基于葡萄糖/葡萄糖氧化酶/H_2O_2/L-酪氨酸/辣根过氧化物酶反应体系的荧光毛细分析法测定血糖

建立了葡萄糖(G)/葡萄糖氧化酶(GOD)/H2O2/L-酪氨酸/辣根过氧化物酶(HRP)新荧光反应新体系,并将此反应体系与荧光毛细分析法(FCA)结合,开发一种能够真正实现血糖测定的新葡萄糖酶荧光毛细分析法(GE-FCA)。经优选得到的新反应体系最佳条件为:GOD和HRP浓度均为2000U/L,L-酪氨酸浓度为1.0mmol/L,磷酸盐缓冲液的pH=8.5,反应温度为35℃,反应时间为20min。通过测定葡萄糖标准样品,得到GE-FCA法测定葡萄糖的线性范围是5.0～140μmol/L;相对标准偏差<4.0%;检出限为2.65μmol/L。本方法已成功用于临床血清样品中葡萄糖的测定,其回收率在98%～104%之间。GE-FCA荧光增强法操作简单,样品和试剂用量极少(9μL),线性响应范围宽、抗干扰能力强,易于普及推广。

葡萄糖氧化酶-过氧化物酶膜共固定化的研究

讨论了一种新型酶固定化技术 ,这种技术将葡萄氧化酶和过氧化物酶共同固定在同一载体——尼龙 6 6膜上 ,并制备出可检测血糖浓度的试纸 ,用于临床检验 .在固定过程中 ,酶浓度、染料浓度、固定温度、p H值、固定剂、干燥温度等因素的变化均会对固定结果产生影响 ,出现白斑、色块以及冲刷痕等现象 ,影响试纸的检测结果 .通过对固定剂配比的调整和固定程序的设计 。

葡萄糖氧化酶-过氧化物酶改良法的建立——血糖测定时间窗口的探讨

目的对小鼠血糖葡萄糖氧化酶-过氧化物酶(glucose oxidase-peroxide enzyme,GOD-POD)法进行改良。方法针对糖尿病模型大鼠的血糖测定,优化了影响测定结果的一些重要因素(如GOD-POD浓度、显色反应稳定时段、波长、线性范围等)。结果 (1)GOD-POD浓度的选择:当两者的浓度均为1040IU·ml-1,有一显色反应相对稳定的时段(室温下反应从90min至180min),此时样品光密度值(optical density,OD)的变异系数(coefficient of variation,CV)较小(0.846%±0.205%,n=3),可用作对较大样本血糖测定的时间窗口;(2)波长的选择:GOD-POD浓度均为1040 IU·ml-1时,550nm的测定灵敏度比505nm好;(3)线性范围:在葡萄糖浓度为3.75～480mg·dl-1范围内线性关系良好,最低检测值达3.75mg·dl-1。结论相对于原法,改良法适于糖尿病模型大鼠的血糖测定及降糖药物的效应观察。

葡萄糖氧化酶-过氧化物酶偶联体系葡萄糖分析

酶催化反应具有高效、快速、高选择性,在定量分析领域应用广泛.本文采用葡萄糖氧化酶-过氧化物酶偶联体系,用动力学方法对样品中葡萄糖含量进行分光光度测定,得到了较为满意的结果.

标本溶血对葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法测定血糖的影响

目的探讨采用葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法(GOD-POD法)测定血糖(Glu)时标本溶血对测定结果的影响及其干扰机制,以提高Glu检测结果的准确性。方法使用一次性真空分离胶采血管采集门诊30例成年患者的空腹静脉血,每个患者共采集2管,每管各3 mL,分别编号A管、B管。使A管血液自然凝固,作为非溶血组;用力震荡B管血液,人为造成标本溶血,使用全血细胞分析仪检测血红蛋白(Hb),确定其血清中Hb测定浓度为1~4 g/L,作为溶血组。将全部标本分离血清,采用GOD-POD法在生化仪中检测60份标本的Glu值,每份样本重复检测5次,取平均值进行对比。结果溶血组的Glu值较非溶血组明显降低(mmol/L:3.80±0.51比5.30±0.41,P<0.05)。结论标本溶血会使Glu测定值偏低,影响Glu测定的准确性,实际工作中应尽量避免使用溶血标本进行生化检测。临床工作者在采集血液标本时应严格按照规范操作,认真做好标本的采集、运送和分离工作,以防止标本溶血。

