山姜素在人肝微粒体的葡萄糖醛酸化反应研究

目的研究体外肝微粒体孵育体系中山姜素的葡萄糖醛酸化代谢情况,鉴定参与山姜素葡萄糖醛酸化代谢的UGT亚型。方法用体外肝微粒体孵育体系,用HPLC-UV检测方法,检测山姜素的葡萄糖醛酸化代谢情况。将代谢产物进行纯化后,用质谱(MS)和核磁共振(NMR)法进一步鉴定其结构。用商业化重组表达的UGT单酶,鉴定代谢产物的结构和归属可能参与山姜素葡萄糖醛酸化代谢反应的葡萄糖醛酸转移酶(UGTs)亚型。结果山姜素葡萄糖醛酸代谢产生一个代谢产物,经结构鉴定为山姜素-氧-单葡萄糖醛酸化产物。人肝微粒体代谢山姜素的动力学行为,符合米方程且动力学参数:Vmax=(101.9±3.0)nmol·min-1·mg-1·pro,Km=(40.6±3.6)μmol·L-1。UGT1A1、UGT1A3、UGT1A9和UGT2B15均参与了山姜素的葡萄糖醛酸化反应。结论山姜素在人肝微粒体孵育体系中会被代谢成为一个单葡萄糖醛酸化产物,且归属了参与的UGT酶。

大黄素在人肝肠微粒体的葡萄糖醛酸化反应

目的:研究体外人肝肠微粒体孵育体系中大黄素的葡萄糖醛酸化代谢情况,并找出参与大黄素葡萄糖醛酸化代谢的人尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶(UGT)亚型。方法:用超高效液相色谱法(UPLC),检测大黄素的葡萄糖醛酸化代谢情况,将代谢产物进行纯化后,用质谱(MS)和核磁共振(NMR)法进一步鉴定其结构。用人的重组化表达的UGT单酶,鉴定可能参与大黄素葡萄糖醛酸化代谢反应的UGT亚型。结果:大黄素葡萄糖醛酸代谢仅产生大黄素-氧-单葡萄糖醛酸这一个代谢产物。大黄素在人的肝、肠微粒体中的代谢属经典的米氏方程动力学行为,除UGT1A4和UGT2B17外,其它10种UGT亚型均参与了大黄素的葡萄糖醛酸化反应。结论:大黄素在人肝肠微粒体孵育体系中会被代谢成为一个单葡萄糖醛酸化产物。大黄素的主要代谢部位是肠道。

尿苷-5'-二磷酸葡萄糖醛酸转移酶对常见植物药组分的催化代谢及其相互作用

尿苷-5'-二磷酸葡萄糖醛酸转移酶(UGT)是药物II相代谢反应最主要的酶,通过催化葡萄糖醛酸与内源性或外源性化学物质发生葡萄糖醛酸化反应,进而影响药物的药代动力学特征。许多植物药及其有效成分是UGT的底物,由UGT介导其催化代谢。本文概述了UGT酶介导某些植物药及其组分的催化代谢和对UGT酶活性的影响。

基于淫羊藿次苷Ⅱ代谢行为的体外药物相互作用研究

目的应用体外实验方法筛选淫羊藿次苷II在肝微粒体中的尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶（UGT）抑制剂,为改善淫羊藿次苷II生物利用度提供新思路。方法首先选择槲皮素、山柰酚、桔皮素、柚皮素、水飞蓟素、草质素、胡椒碱、甘草查尔酮A以及异银杏双黄酮作为抑制剂筛选对象,对以上9种化合物在人肝微粒体、人肠微粒体、大鼠肝微粒体、猴肝微粒体及小型猪肝微粒体中对淫羊藿次苷II葡萄糖醛酸化反应的抑制作用进行初步研究。抑制剂分别选择低、中、高3个浓度（1、10、100μmol/L）,采用超快速高效液相色谱（UFLC）法测定代谢产物生成速率,以UGT代谢酶残余活性评价抑制能力。从中筛选出抑制能力较强的化合物（半数抑制浓度IC50≤10μmol/L）,对其在人肝微粒体中的抑制机制进行系统研究并计算IC50及抑制常数（Ki）值。IC50值的测定采用单一底物浓度法,在不同浓度代谢酶抑制剂的孵育体系中,代谢产物的生成速率不同,应用非线性回归分析计算而得。Ki的测定需在孵育体系中设计3~4个底物浓度以及4~5个包括0点在内的抑制剂浓度,抑制动力学类型通过Dixon作图法和Lineweaver-Burk作图法确定,采用二次作图法计算Ki。结果山柰酚、槲皮素及甘草查尔酮A对淫羊藿次苷II在不同种属肝微粒体及人肠微粒体中的葡萄糖醛酸化反应均具有较强的抑制作用;对在人肝微粒体中的葡萄糖醛酸化反应抑制作用的IC50值分别为（1.01±0.26）、（4.65±0.51）、（5.34±1.00）μmol/L;Dixon作图法及Lineweaver-Burk作图法表明,甘草查尔酮A能够竞争性抑制淫羊藿次苷II在人肝微粒体中的葡萄糖醛酸化反应,Ki值为0.18μmol/L;槲皮素遵循混合型抑制动力学模型,Ki值为0.23μmol/L;山柰酚符合非竞争型抑制动力学模型,Ki值为0.36μmol/L。结论山柰酚、槲皮素及甘草查尔酮A能够降低淫羊藿次苷II在不同种属肝微粒体中的葡萄糖醛酸化反应速率,使代谢产物生成减少,清除减慢。