葡萄糖氧化酶-过氧化物酶偶联体系葡萄糖分析

酶催化反应具有高效、快速、高选择性,在定量分析领域应用广泛.本文采用葡萄糖氧化酶-过氧化物酶偶联体系,用动力学方法对样品中葡萄糖含量进行分光光度测定,得到了较为满意的结果.

“Yolk-shell”结构中高效双酶级联催化体系的构筑

合成了一种生物-无机杂化材料ZIF-8@GOx-CPO@ZIF-8,该材料以具有“蛋黄-壳(Yolk-shell)”结构的金属有机框架(MOF)为载体,将葡萄糖氧化酶(GOx)和氯过氧化物酶(CPO)封装在不同隔离空间中构建了双酶纳米反应器.“Yolk-shell”结构可为封装的酶提供纳米邻近效应,GOx催化底物原位生成的H_(2)O_(2)可启动相邻的CPO催化反应,有效减少了反应物的扩散阻力和H_(2)O_(2)的分解和逃逸,同时避免了两种酶催化反应的相互影响.与均相缓冲液中的游离酶相比,ZIF-8@GOx-CPO@ZIF-8的级联催化效率更高.由于MOF的屏蔽效应,酶的热稳定性和有机溶剂耐受性显著提高.“Yolk-shell”结构还可有效抑制材料重复使用过程中酶分子的泄漏,经过20次重复使用后,ZIF-8@GOx-CPO@ZIF-8仍可保持初始级联催化效率的72%.将ZIF-8@GOx-CPO@ZIF-8双酶级联反应生成的HClO应用于偶氮染料的高效脱色和水果保鲜.在1 mg/mL ZIF-8@GOx-CPO@ZIF-8水溶液中,橙黄G(0.3 mmol/L)在15 min内可完成脱色(脱色率>98%).在新鲜草莓的杀菌保鲜实验中,ZIF-8@GOx-CPO@ZIF-8也显示出良好效果.ZIF-8@GOx-CPO@ZIF-8双酶级联催化体系具有高效、稳定、温和及绿色的特点,极具应用潜力.

GOD-POD法在3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗评价中的应用

目的:通过葡萄糖氧化酶-过氧化物酶(Glucose oxidase-peroxidase,GOD-POD)法检测脂肪细胞葡萄糖消耗,建立简便、经济的脂肪细胞胰岛素敏感性的评价方法。方法:诱导分化成熟的3T3-L1脂肪细胞,分别采用高浓度葡萄糖(25 mmol/L)、地塞米松(Dexamethasone,DEX)(1.0μmol/L)诱导脂肪细胞产生胰岛素抵抗(Insulin resistance,IR),GOD-POD法测定糖浓度,动态观察诱导过程中细胞糖消耗,并计算胰岛素敏感性指数(Insulin sensitivity index,ISI);同时应用RT-PCR检测脂联素(Adiponectin)mRNA表达。结果:通过该方法检测,可以反映脂肪细胞对葡萄糖的摄取利用,以胰岛素刺激下较基础状态细胞葡萄糖消耗的增加量,计算出ISI,能够反映细胞对胰岛素的敏感性及抵抗程度。结论:GOD-POD法能够准确测定细胞总体葡萄糖消耗,可用于脂肪细胞糖摄取利用与IR评价,此方法操作简便、经济易行。

快速检测痕量汞的光电型传感方法的建立

为建立一种检测痕量汞的光电型传感方法,利用汞抑制葡萄糖氧化酶体系(即葡萄糖氧化酶—辣根过氧化物酶-葡萄糖-邻联甲苯胺—偶联反应体系)生成蓝色产物的原理,将Glu与OT固定化制成试纸条,插入自制的便携式光电型传感器,绘制出汞离子溶液浓度与对应的反射光强度值的标准曲线。实验结果表明,当汞溶液的浓度范围分别处于0.010～0.050mmoL/L时,光反射强度值与汞浓度皆呈现良好线性关系。经优化检测条件,汞溶液与双酶孵育的最佳时间为1h。该方法测定汞的检出限为1.0×10-4 mmol/L,检测时间分别为5min。由此可知,此方法检测汞快速、简便,有望实现对样品中汞含量的现场检测。

维生素C(Vc)对GOD法测定血糖干扰因素的探讨

目的:探讨维生素C(Vc)对葡萄糖氧化酶过氧化物酶(GOD)法,测定血糖的干扰程度。方法:用GOD法测定加入不同浓度Vc的血糖结果,对其结果进行分析、比较。结果:Vc对GOD法测定血糖有明显的负干扰作用,相关系数r分别为:-0.996,-0.976,干扰度随着Vc浓度的增加而增加,相关系数r分别为:0.996,0.976,同一浓度的Vc对两种血清干扰度也有所不同,对正常值血清的干扰度高于高值血清。当Vc浓度(10 000.0mg/L时,干扰度(17.4%,干扰度较大,而当Vc浓度(312.5 mg/L时,干扰度(3.6%,干扰度甚小。结论:在用GOD法测定血糖时,应考虑还原性药物的干扰因素,当血糖值过低时,应区分真性低血糖与假性低血糖。

快速检测痕量铜的光电型传感器的研制

利用铜对葡萄糖氧化酶的抑制作用,以及葡萄糖氧化酶-辣根过氧化物酶-葡萄糖(Glu)-邻联甲苯胺(OT)偶联反应体系生成蓝色底物的原理,将Glu与OT固定化制成试纸条,插入自制的便携式单色光反射计,组装出检测铜的光电型传感器。当铜的质量浓度范围为1 mg/L～100 mg/L时,光反射强度值与铜的质量浓度呈良好的线性关系。在优化的试验条件下,该方法的检测限为0.064 mg/L,检测时间为5 min。