以上 ,可以有效防止干燥蛋白制品生产和储藏中美拉德反应的发生。另外 ,文中还进一步比较了脱糖前后蛋清的性质 ,发现GOD脱糖可以保持并部分提高蛋清原有的功能性质 ,还能够改善蛋清的气味和流动性质。

高尿酸水平对葡萄糖氧化酶法与己糖激酶法测定血糖的影响

目的研究高尿酸水平对葡萄糖氧化酶法与己糖激酶法测定血糖的影响。方法用葡萄糖氧化酶法和己糖激酶法在迈瑞BS300生化分析仪上分别测定42例高尿酸血症患者和50例健康人血糖水平,比较两法结果的差异及相关性。结果高尿酸血症组葡萄糖氧化酶法和己糖激酶法血糖结果分别为(6.61±1.64)mmol/L和(7.17±1.66)mmol/L,两方法的血糖结果存在差异,葡萄糖氧化酶法受血尿酸影响,结果低于真值,血尿酸浓度与两法结果的差值正相关。结论应用葡萄糖氧化酶法检测高尿酸血症患者血糖水平会导致结果偏低,需要修正或换用己糖激酶法。

血糖干化学分析与全自动生化分析仪葡萄糖氧化酶法检测的对比分析

目的:探讨美国惠好Ⅱ型血糖仪及葡萄糖氧化酶法测血糖的结果比较。方法:对100例我院门诊及住院病人末梢全血及静脉血清标本同时采用干化学法及葡萄糖氧化酶法进行测定并对测定结果进行比较及统计学分析。结果:用惠好血糖仪测定时,其末梢全血干化学法与静脉血清葡萄糖氧化酶法测定值在一定范围内其结果有高度相关性,无显著性差异(P>0.05)。结论:干化学法测葡萄糖具有方便、快捷,可用全血进行检测,无需定标,试纸易保存等优点,适用于糖尿病病人的自我监测及临床检验科的急诊检测,但其不能完全代替静脉血清的测定结果,尤其是高值,应结合临床症状观察,并反复测定,用生化法复测后综合考虑。

两步活化法制备葡萄糖氧化酶电极的研究

采用多步活化法制备的聚乙烯醇膜 ,可在温和的条件下实现酶的固定化。用对甲基苯磺酰氯处理聚乙烯醇膜 ,与二乙胺反应引入氨基 ,再用戊二醛处理 ,最后用取得的活化膜载体可在温和条件下固定葡萄糖氧化酶。所得酶膜与碘离子选择性电极组装成的葡萄糖氧化酶电极 ,测定葡萄糖浓度时 ,线性响应范围为 1 6× 10 - 4～ 5 8× 10 - 3mol L。

己糖激酶法与葡萄糖氧化酶电极膜法测定血糖的比较

目的了解己糖激酶(HK)法和葡萄糖氧化酶电极膜法(GOD-膜法)测定血糖的性能。方法用上述两种测定血糖的方法,分别进行了精密度实验、灵敏度实验、可报告范围检测以及方法对比实验。结果①精密度:HK法低值定值血清总CV为1.95%,高值定值血清总CV为1.67%;GOD-膜法低值定值血清总CV为1.37%,高值定值血清总CV为1.68%;②HK法的灵敏度为1mmol/L,GOD-膜法的灵敏度为1.8mmol/L。③HK法的报告上限为55mmol/L,GOD-膜法的报告上限为45mmol/L。④方法对比实验:以HK法为比较方法(Y),GOD-膜法为实验方法(X),血糖的回归方程式为Y=1.0029X,R2=0.9948。结论两种方法检测血糖的精密度、灵敏度、可报告范围及方法比对实验均符合临床要求,适用于血糖的常规和自动化分析。

葡萄糖氧化酶法用于测定糖尿病患者口服葡萄糖耐量试验的研究

目的探讨GOD法用于测定糖尿病患者OGTT临床意义。方法 300例患者,分成A组、C组、E组三组。其中A组患者服用300 m L温开水与75 g葡萄糖混合溶液,C组患者服用0.5 g·m L-1葡萄糖溶液150m L,E组患者则将300 m L温开水与75 g葡萄糖混合溶液先放置1 d然后服用,分别通过GOD法和HK法对3组患者在空腹状态、服用溶液后的0.5、1、2、3 h的血糖水平进行检测,观察不同组别应用不同检测方法所产生的结果之间的差异性。结果 A组患者两种检测方法在空腹状态时检测显示血糖水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。而在服用溶液后两种检测方法在0.5、1、2、3 h的血糖水平比较,差异有统计学意义(P<0.05)。C组和E组在空腹状态与服用溶液后的0.5、1、2、3 h时应用GOD法和HK法检测显示的血糖水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论与HK法相比,GOD法对β-D型葡萄糖的特异性更高,对糖尿病患者的葡萄糖耐量试验应当推荐GOD法。

用葡萄糖氧化酶法降低马铃薯颗粒全粉还原糖

观察了葡萄糖氧化酶 (GOD)对降低马铃薯颗粒全粉中葡萄糖及还原糖的作用。结果表明 ,当控制马铃薯颗粒全粉的水分在 5 0 %～ 60 % ,酸度为 3 5 ,温度为 3 9℃时 ,GOD的酶解降糖速度最快。在此条件下用GOD(5 0 0U/kg产品 )反应 1 80min ,可以使原料中的葡萄糖减少 80 %～ 90 % ,还原糖减低 3 0 %以上。

血清葡萄糖氧化酶法新色原物的实验研究

目的以N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺钠盐(HDAOS)为新色原物,建立新的葡萄糖氧化酶(GOD)法检测血清葡萄糖。方法用HDAOS代替4-氯酚生成蓝色醌亚胺,测定波长为600 nm。采用本法、葡萄糖氧化酶-过氧化物酶-4-氨基安替比林-酚(GOD-PAP)法及高效液相色谱(HPLC)法同时测定脂血、溶血、黄疸及外观正常的血清各24份并比较结果,同时对本法进行方法学评价。结果在测定外观正常血清时,3种方法之间差异均无统计学意义(P>0.05);在测定脂血、溶血、黄疸血清时,本法葡萄糖测定结果与GOD-PAP法比较,差异有统计学意义(P<0.05);与HPLC法比较,差异无统计学意义(P>0.05)。本法批内、批间变异系数(CV)均<3.0%;与HPLC法呈良好相关性(r2=0.995 8);在5 min内均可达到反应终点;线性范围为0.20～28.00 mmol/L;血红蛋白<2.0 g/L、乳糜<2.2%、总胆红素<200μmol/L对本法的干扰误差<3%;参考范围为4.10～6.20 mmol/L(男)、4.04～6.15 mmol/L(女);最大吸收波长为595 nm。结论以HDAOS代替4-氯酚生成蓝色醌亚胺,能通过降低脂血、溶血、黄疸光谱吸收的方法消除脂血、溶血和黄疸的干扰,提高GOD法测定葡萄糖的准确性,其使用方法与原有GOD终点法相同。