流体剪应力对人脐静脉内皮细胞葡萄糖调节蛋白78和C/EBP同源蛋白表达的影响

目的探索流体剪应力对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和C/EBP同源蛋白(CHOP)表达的影响。方法以HUVECs作为实验细胞,设计并构建流体动力学模拟实验系统,控制流体动力学模拟实验系统中灌流液的流速,以实现对实验细胞施加不同的流体剪应力。按实验细胞在实验系统中所承受的不同流体剪应力,将实验细胞分为低剪应力组(A组;0.4 Pa)、中剪应力组(B组;0.8 Pa)和高剪应力组(C组;1.2 Pa)。每组HUVECs包含3个细胞玻片,每个玻片经实验系统灌流液反复循环流经12 h。采用蛋白质印迹法对各组细胞中GRP78和CHOP蛋白水平进行检测,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应技术测定各组细胞GRP78和CHOP蛋白及其信使RNA(mRNA)相对水平。应用GraphPad Prism 8.0软件对数据进行统计学分析。结果(1)A、B、C组HUVECs中GRP78蛋白相对表达水平分别为1.33±0.46、0.93±0.34、0.64±0.30;多组间比较差异有统计学意义(F=36.17,P<0.05)。A组GRP78蛋白相对表达水平高于B组、C组(均P<0.01),B组GRP78蛋白相对表达水平高于C组(P=0.0013)。3组HUVECs中CHOP蛋白相对表达水平分别为:A组1.29±0.38,B组0.90±0.34,C组0.59±0.29;多组间比较差异有统计学意义(F=41.27,P<0.05)。A组CHOP蛋白相对表达水平高于B组、C组(均P<0.01),B组CHOP蛋白相对表达水平高于C组(P=0.0004)。(2)A、B、C组HUVECs中GRP78 mRNA相对表达水平分别为18.3±3.4、11.3±1.8、5.4±2.2;多组间比较差异有统计学意义(F=189.20,P<0.05)。A组GRP78 mRNA相对表达水平高于B组、C组(均P<0.01),B组GRP78 mRNA相对表达水平高于C组(P<0.01)。3组HUVECs中CHOP mRNA相对表达水平分别为:A组20.4±3.8,B组14.2±2.1,C组7.8±1.3;多组间比较差异有统计学意义(F=171.80,P<0.05)。A组CHOP mRNA相对表达水平高于B组、C组(均P<0.01),B组CHOP mRNA相对表达水平高于C组(P<0.01)。结论低流体剪应力可能增加HUVECs中GRP78、CHOP的蛋白及其mRNA表达水平。

血清葡萄糖调节蛋白78在多发性骨髓瘤病人中的表达及其预后意义

目的探讨葡萄糖调节蛋白78(GRP78)在初诊多发性骨髓瘤(MM)病人血清中的表达,及其对病人治疗反应及预后的预测价值。方法选择2017年1月至2020年12月大竹县人民医院收治的78例MM病人为MM组,同期该院门诊就诊的62例健康成人作为对照组。收集所有参与者的外周静脉血样本,使用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测血清中GRP78的表达,分析GRP78表达与临床特征及治疗反应的关系。通过受试者操作特征曲线(ROC曲线)确定血清GRP78预测MM病人预后的最佳临界值,采用Kaplan-Meier曲线与Cox比例风险模型评估血清GRP78表达与MM病人预后的关系。结果MM病人的血清GRP78表达水平显著高于对照组(Z=4.12,,P<0.001),中位表达量分别为2.49(1.23,5.13)mg/L和1.29(0.75,2.14)mg/L。与多发性骨髓瘤国际预后分期(ISS)Ⅰ、Ⅱ期病人2.05(1.09,4.40)mg/L相比,血清GRP78表达在ISSⅢ期病人2.99(1.66,5.63)mg/L显著升高(Z=2.18,P=0.030)。然而,血清GRP78表达与接受硼替佐米诱导方案的MM病人的治疗反应无关。ROC曲线显示血清GRP78预测总体生存(OS)的最佳临界值为1.68 mg/L,曲线下面积(AUC)为0.70,95%CI:(0.58,0.81),灵敏度与特异度分别为78.7%和58.4%。Kaplan-Meier曲线表明GRP78高表达(≤1.68 mg/L,n=50)组生存期明显短于低表达组(>1.68 mg/L,n=28),差异有统计学意义(χ^(2)=10.99,P=0.001)。单、多因素Cox分析揭示ISS分期[HR=2.04,95%CI:(1.11,3.76),P=0.022]、治疗反应[HR=2.42,95%CI:(1.28,4.58),P=0.007]和血清GRP78表达[HR=2.96,95%CI:(1.43,6.12),P=0.003]是MM病人的独立预后因素。结论GRP78在MM病人血清中呈现异常高表达,且与ISS分期及不良预后有关,或许是MM诊断与预后风险分层的重要标志物。

