海洋杆菌糖基转移酶Agt突变体的制备及其在单葡萄糖甘油二酯催化合成中的应用

甘油糖脂由糖与甘油脂通过糖苷键连接而成,具有抗肿瘤、抗病毒和抗炎等多种生物活性,已成为当前研究的热点。目前获得甘油糖脂的方法包括植物提取法及化学合成法。植物提取法提取率及纯度较低;化学合成法对反应条件和分离设备要求高,产品不易分离,产生的废液污染环境。该研究采用基因工程方法构建海洋杆菌Candidatus pelagibacter sp.HTCC7211中的糖基转移酶Agt高活性突变体重组质粒,实现在大肠杆菌E.coli BL21-CodonPlus(DE3)-RIL中的表达,进一步研究其酶活性,优化催化合成单葡萄糖甘油二酯的最佳反应条件及其提取方法。结果表明:构建的突变体T257S可将二磷酸尿苷-葡萄糖(uridine diphosphate gluscose,UDP-Glu)和甘油二酯高效地转化为单葡萄糖甘油二酯,其催化效率是野生型合成酶Agt的1.56倍;采用环己烷/乙酸乙酯法提取单葡萄糖甘油二酯,最高提取率达84.7%;在最佳反应条件酶浓度8 U/mL、UDP-Glu质量浓度500 mg/L、温度35℃和pH 8.5条件下,转化率和纯度分别达68.5%和93.8%。因此利用突变体T257S制备单葡萄糖甘油二酯具有转化率高、产物纯度高和合成步骤较少等优势,具有良好的工业应用前景。

具有纤溶促进作用的低分子天然化合物的研究

纤溶酶原和尿激酶前体的相互活化作用在纤溶的开始和加速上发挥着重要的作用。在对约700种植物的提取液进行筛选的基础上,从褐藻(Sargassumfulvellum)的三氯甲烷和甲醇的混合提取液中分离到了具有促进纤溶酶原和尿激酶前体相互活化作用的天然生理活性化合物葡萄糖甘油二酯。发现葡萄糖甘油二酯作用于尿激酶前体和纤溶酶原体系中的尿激酶前体,它提高了尿激酶前体的内因性尿激酶型纤溶酶原激活剂的作用。从蛋白质内部荧光的实验结果显示出尿激酶前体的内因性活性变化与葡萄糖甘油二酯引导的尿激酶前体的立体构型有关。从体外实验确认了葡萄糖甘油二酯的血栓纤溶促进作用。

POGDG对小鼠血脂和血糖含量的影响

目的:研究纤溶活性化合物1-棕榈酰-2-油酰-3-O-α-D-吡喃葡萄糖基甘油(POGDG)对正常小鼠动脉硬化相关指标的影响。方法:将小鼠随机分为对照组、处理组和阳性对照组,对照组经口投予生理盐水,处理组每天经口投予30、60、90mg/(kg·d)不同剂量的POGDG,阳性对照组投予100mg/(kg·d)芦丁,5周后,取小鼠血液测定总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、血糖(Glu)和血浆蛋白的含量,测体质量变化。结果:与对照组相比,POGDG处理组血液的TG和Glu的含量显著降低,HDL-C含量显著升高(P≤0.05),并且POGDG处理组血液的HDL-C、Glu、TC的含量接近于阳性对照组的含量。结论:纤溶活性化合物POGDG具有降低动脉硬化和抑制体质量增加的作用。

龙须菜化学成分研究

目的:对龙须菜Gracilaria lemaneiformis的化学成分进行研究。方法采用正相硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱等方法进行分离纯化,运用波谱分析的方法鉴定化合物的结构。结果分离并鉴定了9个化合物:棕榈酸(1)、1,3-双棕榈酸甘油酯(2)、1-棕榈酸单甘油酯(3)、尿嘧啶(4)、腺嘌呤核苷(5)、2α-氧杂-2-氧-5α-羟基-3,4-二失碳胆甾烷(6)、1-O-β-D-半乳糖-(6→1)-α-D-半乳糖-2,3-O-十六烷酸甘油二酯(7)、1-O-α-D-吡喃葡萄糖-2,3-O-十六烷酸甘油二酯(8)、β-谷甾醇(9)。结论以上化合物均为首次从该植物中分离得到。