脾虚型功能性消化不良大鼠胃组织GRP78/BiP蛋白表达及脾虚1号方干预研究

目的探讨脾虚型功能性消化不良(FD)大鼠胃组织GRP78/BiP蛋白表达及脾虚1号方的干预作用。方法 70只10日龄雄性SD大鼠随机分为正常组(10只)、FD模型组(10只)、脾虚型FD模型组(50只)。正常组给予2%蔗糖溶液灌胃,0.2 mL/d,连续6天;FD模型组、脾虚型FD模型组给予0.1%蔗糖碘乙酰胺溶液灌胃,0.2 mL/d,连续6天。脾虚型FD模型组正常饲料喂养至6周龄后叠加改良小平台法,连续14天。造模结束后随机分为脾虚型FD模型组,西药组,中药低、中、高剂量组,每组各10只,连同正常组、FD模型组,每天分别给予蒸馏水1 mL/100 g、多潘立酮0.3125 mg/100 g、脾虚1号方0.1275、0.255、0.51 g/100g,灌胃14天。采用Western blot和免疫组化方法检测胃窦组织GRP78/BiP蛋白表达量。结果与正常组比较,脾虚型FD模型组大鼠胃窦黏膜GRP78/BiP蛋白光密度值和蛋白灰度值均升高(P<0.05,P<0.01);与脾虚型FD模型组比较,中药低剂量组大鼠胃窦黏膜GRP78/BiP蛋白表达量降低,而中药中剂量组大鼠胃窦组织GRP78/BiP蛋白灰度值降低(P<0.05,P<0.01)。结论脾虚型FD大鼠胃窦GRP78/BiP蛋白表达升高,存在内质网应激现象,脾虚1号方能够减少GRP78/BiP蛋白的表达,减轻内质网应激现象的发生。

黄连素抑制GRP78表达促进三阴乳腺癌细胞凋亡的研究

[目的]通过检测黄连素对三阴乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)细胞株MDA-MB-231细胞凋亡及葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78,GRP78)表达的影响,探讨黄连素抗TNBC的机制。[方法]以MTT法检测不同浓度黄连素对MDA-MB-231细胞增殖的影响,筛选黄连素的处理浓度。将MDA-MB-231细胞分为对照组、40μmol·L^(-1)黄连素组、60μmol·L^(-1)黄连素组、免疫球蛋白重链结合蛋白诱导剂X(immunoglobulin heavy chain binding protein inducer X,BiX)组,以及BiX联合40μmol·L^(-1)黄连素组、BiX联合60μmol·L^(-1)黄连素组。相应药物处理24h后,应用流式细胞术检测细胞凋亡情况,并以Western blot检测细胞GRP78和凋亡相关基因Bcl-2、Bax的表达。[结果]40μmol·L^(-1)以上浓度的黄连素可剂量依赖性抑制MDA-MB-231细胞增殖。与对照组比较,BiX组细胞凋亡率降低(P<0.05)、GRP78和Bcl-2表达增高(P<0.01,P<0.001)、Bax表达减低(P<0.05)。与BiX组比较,BiX联合40、60μmol·L^(-1)黄连素组细胞凋亡率增加(P<0.01),GRP78和Bcl-2表达减低(P<0.01,P<0.01),Bax表达增加(P<0.01)。[结论]黄连素可以促进MDA-MB-231细胞凋亡,其机制可能是通过下调GRP78的表达,从而降低Bcl-2表达,并促进Bax的表达。

GRP78/Bip在类风湿性关节炎中的研究进展

GRP78/Bip参与体内绝大多数应激反应,可从细胞内转至细胞外。细胞内GRP78/Bip具有抗凋亡和促细胞增殖作用,细胞外GRP78/Bip具有强大的免疫调节、抗炎和抑制破骨细胞分化和吸收的作用。RA的发生和发展必须克服几个瓶颈,其中病变细胞容易增殖并能同时避免免疫破坏和细胞凋亡是至关重要的一环。因此,针对RA病变细胞内和细胞外GRP78/Bip的研究无疑是理想治疗思路。但目前关于GRP78/Bip在RA中的研究存在较大争议,部分认为可通过抑制体内GRP78/Bip表达,促进病变细胞凋亡,进而达到治疗作用;而另一部分认为可通过增加体内GRP78/Bip,抑制炎症反应,进而达到治疗目的。文章就细胞内外GRP78/Bip在RA中的靶向治疗、抗炎和抗破骨细胞活性及其作用机制假说进行综述。