过表达葡萄糖调节蛋白78人乳腺癌细胞系HS578T、MDA-MB-231的构建

目的构建过表达内质网应激标志蛋白葡萄糖调节蛋白78(Glucose-regulated protein 78,GRP78)的人乳腺癌细胞系HS578T、MDA-MB-231,为探讨GRP78在乳腺癌发生发展中的作用机制提供基础。方法采用分子克隆技术构建表达GRP78的慢病毒载体pCDH-CMV-GRP78-HA-EF1-Puro质粒,采用PCR法扩增质粒,后使用EcoRⅠ、NotⅠ限制性内切酶切割质粒,对酶切产物进行测序鉴定,成功构建pCDH-CMV-GRP78-HA-EF1-Puro质粒。取对数生长期293FT细胞系(克隆分离株),在培养皿中加入pCDH-CMV-GRP78-HA-EF1-Puro混合液,培养48 h收集含GRP78慢病毒颗粒的上清液,保存备用。另取对数生长期人乳腺癌细胞系HS578T及MDA-MB-231,置于含GRP78慢病毒颗粒上清液的培养基中培养,培养48 h时在培养基中加入1∶500稀释嘌呤霉素,筛选GRP78过表达的HS578T、MDA-MB-231细胞系。加入嘌呤霉素培养48 h采用Western Blotting法检测HS578T、MDA-MB-231细胞GRP78。采用激光共聚焦显微镜对HS578T、MDA-MB-231细胞中GRP78蛋白进行定位。结果构建表达GRP78的慢病毒载体pCDH-CMV-GRP78-HA-EF1-Puro质粒。GRP78过表达的HS578T、MDA-MB-231细胞系在78 kD左右可见明显GPR78蛋白电泳条带。HS578T细胞系中存在GRP78蛋白表达,主要分布在细胞质中。结论成功构建GRP78过表达的MDA-MB-231、HS578T细胞系,GRP78主要表达于细胞质中。

外周血血小板内皮细胞黏附分子-1、葡萄糖调节蛋白78水平与冠心病患者经皮冠状动脉介入术后支架内再狭窄的关系

目的探讨外周血血小板内皮细胞黏附分子-1(PECAM-1)和葡萄糖调节蛋白78(GRP78)水平与冠心病患者经皮冠状动脉介入(PCI)术后支架内再狭窄(ISR)的关系。方法选取2020年1月至2021年12月期间于邯郸市第二医院确诊为冠心病并行PCI治疗的165例患者,根据患者术后1年支架内狭窄程度分为ISR组37例和非ISR组128例。收集患者术后1个月超敏C反应蛋白(hs-CRP)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测患者术后1个月外周血PECAM-1和GRP78水平。Spearman相关分析法分析外周血PECAM-1和GRP78水平与患者PCI术后冠状动脉狭窄支数和Gensini积分的相关性;多因素Logistic回归分析影响PCI术后发生ISR的因素。结果ISR组与非ISR组患者支架数量、支架长度、支架直径、hs-CRP水平、糖尿病史比较,差异有统计学意义(t/χ2=3.334、3.575、4.612、14.445、7.885,P<0.01);ISR组患者外周血PECAM-1和GRP78表达水平均较非ISR组高,差异有统计学意义(t=17.764、19.422,P<0.01);外周血PECAM-1和GRP78表达水平与ISR患者狭窄支数、Gensini积分均呈正相关(r=0.453、0.501、0.412、0.484,P<0.01);PECAM-1、GRP78、hs-CRP、糖尿病史、支架直径是冠心病患者PCI术后发生ISR的影响因素(OR=1.374、1.381、1.369、1.342、0.894,P<0.05)。结论外周血PECAM-1和GRP78水平在PCI术后发生ISR的冠心病患者中升高,两者均为冠心病患者PCI术后发生ISR的影响因素。

