葡萄膜黑色素瘤组织miR-144、miR-145表达变化及其与患者预后的关系

目的探讨葡萄膜黑色素瘤(UM)组织微小RNA(miR-)144、miR-145表达变化及其与患者预后的关系。方法选取140例(140眼)UM患者(观察组)、100例(100眼)因外伤行眼球摘除术的患者(对照组)。取两组手术切除的葡萄膜组织,采用real-time PCR法检测miR-144、miR-145。比较两组miR-144、miR-145表达情况,以均数为界值将UM患者分为miR-144低表达、高表达以及miR-145低表达、高表达者,比较不同临床病理特征UM患者miR-144、miR-145高表达和低表达情况,采用Kaplan-Meier分析比较miR-144、miR-145高表达和低表达患者的预后,COX回归模型分析UM预后的影响因素。结果观察组病变组织miR-144、miR-145表达低于对照组(P均<0.05)。观察组miR-144低表达69例、高表达71例,miR-145低表达73例、高表达67例。与无虹膜新生血管、肿瘤厚度≤8 mm、无眼外生长、T分期T1~T2期的UM患者比较,有虹膜新生血管、肿瘤厚度>8 mm、有眼外生长、T分期T3~T4的UM患者miR-144、miR-145低表达者占比增加,miR-144、miR-145高表达者占比减少(P均<0.05)。miR-144、miR-145低表达UM患者5年生存率低于miR-144、miR-145高表达患者(P均<0.01)。肿瘤厚度>8 mm及miR-144、miR-145低表达是UA患者预后不良的独立危险因素(P均<0.05)。结论UM组织中miR-144、miR-145表达降低,miR-144、miR-145低表达与UM患者不良预后有关。

姜黄素对葡萄膜黑色素瘤细胞恶性生物学行为及Wnt/β-catenin通路的抑制作用

目的探究姜黄素对葡萄膜黑色素瘤(UM)恶性生物学行为的抑制作用及机制。方法应用含不同浓度(0、20、40和80μmol/L)姜黄素培养液培养M23细胞48 h,于倒置显微镜下观察细胞形态学改变;采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测细胞存活率;分别采用平板克隆形成实验、流式细胞术、细胞划痕实验及Transwell实验检测M23细胞集落形成、凋亡、迁移及侵袭情况;采用实时荧光定量PCR法检测细胞中Wnt/β-catenin通路相关基因c-Myc、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、Survivin及基质金属蛋白酶9(MMP-9)mRNA相对表达情况;采用Western blot法检测Wnt/β-catenin通路相关蛋白c-Myc、Cyclin D1、Survivin、MMP-9、β-连环蛋白(β-catenin)、糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)、磷酸化GSK-3β(p-GSK-3β)及轴抑制蛋白2(Axin2)蛋白相对表达量。另取20只6周龄雌性BALB/c小鼠,左后腹皮下脂肪垫注射M23细胞悬浮液建立小鼠M23体内移植肿瘤模型,将造模成功小鼠按照随机数字表法随机平均分为模型组、姜黄素低剂量组、姜黄素中剂量组和姜黄素高剂量组,每组5只,分别腹腔内注射0、10、20和40 mg/kg姜黄素生理盐水溶液,连续注射30 d后剥离皮下瘤体并称质量。结果0μmol/L姜黄素组、20μmol/L姜黄素组、40μmol/L姜黄素组和80μmol/L姜黄素组细胞存活率分别为(100.00±0.00)%、(83.78±4.59)%、(66.09±3.92)%和(47.16±3.63)%,细胞集落形成数分别为128.67±9.18、100.33±8.73、58.67±6.55和31.67±4.92,细胞凋亡率分别为(1.33±0.29)%、(14.53±2.04)%、(27.23±3.56)%和(44.73±4.36)%,细胞迁移率分别为(89.76±4.57)%、(65.43±3.70)%、(34.83±2.19)%和(18.82±1.99)%,细胞侵袭数分别为148.33±8.18、125.33±7.41、73.67±6.34、45.67±5.31,各组M23细胞存活率、集落形成数、细胞凋亡率、细胞迁移率、细胞侵袭数总体比较差异均有统计学意义(F=125.321、97.941、72.516、277.097、139.006,均P<0.001)。随姜黄素作用浓度的增大,细胞存活率、集落形成数、细胞迁移率、细胞侵袭数均明显降低,细胞凋亡率均明显增加,组间两两比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。随姜黄素浓度的增大,细胞中c-Myc、Cyclin D1、Survivin和MMP-9 mRNA和蛋白及β-catenin和p-GSK-3β蛋白相对表达水平均明显降低,Axin2蛋白相对表达水平明显升高,组间比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。小鼠荷瘤质量随姜黄素作用剂量的增加而降低,组间比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论姜黄素可抑制UM细胞M23增生、迁移、侵袭等恶性生物学行为,抑制肿瘤生长,促进细胞凋亡,其作用机制可能与阻断Wnt/β-catenin通路激活有关。