基于葡萄糖氧化酶-辣根过氧化物酶催化体系的葡萄糖SERS定量分析研究

葡萄糖氧化酶法(glucose oxidase,GOx)是生物体系以及葡萄糖检测中常用的方法,其中葡萄糖氧化酶可以专一地催化葡萄糖生成葡萄糖酸以及过氧化氢(H2O2)。葡萄糖氧化酶内部的黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)则是其主要的活性成分,在葡萄糖的催化氧化过程中起着电子传递的作用。传统的葡萄糖氧化酶法主要是通过借助辣根过氧化物酶(horse radish peroxidase,HRP)/TMB显色体系完成对葡萄糖的定量分析,即葡萄糖氧化酶可以特异地催化氧化葡萄糖,产生H2O2。在H2O2存在的体系中,辣根过氧化物酶可以将底物分子四甲基联苯胺(TMB)催化氧化。表面增强拉曼光谱(surface-enhanced Raman scattering,SERS)是一种超灵敏检测手段并且被广泛应用于生物检测中[1]。经研究发现,TMB分子具有很高的SERS活性,并且TMB分子经过催化反应之后,其SERS光谱发生明显的增强,我们以此实现葡萄糖的定量分析研究。

用铁（Ⅱ）－EGTA络合物代替辣根过氧化物酶荧光测定葡萄糖氧化酶

用铁（Ⅱ）－ＥＧＴＡ络合物代替辣根过氧化物酶荧光测定葡萄糖氧化酶李庆阁，许金钩，黄贤智，陈国珍（厦门大学化学系，厦门３６１００５）测定葡萄糖氧化酶（ＧＯＤ）的方法常用的有电化学法、分光光度法和荧光光度法￣［１］，其中最灵敏的荧光光度法须使用辣根过氧化...

干化学分析仪与全自动生化分析仪葡萄糖氧化酶法测定血糖的比对分析

目的探讨干化学法与全自动生化分析仪葡萄糖氧化酶法测定葡萄糖结果的可比性。方法根据美国临床和实验室标准研究院(CLSI)方法对比评价EP 9-A文件的要求,用两种检测系统即干化学法(Y)与全自动生化分析仪(X)葡萄糖氧化酶法各重复2次测定40例新鲜葡萄样品,做结果比对。结果两种检测系统回发方案:Y=1.042X-0.295,相关系数r=0.978,两系统的相关性良好。3个医学决定水平浓度(X c)下两系统间的比对试验总体符合临床要求,但在低值时不符合。两系统测定结果具有统计学差异(P<0.05),干化学法检测结果偏低。结论在测定低值血糖时要利用回归方程进行截距和斜率校准,使系统误差达到临床可接受标准。在室内质控结果不稳定时必须进行校准。干化学法仅适合于血糖的随机监测参考,而不能作为临床诊断的依据。在血糖仪检测结果接近临界值时,应以静脉血清(血浆)在生化分析仪上的检测结果为诊断参考依据。

酶法合成的葡萄糖氧化酶-纳米金复合物的直接电化学与生物传感

将NaAuCl4、葡萄糖氧化酶（GOx）和葡萄糖混合,借一步酶促反应制得吸附GOx的金纳米颗粒（Au NPs）,再通过滴干修饰法研制了Nafion/GOx-AuNPs修饰的玻碳（GC）电极,并考察了该酶电极上GOx的直接电化学和生物传感性能.这种酶法合成的GOx-AuNPs复合物有良好的酶直接电化学活性,也保持了GOx的生物活性,似可归因于酶法合成的纳米金更接近酶氧化还原活性中心的缘故.该酶电极在-0.4 V（vs.SCE）电位下,其稳态电流下降与葡萄糖浓度（0.5-4 mmol·L^-1）成正比,检测下限0.2μmol·L^-1.