葡萄糖调节蛋白75在糖尿病肾病发生、发展机制中的作用研究进展

糖尿病肾病(DN)是引起终末期肾功能衰竭的主要病因之一,且会显著增加心脑血管疾病的发病率和病死率~([1])。根据国际糖尿病联合会预测,到2045年全世界糖尿病患者人数将达到7亿人,其中30%~40%患者将发展为DN~([2])。

葡萄糖调节蛋白78在原发性肝癌患者癌组织中表达及其与预后的关系

目的探讨葡萄糖调节蛋白78在原发性肝癌(PHC)患者癌组织中表达及其与预后的关系。方法96例PHC患者癌组织(PHC)组和45例正常肝脏组织(对照组)的石蜡包埋标本,采用免疫组化法(IHC)检测GRP78的表达情况。另收集3例PHC患者的癌组织和癌旁组织及3例对照组的正常肝脏组织,采用Western印迹检测癌组织、癌旁组织和正常肝脏组织中GRP78蛋白表达水平的差异。根据GRP78免疫组化结果差异,将96例PHC患者分为GRP78高表达组和低表达组。采用独立样本t检验、χ^(2)检验及方差分析,PHC患者术后生存的影响因素采用Cox风险比例模型分析,Kaplan-Meier生存分析评估PHC患者癌组织中GRP78表达水平与患者5年生存情况的关系。结果PHC组GRP78高表达73例,低表达23例;对照组GRP78高表达9例,低表达36例。与对照组比较,PHC组GRP78高表达率显著升高(P<0.001)。PHC患者癌组织中GRP78表达水平与肿瘤直径、肿瘤细胞分化程度、微血管侵犯和美国癌症联合委员会(AJCC)分期显著相关,随着肿瘤体积的增大及肿瘤细胞分化程度的降低,PHC患者癌组织中GRP78高表达率逐渐升高(P<0.05),GRP78在有微血管侵犯及Ⅲ~Ⅳ期病例中的高表达率显著高于无微血管侵犯和Ⅰ~Ⅱ期的病例组(P<0.05)。Western印迹结果显示,PHC患者癌组织和癌旁组织及对照组正常肝脏组织中GRP78蛋白表达水平有显著差异(P=0.010);与正常肝脏组织相比,PHC患者癌组织和癌旁组织中GRP78蛋白表达水平显著升高(P<0.05),与癌旁组织比较,PHC患者癌组织中GRP78蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。单因素分析结果显示,PHC患者5年生存状态与肿瘤直径、肿瘤细胞分化程度、微血管侵犯、AJCC分期和GRP78表达水平有关(P<0.05);多因素分析结果显示微血管侵犯、AJCC分期和GRP78表达水平是影响PHC患者预后的独立危险因素(P<0.001)。GRP78高表达组5年生存率显著低于GRP78低表达组(Log Rank=4.951,P=0.026)。结论PHC患者癌组织中GRP78表达水平显著升高,且GRP78高表达是患者预后的独立危险因素之一,GRP78有可能作为PHC治疗的潜在靶点。

葡萄糖调节蛋白94和转化生长因子-β1与房颤患者预后的相关性

目的探讨葡萄糖调节蛋白94(glucose-regulated protein 94,GRP94)、转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)水平对房颤患者消融术后远期复发事件的预测价值。方法选择因房颤行射频消融术的住院患者共202例,统一归于房颤组,再依据房颤发生及持续的时间进一步分为阵发性房颤组(n=132)和持续性房颤组(n=70);另选择窦性心律且既往无房颤心律的健康体检者作为对照组(n=55)。通过酶联免疫吸附试验测定患者的血清GRP94及TGF-β1水平,并收集基线资料。出院后以门诊或电话形式对房颤患者进行随访,利用受试者工作特征曲线和Kaplan-Meier生存分析评估血清GRP94、TGF-β1水平对房颤患者消融术后远期复发事件的预测价值。结果在对照组、阵发性房颤组、持续性房颤组中,血清GRP94及TGF-β1水平依次升高。二元Logistic回归分析提示,血清TGF-β1、GRP94和体重指数是房颤发生的独立危险因素。Spearman相关性分析显示,在房颤患者血清中GRP94和TGF-β1水平呈正相关。复发组的TGF-β1高于非复发组,GRP94低于非复发组。二元Logistic回归分析表明,TGF-β1是房颤术后复发的独立危险因素,GRP94是房颤复发的独立保护因素。Kaplan-Meier曲线分析显示,GRP94高水平、TGF-β1低水平的房颤患者消融术后复发的风险低,且未复发时间更长。结论GRP94及TGF-β1水平与房颤密切相关,可能为房颤患者消融术后复发的早期识别、诊断及预防提供依据。