干扰hsa_circ_0103232对葡萄膜黑色素瘤细胞生物学行为的影响

目的探讨干扰hsa_circ_0103232对葡萄膜黑色素瘤C918和MUM2B细胞增殖、迁移、细胞周期及凋亡的影响。方法培养C918和MUM2B细胞株,通过实时荧光定量PCR分别检测3个靶向hsa_circ_0103232的小干扰RNA(siRNA)的干扰效果,并选择干扰效果最好的siRNA进行后续实验。将C918和MUM2B细胞均分为阴性对照转染(siCtrl)组和干扰(si-hsa_circ_0103232)组,采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)和细胞克隆形成实验检测细胞增殖情况;采用Transwell实验检测细胞迁移情况;采用流式细胞术检测细胞周期分布和细胞凋亡情况;采用荧光原位杂交实验检测hsa_circ_0103232在细胞中的定位。结果实时荧光定量PCR结果显示,3个靶向hsa_circ_0103232的siRNA中,以si-hsa_circ_0103232#1的靶点效果最好,在C918和MUM2B细胞中的干扰后表达水平分别为0.263±0.016和0.469±0.028,显著低于对照组的1.013±0.008和1.004±0.108(均P<0.001)。CCK-8结果显示,与siCtrl组相比,si-hsa_circ_0103232组C918和MUM2B细胞增殖活力在转染后不同时间均显著降低,差异均有统计学意义(均P<0.05);细胞克隆形成实验结果显示,si-hsa_circ_0103232组C918和MUM2B细胞形成克隆数分别为(12±1)和(45±7)个,分别少于siCtrl组的(28±4)和(83±3)个,差异均有统计学意义(t=4.93、7.42,均P<0.05);Transwell实验结果显示,si-hsa_circ_0103232组C918和MUM2B细胞迁移数量分别为(4±1)和(24±2)个,分别少于siCtrl组的(37±12)和(57±3)个,差异均有统计学意义(t=3.91、10.80,均P<0.05);流式细胞术检测结果显示,与siCtrl组相比,si-hsa_circ_0103232组C918和MUM2B细胞中G1期细胞的比例均明显升高、G2/M期比例均显著下降,细胞凋亡率均显著升高,差异均有统计学意义(均P<0.05);荧光原位杂交实验结果显示,hsa_circ_0103232在C918和MUM2B细胞中定位在细胞核。结论干扰hsa_circ_0103232可抑制C918和MUM2B细胞增殖、迁移和周期进程,并促进细胞凋亡。hsa_circ_0103232可能成为葡萄膜黑色素瘤新的治疗靶点。