己糖激酶法和葡萄糖氧化酶法测定血糖的比较

目的了解己糖激酶(HK)法和葡萄糖氧化酶(GOD-PAP)法测定血糖的性能。方法分别对两种方法进行了精密度试验、线性评价及方法对比试验。结果①精密度:HK法批内CV为0.95%,日间CV为2.15%;GOD-PAP法批内CV为1.02%,日间CV为1.75%。②线性:HK法为0.1￣28.0mmol/L,GOD-PAP法为0.1￣22.0mmol/L。③方法对比试验:以HK法为比较方法(Y),GOD-PAP法为试验方法(X),血糖的回归方程式为Y=1.053X+0.015,r=0.998。结论两种方法检测血糖的精密度、线性及方法对比试验均符合临床要求,适用于血糖的常规和自动化分析。

葡萄糖氧化酶抑制法检测食品中镉、锡、铅的残留

目前检测重金属使用的国标方法灵敏度高、特异性强，但存在仪器费用高等缺陷。为了建立快速、简便、只要比色即可测定镉、锡、铅的酶抑制法，选择葡萄糖氧化酶（GOD）-辣根过氧化物酶（POD）催化体系，优化了试验条件；利用金属离子对酶活的抑制作用，测定了重金属离子镉、锡、铅对葡萄糖氧化酶活力的影响。所测镉、锡、铅检出限分别为1．3，0．4，1．4μg／mL。研究了检测实际样品中镉、锡、铅的方法，加标回收率分别为92．7％～105．7％；标准差≤1．0％。

葡萄糖氧化酶—氧消耗速率法的方法学评价

目的 :葡萄糖氧化酶—氧消耗速率法 (GOD -O2 )和葡萄糖氧化酶—过氧化物酶法 (GOD -POD)测定葡萄糖的方法学比较。方法 :采用BeckmanCX9GOD -O2 法与ISPGOD -POD法进行比较 ,并对GOD -O2 法的重复性、线性试验、干扰实验、回收实验进行评价。结果 :GOD -O2 法 (Y)与GOD -POD法 (X)有很好的相关性 ,Y =1.0 30X - 1.16 8,r=0 .9995 ) ;线性可达 2 9.2mmol L ;批内CV <1.3% ,日间CV <1.7% ,总CV <2 .2 % ;回收率平均99.83% ;溶血、脂血、黄疸对测定无显著干扰。结论 :本法准确、快速、简便 。

细菌毒素氧化呈色法和过氧化物酶法检验病害猪肉的比较

细菌毒素氧化呈色法和过氧化物酶法都是检验病害猪肉的常规检验方法。采集病害猪肉和健康猪肉各30份,通过对健康猪肉和病死猪肉同时用过氧化物酶法和细菌内毒素呈色法进行检测,比较两种方法的准确性、精确度及适用性。结果表明,细菌毒素氧化呈色法和过氧化物酶法检验病害猪肉都有很高的检出率,达到了100%。检验市场上购买的健康猪肉时,过氧化物酶法优于细菌毒素氧化呈色法。

生物素-链霉亲和素-过氧化物酶法快速诊断呼吸道合胞病毒感染

目的：建立检测下呼吸道感染婴幼儿粘膜细胞呼吸道合胞病毒（RSV）抗原的方法。方法：以生物素标记兔抗RSV抗体，鼻咽部粘膜细胞涂片与该抗体作用后加链霉亲和素-过氧化物酶反应，二氨基联苯胺显色，显微镜下观察结果。结果：RSV抗原总阳性率为41．6％，临床典型和可疑病例抗原检出率分别为47．9％和44．9％，临床不典型者阳性率12．5％（X2=7．9，P＜0．05）。阳性标本中细胞着成棕色，易与阴性标本相区别。结论：本法简便、快速，具有一定敏感性和特异性，适合于基层推广应用。