葡萄糖调节蛋白78表达与非小细胞肺癌临床病理特征相关性Meta分析

目的:应用Meta分析探讨葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的表达与非小细胞肺癌(NSCLC)临床病理学特征的相关性。方法:检索考克兰图书馆(Cochrane Library)、中国知网(CNKI)、中国生物医学文献服务系统(Sino Med)、维普(VIP)、万方(Wanfang Data)、Pub Med数据库、Embase数据库中关于GRP78的表达与非小细胞肺癌临床病理学特征的相关性文献,根据纳入及排除标准筛选文献。采用Rev Man5.4和Stata SE12.0软件分析纳入文献资料中GRP78蛋白的表达与非小细胞肺癌的年龄、性别、分化程度、淋巴结转移、临床分期及病理类型的相关性。结果:纳入的11篇文献中,将共计1177例非小细胞肺癌患者样本进行分析。结果显示:GRP78在非小细胞肺癌组织中的表达明显高于癌旁正常组织[OR=8.49,95%CI(3.50,20.59),Z=4.73,P<0.00001];GRP78的高表达与非小细胞肺癌组织低分化[OR=2.75,95%CI(1.69,2.37),Z=2.37,P=0.02]、Ⅲ-Ⅳ期(TNM分期)[OR=0.37,95%CI(0.25,0.55),P<0.00001]、淋巴结转移[OR=0.65,95%CI(0.45,0.94),Z=2.30,P=0.02]有统计学意义;GRP78的表达与非小细胞肺癌的病理类型[OR=1.19,95%CI(0.86,1.65),Z=1.08,P=0.28]无统计学意义;GRP78的表达在不同性别[OR=1.02,95%CI(0.77,1.35),Z=0.11,P=0.91]和不同年龄段[OR=1.03,95%CI(0.57,1.88),Z=0.1,P=0.92]的非小细胞肺癌患者中的表达无统计学差异。结论:GRP78的高表达与非小细胞肺癌患者的临床病理特征密切相关,并且参与非小细胞肺癌的发生和发展。

中医药干预葡萄糖调节蛋白78(GRP78)表达在糖尿病周围神经细胞凋亡的实验研究进展

糖尿病周围神经病变是威胁糖尿病患者健康的重要隐患。在多民族成人2型糖尿病的一项INTERPRET-DD研究中,该病的总体患病率为26.71%[1];据统计,2017年世界范围内糖尿病患者大约有4.51亿,预计到2045年被确诊患有糖尿病的人将增长到6.93亿[2]。

胃癌中葡萄糖调节蛋白78和葡萄糖调节蛋白94表达的临床意义及与预后的相关性

目的确定葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)和葡萄糖调节蛋白94(glucose-regulated protein 94,GRP94)与胃癌(gastric cancer,GC)临床病理特征及预后的相关性。方法应用Western blotting和免疫组织化学方法检测GC和切缘组织中GRP78和GRP94的表达;Kaplan-Meier或卡方检验GRP78、GRP94和临床病理资料与GC术后整体生存期相关性。结果 GRP78和GRP94蛋白主要表达于胃癌细胞的胞质及胞膜,其阳性表达与淋巴结转移、TNM分期呈负相关,与分化程度正相关(P<0.05);GRP78、GRP94高表达及低表达GC患者术后平均生存时间分别为(23.51±2.32)个月和(37.54±3.24)个月、(21.31±1.46)个月和(40.02±2.19)个月,5年整体生存率分别为21.23%和41.42%、20.73%和43.86%(log-rank test,P<0.01),TNM分期、GRP78和GRP94是影响GC预后的独立因素。结论 GRP78和GRP94高表达可能是GC预后不良的分子标志物之一。

