基于GRP78/PERK/ATF4的泽泻汤改善脂质诱导肝细胞内质网应激作用机制研究

目的:基于GRP78/PERK/ATF4通路探讨泽泻汤改善肝细胞内质网应激的潜在机制。方法:采用油酸(OA)及高脂饮食诱导高脂细胞及动物内质网应激(Endoplasmic reticulum stress,ERS)模型。ER与Ca^(2+)荧光共定位观察泽泻汤对ER-Ca^(2+)稳态的调节情况;流式细胞术及Tunel法检测泽泻汤对凋亡的影响;Q-PCR检测ER核心信号1(Ern1)、转录激活因子6(Atf6)、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CCAAT/enhancer-binding protein-homologous protein,Chop)、Grp78、Perk、X-盒结合蛋白1(Xbp1)、热休克蛋白90β1(Hsp90β1)、肿瘤坏死因子受体超家族成员10B(Tnfrsf10b)的mRNA表达;Western bolt法检测葡萄糖调节蛋白78/B细胞免疫球蛋白结合蛋白(GRP78/BIP)GRP78、类PKR的内质网激酶(PERK)、p-PERK和转录激活因子4(ATF4)的蛋白表达。结果:与正常对照组相比,模型对照组ER-Ca^(2+)明显失衡(P<0.05),肝细胞凋亡增加(P<0.01),Perk、Xbp1等ERS相关mRNA的表达上调(P<0.05),ERS伴侣标志蛋白GRP78、ATF4蛋白表达明显上调(P<0.05);与模型对照组相比,泽泻汤逆转了OA诱导的ER-Ca^(2+)失衡(P<0.01);显著改善OA及高脂饮食诱导的肝细胞凋亡(P<0.01);体内外下调ERS相关基因Ern1、Atf6、Chop、Grp78、Perk、Xbp1、Hsp90b1、Tnfrsf10b的表达(P<0.05);体内外逆转OA及高脂饮食诱导的ERS伴侣标志蛋白GRP78表达的显著上调(P<0.01),同时下调p-PERK及ATF4蛋白表达(P<0.05)。结论:泽泻汤抑制脂质诱导的ERS,其机制可能与调控GRP78/PERK/ATF4通路有关。