西维来司钠对COPD大鼠GRP78/PERK/CHOP信号通路及气道高分泌的影响

目的探究西维来司钠对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠葡萄糖调节蛋白78/蛋白激酶R样内质网激酶/CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白(GRP78/PERK/CHOP)信号通路及气道高分泌的影响。方法采用香烟烟熏联合脂多糖(LPS)气管滴注制备COPD大鼠模型。成模大鼠随机分为COPD组、西维来司钠干预组(低、中、高剂量),另取正常饲养大鼠为对照组(NC组),每组12只,西维来司钠低、中、高剂量组分别尾静脉注射西维来司钠2.5 mg/kg、5.0 mg/kg、10.0 mg/kg,NC组、COPD组注射等量生理盐水,每天2次,连续干预21 d。检测大鼠肺功能指标0.1 s用力呼气量(FEV0.1)、用力肺活量(FVC)水平,采用原位末端标记法(TUNEL)检测大鼠肺泡上皮细胞凋亡情况,显微镜观察大鼠肺组织病理学改变,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测大鼠肺组织黏蛋白5AC(MUC5AC)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)mRNA表达水平,蛋白免疫印迹(Western blot)法检测大鼠肺组织MUC5AC、GRP78、PERK、CHOP蛋白表达量。结果NC组大鼠肺泡组织结构完整,无明显病理改变;COPD组大鼠肺组织支气管壁增高,肺泡组织壁变薄,纤毛脱落、倒伏明显,有大量炎性细胞浸润;西维来司钠各干预组大鼠肺组织病理改变均减轻。与NC组比较,COPD组大鼠FEV0.1、FVC水平显著降低,肺泡上皮细胞凋亡率、肺组织MUC5AC、GRP78、PERK、CHOP mRNA及蛋白水平显著增加(P<0.05);与COPD组比较,西维来司钠低、中、高剂量组大鼠FEV0.1、FVC水平依次升高,肺泡上皮细胞凋亡率、肺组织MUC5AC、GRP78、PERK、CHOP mRNA及蛋白水平依次降低(P<0.05)。结论西维来司钠可减轻COPD大鼠气道黏液高分泌,可能与抑制GRP78/PERK/CHOP信号通路激活,抑制COPD肺组织上皮细胞凋亡有关。

黄连解毒汤含药血清对Aβ诱导的海马神经元凋亡及GRP78/PERK/CHOP通路的影响

目的探究黄连解毒汤含药血清对β-淀粉样蛋白(Aβ)诱导的海马神经元凋亡及葡萄糖调节蛋白(GRP)78/蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)/CCAAT-增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)通路的影响。方法将海马神经元细胞随机分为对照组、Aβ组和黄连解毒汤低、中、高剂量组(2.7、5.4、8.1 g/kg),对照组加入空白血清培养,Aβ组加入Aβ_(25-35)(40μmol/L)和空白血清培养,给药组先加入Aβ_(25-35)再加入含药血清进行培养。噻唑蓝(MTT)法检测海马神经元细胞活性,TUNEL法检测海马神经元细胞凋亡,Western印迹检测抗凋亡基因B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、促凋亡基因Bcl-2相关X蛋白(Bax)和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-3及GRP78、PERK和CHOP表达水平。结果与对照组相比,Aβ组细胞活性明显降低,细胞凋亡指数明显升高,Bcl-2/Bax水平显著降低,cleaved-/pro-Caspase-3水平显著升高,GRP78、PERK和CHOP蛋白表达显著升高(均P<0.05);与Aβ组比较,黄连解毒汤各组细胞活性明显升高,细胞凋亡指数明显降低,Bcl-2/Bax水平显著升高,cleaved-/pro-Caspase-3水平显著降低,GRP78、PERK和CHOP蛋白表达显著降低(均P<0.05)。结论黄连解毒汤含药血清可抑制GRP78/PERK/CHOP通路,降低Aβ诱导的海马神经元细胞的凋亡。

基于内质网应激GRP78/PERK/CHOP信号通路探讨益肾通络方对膜性肾病大鼠足细胞凋亡的影响

目的:探讨益肾通络方对膜性肾病(MN)大鼠肾脏的保护作用及对足细胞凋亡的影响。方法:80只健康的雄性SD大鼠随机抽取20只设为正常对照组,余均采用尾静脉注射阳离子化牛血清白蛋白(C-BSA)建立MN大鼠模型。模型制备成功后随机分为模型对照组、盐酸贝那普利0.01 g/kg组和益肾通络方6.61、13.22、26.44 g/kg组。各给药组分别灌胃相应中药混悬液,正常对照组和模型对照组给予等体积的蒸馏水,1次/d,连续4 w。灌胃结束后,采用双缩脲法检测大鼠24 h尿蛋白(UTP)定量水平,光镜和电镜下观察肾脏病理改变,免疫组织化学法(IHC)和实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)观测大鼠肾小球中足细胞裂孔膜蛋白(nephrin)、足萼糖蛋白(podocalyxin)及mRNA表达情况,TUNEL检测肾组织细胞凋亡情况,免疫印迹法(western-blot)检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)、CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)、Casepase-3蛋白的表达水平。结果:与正常对照组比较,模型对照组大鼠UTP水平显著升高(P<0.01),肾小球体积增大,基底膜不同程度增厚,足细胞足突部分融合或消失,肾小球毛细血管襻IgG沉积;Nephrin、Podocalyxin mRNA及蛋白表达水平显著下调(P<0.01);肾组织中细胞凋亡率显著升高(P<0.01),GRP78、PERK、CHOP、Casepase-3蛋白表达明显上调(P<0.05或P<0.01);与模型对照组比较,各给药组大鼠UTP水平显著降低(P<0.01),肾脏病理损害明显减轻;Nephrin、Podocalyxin mRNA及蛋白表达水平均明显上调(P<0.05或P<0.01);肾组织细胞凋亡数量均显著减少(P<0.01),GRP78、PERK、CHOP、Casepase-3蛋白表达均明显下调(P<0.05或P<0.01)。结论:益肾通络方可通过抑制GRP78/PERK/CHOP通路减少肾组织细胞凋亡率,维持足细胞结构完整性,降低蛋白尿以延缓MN进展。