葡萄糖调节蛋白78在大鼠非酒精性脂肪性肝炎中的表达及意义

目的观察高脂饮食诱导大鼠非酒精性脂肪性肝炎(nonalcoholic steatohepatitis,NASH)过程中内质网应激标志物葡萄糖调节蛋白78的表达变化,探讨内质网应激在NASH发病机制中的作用。方法建立大鼠高脂饮食诱导NASH模型,检测血清ALT、AST、FFA、TG和肝组织MDA的变化,用RT-PCR与Western blot方法检测NASH形成过程中肝组织GRP78在基因和蛋白水平的表达变化。结果NASH组大鼠血清ALT、AST、FFA、TG和肝组织MDA水平均较对照组有不同程度的升高。肝组织GRP78基因和蛋白表达也随NASH加重而增强,16周时升高最为显著(P<0.01)。结论高脂饮食可诱导GRP78表达增强,启动内质网应激,导致脂质异常沉积,其可能与NASH的发病机制密切相关。

四氯化碳诱导性肝硬化大鼠肝组织葡萄糖调节蛋白78表达的研究

目的研究四氯化碳(CCl4)诱导性肝硬化大鼠肝组织内葡萄糖调节蛋白78(GRP78)表达的变化。方法将健康雄性Wistar大鼠随机分为对照组(n=5)和肝硬化组(n=5),对照组皮下注射植物油0.12ml/100g体重,肝硬化组以0.3ml/100g体重皮下注射60%CCl4植物油。在实验第21周的第1d杀死鼠,右心室取血检测肝功能指标。鼠肝中叶取材,石蜡切片行苏木精-伊红(HE)染色和天狼猩红组织化学染色,光镜观察形态学改变,行GRP78免疫组织化学显色,无菌下取肝组织行Western blotting及RT-PCR检测肝组织GRP78的表达。结果肝硬化组的血清ALT含量(278.2±88.42)明显高于对照组(154.8±9.94,t=3.10,P<0.05);ALB含量(1.68±0.62)明显低于对照组(3.02±1.96,t=2.62,P<0.05)。对照组肝小叶结构和肝细胞状态正常,仅在中央静脉及汇管区可见少量胶原纤维。20周肝硬化组的肝细胞脂肪变性明显,胶原纤维大量增生,假小叶形成。GRP78免疫组织化学呈色显示,肝硬化组肝组织中阳性细胞数明显多于对照组,棕黄色着色定位于细胞质中。Western blotting和RT-PCR显示肝硬化组肝组织GRP78的表达明显增强。结论在CCl4诱导性肝硬化的肝组织中,GRP78表达明显增强,这可能与肝细胞的内质网应激有关。

糖尿病肾病肾组织足细胞损伤与葡萄糖调节蛋白78表达及蛋白尿间的相关性

目的研究糖尿病肾病(DN)患者肾组织足细胞损伤和葡萄糖调节蛋白78(GRP78)及尿蛋白量之间的关系。方法回顾性分析48例经肾活检确诊为DN患者的临床资料,根据尿蛋白量将患者分为>3.5 g/d组(n=31)和<3.5 g/d组(n=17)。对肾组织行威廉姆斯肿瘤蛋白-1(WT-1)免疫组织化学染色,冰冻肾组织行synap-topodin、GRP78免疫荧光双染色,在激光共聚焦显微镜下观察。结果尿蛋白量>3.5 g/d组的足细胞密度为0.10个/μm2,明显低于尿蛋白量<3.5 g/d组的0.15个/μm2(P=0.003),足细胞密度与尿蛋白量呈负显著相关(P=0.005)。肾小球Synaptopodin及GRP78表达呈线样或颗粒状沿基底膜排列,尿蛋白量与synaptopodin(P=0.004)和GRP78(P=0.001)表达具有显著负相关。结论随着尿蛋白量增加,DN患者的足细胞损伤程度随之加重,伴有内质网应激适应性调节能力下降。