基于GRP78/PERK/ATF4的泽泻汤改善脂质诱导肝细胞内质网应激作用机制研究

目的:基于GRP78/PERK/ATF4通路探讨泽泻汤改善肝细胞内质网应激的潜在机制。方法:采用油酸(OA)及高脂饮食诱导高脂细胞及动物内质网应激(Endoplasmic reticulum stress,ERS)模型。ER与Ca^(2+)荧光共定位观察泽泻汤对ER-Ca^(2+)稳态的调节情况;流式细胞术及Tunel法检测泽泻汤对凋亡的影响;Q-PCR检测ER核心信号1(Ern1)、转录激活因子6(Atf6)、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CCAAT/enhancer-binding protein-homologous protein,Chop)、Grp78、Perk、X-盒结合蛋白1(Xbp1)、热休克蛋白90β1(Hsp90β1)、肿瘤坏死因子受体超家族成员10B(Tnfrsf10b)的mRNA表达;Western bolt法检测葡萄糖调节蛋白78/B细胞免疫球蛋白结合蛋白(GRP78/BIP)GRP78、类PKR的内质网激酶(PERK)、p-PERK和转录激活因子4(ATF4)的蛋白表达。结果:与正常对照组相比,模型对照组ER-Ca^(2+)明显失衡(P<0.05),肝细胞凋亡增加(P<0.01),Perk、Xbp1等ERS相关mRNA的表达上调(P<0.05),ERS伴侣标志蛋白GRP78、ATF4蛋白表达明显上调(P<0.05);与模型对照组相比,泽泻汤逆转了OA诱导的ER-Ca^(2+)失衡(P<0.01);显著改善OA及高脂饮食诱导的肝细胞凋亡(P<0.01);体内外下调ERS相关基因Ern1、Atf6、Chop、Grp78、Perk、Xbp1、Hsp90b1、Tnfrsf10b的表达(P<0.05);体内外逆转OA及高脂饮食诱导的ERS伴侣标志蛋白GRP78表达的显著上调(P<0.01),同时下调p-PERK及ATF4蛋白表达(P<0.05)。结论:泽泻汤抑制脂质诱导的ERS,其机制可能与调控GRP78/PERK/ATF4通路有关。

内质网应激在Ⅰ型糖尿病小鼠骨质疏松发生中的作用及其机制

目的探讨内质网应激(ERS)在Ⅰ型糖尿病小鼠骨质疏松发病中的作用和意义方法选取8周龄雄性BALB/c小鼠20只随机分为瓯组,造模组(14只)毎大腹腔注射链豚佐菌素(STZ)60 mg/kg,正常对照组(6只)注射等体积的柠檬酸盐缓冲液,连续注射5 d,诱导建立Ⅰ型糖尿病小鼠模型。糖尿病造模成功2个月后处死动物.取新鲜股骨测量骨重骨长度,甲醛固定右侧股骨行micro-CT扫描和免疫组织化学(IHC)染色,左侧股骨及仅侧胫骨行蛋白印记Western blot或实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测内质网应激相关指标,如葡萄糖调节蛋白-78(GRP78)或免疫球蛋白重链结合蛋白(Bip)、C/EBP同源蛋白(CHOP)结果与对照组[(5. 9 ±1.6)、(6.3 ±1.2) mmol/L、( 1. 664 ± 0. 051)、( 1.692 ± 0. 042) cm、(4.8 ±0.5)个/mm、( 33 ± 1 )μm ]比较,实验组[(7 ±2. 9)、( 26. 7 ± 3. 2) mmol/L、( 1. 393 ± 0. 049)、( 1.416 ± 0. 038) cm .( 3. 1 ± 0. 7 )个/mm、(21 ±4)μm]的血糖、骨长度及micro-CT结果证实成功制备Ⅰ型糖尿病骨质疏松小鼠模型(P <0. 05)。免疫组织化学结果证实:糖尿病骨质疏松组的GRP78/Bip、CHOP阳性区域面积比值[(6.4±0.8)%、(7.1 ±0.6)%]相对于对照组[(4.1 ±0.7)%、(3.2 ±0.6)%]显著升高(P<0.05)。Western blot结果证实,GRP78/Bip、CHOP的表达量在糖尿病小鼠[0.73 ±0.11、0. 80±0.21]中相对于对照组[0.14 ±0.06、0.22 ±0.04]显著升高(P<0.05) Real-time PCR 结果证实,GRP78/Bip、CHOP的rnRNA相对表达量在糖尿病小鼠(2.17 ± 0.76,3.07 ± 0.45 )中显著高丁对照组(均设为1,P<0.05)。结论糖尿病骨质疏松组小鼠的骨组织及骨髓中内质网应激及由具介导的凋亡途径被激活,可能导致骨形成及骨破坏平衡被打破,在骨质疏松的发病过程中起了重要作用。

α-细辛醚对食管癌Eca-109细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨α-细辛醚调控内质网应激对食管癌Eca-109细胞增殖及凋亡的影响。方法实验分为空白组和低、中、高剂量实验组。空白组给予不含药物的RPMI-1640培养基进行培养;低、中、高剂量实验组分别给予含25,50和100 mg·L^(-1)α-细辛醚溶液的RPMI-1640培养基进行培养。用噻唑蓝法检测细胞增殖率,用实时荧光定量聚合酶链反应法检测细胞中免疫球蛋白重链结合蛋白(BIP)、C/BEP环腺苷酸反应元件结合转录因子同源蛋白(CHOP)及葡萄糖调节蛋白78(GRP78)mRNA的表达水平。结果低、高剂量实验组和空白组的细胞增殖能力(OD值)分别为0.78±0.14,0.50±0.09和0.92±0.12,BIP mRNA相对表达量分别为7.68±2.08,3.27±0.94和13.07±2.35,CHOP mRNA相对表达量分别为1.22±0.33,2.39±0.63和0.91±0.30,GRP78 mRNA相对表达量分别为2.11±0.59,5.86±1.47和0.84±0.31。低、高剂量实验组的上述指标与空白组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论α-细辛醚能通过调节内质网应激相关蛋白BIP、CHOP及GRP78表达,达到促进食管癌细胞凋亡、抑制增殖的作用。