简述葡萄糖氧化酶

本文介绍了葡萄糖氧化酶的一般性质、分离纯化方法、活力测定法和应用。

改良化学沉淀法和过氧化物酶法检测冠心病患者血清小而密低密度脂蛋白的方法学比较

目的 探讨改良化学沉淀法和过氧化物酶法检测冠心病患者血清小而密低密度脂蛋白(sdLDL)的方法学比较。方法 选取新疆医科大学第五附属医院2021年1—8月收治的冠心病患者82例,分别实施肝素镁沉淀法和过氧化物酶法,并比较肝素镁沉淀法和过氧化物酶法检测sdLDL-C的精密度、线性分析与sdLDL-C水平。结果 过氧化物酶法和肝素镁沉淀法检测sdLDL-C,批间、批内、总变异系数均<2.972%,精密度和线性良好。肝素镁沉淀法与过氧化物酶法均有良好的相关性,且呈正直线关系(P <0.05)。肝素镁沉淀法和过氧化物酶法测定sd LDL-C水平结果比较,差异无统计学意义(P> 0.05)。结论 肝素镁沉淀法和过氧化物酶法的相关性良好,对于冠心病患者血清sdLDL-C均有较好的检测效果,但过氧化物酶法更为快速、简便,有助于sdLDL检测标准化的实施。

应用辣根过氧化物酶法对鸡胃的脊神经感觉神经元定位的研究

用休主１．０～２．５ｋｇ的成年母鸡９只，将殊根过氧化物酶（ＨＲＰ）分别注入腺胃和肌胃后２～４ｄ，经心室灌流固定，取双侧颈、胸、腰丘各脊神经节，制成５０μｍ厚的连续冰冻切片．ＴＭＢ法反应呈色，明视野显微镜观察。结果发现，腺胃的脊神经感觉神经元标记细胞位于Ｔ＿１～Ｔ＿５脊神经节，峰值在Ｔ＿２脊神经节．肌胃的脊神经感觉神经元标记细胞位于Ｔ＿２～Ｔ＿６脊神经节，峰伍在Ｔ＿３脊神经节。腺胃和肌胃的脊神经感觉神经元在脊神经节中的分布节段和峰值，分别与其交感节后神经元在交感于中的分布节段和峰值相对应。

过氧化物酶法现场快速鉴定病死鸡肉的有效性

目前对病死鸡肉的检验检疫主要依赖于感官性状和病理变化的肉眼判断,有一定的主观性,亟需现场快速鉴定病死鸡肉的技术,以有效支撑基层动物卫生监督执法。本研究针对具有现场快速鉴定潜质的过氧化物酶法,验证了室温、冷藏和冷冻3种温度下,存放不同时间健康鸡肉(120份)和病死鸡肉(60份)样品中过氧化物酶的活性。结果显示:发生积血的病死鸡肉比正常屠宰的健康鸡肉显色更明显,病死鸡肉室温和冷藏状态下,不同时间节点显色时间多集中在4~8 s,而健康鸡肉显色时间多超过35 s或不显色;冷冻条件下,过氧化物酶会发生失活,但病死鸡肉过氧化物酶显色时间总体还是在30 s以内,且3种温度下,存放不同时间的健康鸡肉与病死鸡肉样品的显色时间差异显著(P <0.01)。以显色时间等于或低于30 s作为判定病死鸡肉阳性的时间节点,发现过氧化物酶法对室温和冷藏状态鸡肉鉴定的敏感性均高于95%,特异性也在95%左右,对冷冻状态鸡肉的有效鉴定率也高于80%。可见过氧化物酶法可以用于不同温度、不同存放时间的病死鸡肉样品的现场快速有效鉴定。

ALT偶联丙酮酸氧化酶——过氧化物酶法在血站的应用

目的 在本地区对献血员ALT检测与赖氏法作一比较，选择一较好的方法，从而进一步保证献血员的健康，进一步减少和杜绝输血后传染病的传播，充分保证血液质量。方法 连续对1800人次献血人员(包括无偿献血及应急献血人员)用本法和赖氏法平行作ALT检测，并作统计分析。结果 本法与赖氏法结果一致者1755例，占被检人数的97．5％，结果不一致者45例。且45例结果不一致者有41例均为本法检测值低于赖氏法，其中有33例为50～100u／1者，有9例为25-100u／1者，只有3例为25u／1以下者，考虑到血站筛选查献血员以25u／1为临界值，并不要求ALT>25u／1者的确切值，故本实验未对其结果不一致者作进一步的确诊比较。结论 本法与赖氏法比较结果无显著差别，省时省力，原始记录完善，优于赖氏法。