葡萄糖调节蛋白GRP78和GRP94在小鼠脑发育过程中的差异表达

为探讨葡萄糖调节蛋白GRP78和GRP94在小鼠脑发育过程中的生物学意义,利用蛋白质免疫印迹、免疫荧光及RNA印迹技术,检测了发育不同时期小鼠脑组织中GRP78、GRP94的表达及分布情况.结果显示:小鼠脑发育过程中GRP78、GRP94的表达在时间和空间上呈现出显著差异,在脑发育的早中期GRP78表达水平高于GRP94,随发育的进程GRP78不断下降而GRP94逐渐升高,至胚胎发育晚期GRP94表达水平高于GRP78.在E16.5的不同脑区,GRP78的表达呈现出从端脑到后脑逐渐递减的“浓度梯度”分布,而GRP94在不同脑区中表达相同.小鼠出生后,二者作为应激蛋白在脑组织中的表达没有明显的差异性.免疫荧光结果显示,GRP78和GRP94在大脑组织中的分布基本相同,神经细胞和神经胶质细胞的细胞质均有分布.这些观察得到的结果提示,GRP78和GRP94与神经细胞分化和脑的形态建成有关,它们分别在脑发育的不同时期起作用.

银杏叶提取物对帕金森患者血清黑质DMT1、葡萄糖调节蛋白75及神经功能的影响研究

目的探讨银杏叶提取物对帕金森患者血清黑质二价金属离子转运蛋白(divalent metal transporter1,DMT1)、葡萄糖调节蛋白75(glucose regulated protein 75,grp75)及神经功能的影响。方法帕金森患者38例,根据用药不同分为对照组和实验组,每组各19例,对照组患者给予多巴丝肼片,实验组在对照组的基础上给予银杏叶提取物片,治疗连续4周。治疗结束后,对所有患者黑质DMT1、grp75及认知功能进行检测。结果与治疗前相比,治疗后2组患者的黑质DMT1水平较低(P<0.05);与对照组相比,实验组患者治疗后黑质DMT1水平较低(P<0.05)。与治疗前相比,治疗后2组患者的grp75水平较高(P<0.05),与对照组相比,实验组患者治疗后grp75水平较高(P<0.05)。与治疗前相比,治疗后2组患者的Mo CA评分较高(P<0.05),HAMD评分较低(P<0.05);与对照组相比,实验组患者治疗后Mo CA评分较高(P<0.05),HAMD评分较低(P<0.05)。结论银杏叶提取物能够显著降低帕金森患者黑质DMT1水平,升高grp75水平,改善认知功能。

葡萄糖调节蛋白78研究进展

葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78kD,GRP78)又称免疫球蛋白重链结合蛋白(immunoglobulin heavy chain binding protein,Bip),是位于内质网上重要的分子伴侣,属热休克蛋白70家族的一员,GRP78分子及其DNA分子序列结构在许多生物物种中高度保守。GRP78在内质网中参与阻止内质网新生肽聚集、调节内质网钙稳态、抗内质网相关性细胞凋亡,以及启动未折叠蛋白反应等细胞生命过程。GRP78基因启动子上存在内质网应激反应元件(ERSE)和cAMP反应元件(CRE)等特殊的顺式作用元件,特异性转录因子ATF6等与GRP78启动子上顺式作用元件发生动态结合,从而调节GRP78基础性或诱导性转录表达。近年来发现,GRP78与脂肪肝、肿瘤和神经系统等疾病的发生发展密切相关,GRP78生物学功能的研究已经引起生物学家们的广泛重视。

小柴胡汤对大鼠肝细胞脂肪变性及葡萄糖调节蛋白表达的影响

目的探讨小柴胡汤防治大鼠肝细胞脂肪变性的疗效及作用机制。方法健康Wister大鼠分为正常组、模型组及小柴胡汤低、高剂量组和东宝肝泰组,除正常组以外,其他各组采用四氯化碳联合高脂饮食诱导大鼠脂肪肝模型,各组大鼠给药干预4周后,采用HE染色观察肝组织病理变化,采用全自动生化仪及分光光度计测定血清中天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)及肝组织中胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)的含量,采用RT-PCR和Western blot检测肝组织中葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的表达。结果小柴胡汤低、高剂量组的肝指数、血清ALT、AST水平及肝组织中TC、TG含量较模型组明显降低(P<0.05);病理HE染色显示,小柴胡汤组肝脂肪变性程度较模型组明显减轻;RT-PCR和Western blot检测结果表明,小柴胡汤组肝组织中GRP78的表达显著低于模型组。结论小柴胡汤具有抑制大鼠肝细胞脂肪变性的作用,其作用机制可能与内质网应激有关。

siRNA沉默葡萄糖调节蛋白78可增强乳腺癌细胞对顺铂的敏感性

目的探讨siRNA沉默葡萄糖调节蛋白78(GRP78)增强顺铂对乳腺癌细胞凋亡的敏感性,以期为乳腺癌的临床治疗提供新的靶点。方法 MTT法检测不同浓度(0、1、2、4、8、16μmol/L)顺铂对乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖抑制作用;PI/AnnexinV双染检测顺铂(8μmol/L)对siRNA转染沉默GRP78乳腺癌细胞MDA-MB-231凋亡的影响,同时将未转染和转染空质粒乳腺癌细胞MDA-MB-231作为空白和阴性对照;Western blot检测顺铂(8μmol/L)处理乳腺癌细胞MDA-MB-231不同时间(0、6、16、24 h)GRP78的表达以及siRNA转染沉默GRP78乳腺癌细胞MDA-MB-231中GRP78的表达。结果 8μmol/L顺铂作用于乳腺癌细胞MDA-MB-231 24、48、72 h细胞存活率分别为83.13%、54.22%、35.79%,但24 h细胞凋亡率仅为10.8%。将GRP78沉默后,细胞的凋亡率为24.6%,沉默GRP78并合用顺铂进行刺激,细胞的凋亡率为48.9%,明显高于单用顺铂组。用顺铂刺激乳腺癌细胞MDA-MB-231 GRP78表达先上调后有减弱趋势,而siRNA转染沉默GRP78后,GRP78表达明显下降。结论抑制GRP78的表达可以增加乳腺癌细胞的凋亡率,为乳腺癌的临床治疗提供了新的靶点。

左归降糖益肾方对MKR糖尿病肾病小鼠足细胞葡萄糖调节蛋白78、C/EBP同源蛋白表达的影响

目的观察内质网应激相关分子葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、C/EBP同源蛋白(CHOP)在MKR转基因糖尿病肾病(DN)小鼠足细胞的特异性表达及左归降糖益肾方的干预作用。方法以8周龄MKR小鼠为研究对象,随机分为空白组、模型组、左归降糖益肾方组、4-苯基丁酸组、格列喹酮片+贝那普利组,以C57野生鼠为正常组,每组10只。采用高脂喂养加单肾切除复制DN模型,各给药组予相应药物灌胃30 d。采用电化学法观察小鼠空腹血糖(FBG),ELISA测定尿微量白蛋白(Um Alb),RT-PCR及Western blot检测GRP78、CHOP基因和蛋白表达,电镜观察足细胞形态结构。结果与空白组比较,模型组FBG、Um Alb明显升高(P<0.01),足细胞GRP78基因及蛋白表达明显下调(P<0.01),CHOP基因及蛋白表达明显上调(P<0.01);与模型组比较,各给药组FBG、Um Alb明显降低(P<0.01),左归降糖益肾方组、4-苯基丁酸组GRP78基因及蛋白表达明显上调、CHOP基因及蛋白表达明显下调(P<0.01)。电镜观察结果显示,各给药组小鼠肾小球足细胞结构、数量及密度较模型组明显改善。结论左归降糖益肾方能改善内质网应激介导的足细胞损伤,延缓DN进展。

葡萄糖调节蛋白75的表达特性

目的 研究不同条件下葡萄糖调节蛋白 75基因的表达情况。方法 用多组织尼龙膜 (multipletissuenylon ,MTN)Northern杂交显示 grp75在组织中的表达情况 ,用Northern杂交方法研究其在缺糖、氧化磷酸化阻滞剂叠氮钠、Ca2 + 增强剂A2 3187处理后的表达情况。结果 grp75在多组织中都有表达 ,且表达量大致相同 ,在缺糖培养的情况下 ,细胞的 grp75基因明显呈上调表达。高浓度的叠氮钠能够使grp75基因表达大幅度上调 ,A2 3187使grp75的表达量增加。 结论 grp75基因在细胞中有构成性表达 ,能够在多种组织的细胞中发挥作用 ,grp75基因的表达量和细胞自身的能量代谢有关 ,为 grp75基因对细胞缺糖保护提供了证据 ;在grp75表达与调控过程中 ,Ca2 +