基于铁死亡相关基因构建葡萄膜黑色素瘤风险预测模型

目的应用生物信息学构建与铁死亡基因相关的UVM预测模型,用于评估葡萄膜黑色素瘤患者预后生存及转移情况。方法从肿瘤基因组图谱(TCGA)获取UVM转录组数据和与之匹配的临床信息,结合铁死亡数据库确定铁死亡相关基因。Kaplan-Meier方法分析铁死亡相关基因在高、低表达状态下患者的总体生存率,利用LASSO、单因素和多因素回归分析筛选并构建免疫相关风险预测模型。根据风险评分将患者分为高、低风险组,利用ROC曲线评估模型准确度,并采用基因表达综合数据库(GEO)中的GSE84976和GSE22138作为验证集。结果通过多种算法构建了含有4个核心基因的预测模型(AIFM2、ITGA6、CD44、ALOX12),基于模型标志物计算的风险评分可以准确识别UVM高、低风险患者,并具有预测患者总体生存的能力(P<0.01,1 a AUC=0.84、3 a AUC=0.89、5 a AUC=0.91),验证集GSE84976外部验证结果:P<0.01,1 a AUC=NA,3 a AUC=0.78,5 a AUC=0.91;验证集GSE22138外部验证结果:P<0.01,1 a AUC=0.75,3 a AUC=0.79,5 a AUC=0.82,结果显示,该预测模型可作为UVM独立预后因素,预测生存及转移情况。结论构建的新型铁死亡相关的UVM预测模型(AIFM2、ITGA6、CD44、ALOX12),能够准确预测UVM患者预后及转移情况,可为UVM患者的个性化诊疗提供新的靶点。

白藜芦醇通过miR-512-3P/DUSP1轴抑制葡萄膜黑色素瘤细胞的自噬并促进细胞凋亡

目的探究白藜芦醇(resveratrol,RES)抑制葡萄膜黑色素瘤细胞(choroidal melanoma cells,MUM2B)自噬并促进其凋亡的调控作用及机制。方法将MUM2B分为对照组、实验组,分别用不同浓度的RES(0、10、20、40、60、80μmol·L-1)处理细胞。划痕实验检测细胞迁移率,CCK-8检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,通过qRT-PCR和Western blot检测miR-512-3P、DUSP1以及其他目的蛋白的表达,RIP实验验证miR-512-3P靶向沉默DUSP1,使用miR-512-3P的mimic,体外评估miR-512-3P的生物学意义。结果RES抑制了MUM2B细胞的增殖与侵袭,减弱细胞自噬,促进细胞凋亡;MUM2B细胞p-ERK、p-MTOR蛋白表达明显增加,miR-512-3P表达增加;过表达miR-512-3P靶向抑制了DUSP1的表达,并促进了MUM2B细胞的凋亡。结论RES通过促进miR-512-3P的表达靶向抑制DUSP1,从而抑制MUM2B的自噬并促进其凋亡。

MiR-29a/b/c对葡萄膜黑色素瘤细胞功能的影响及机制

目的:探索miR-29a/b/c对葡萄膜黑色素瘤(UM)细胞功能的影响及其作用机制。方法:使用脂质体转染技术将hsa-miR-29a/b/c或基质金属蛋白酶2(MMP2)特异性siRNA转染进UM细胞。使用MTS实验和Matrigel Transwell实验分别检测UM细胞增殖和侵袭能力的变化。使用半定量PCR实验检测UM细胞中MMP2m RNA水平表达量的变化。使用ELISA实验检测UM细胞上清中MMP2蛋白分泌量的变化。结果:转染miR-29a/b/c抑制了UM细胞的增殖(P<0.05)和侵袭能力(P<0.05)。MiR-29a/b/c不影响MMP2 mRNA转录,但均能抑制UM细胞分泌MMP2(P<0.05)。在UM细胞中干扰MMP2抑制UM细胞的侵袭能力(P<0.05)。结论:Mi R-29a/b/c抑制UM细胞的增殖和侵袭。MiR-29a/b/c减少其下游靶蛋白MMP2的分泌,在UM细胞中干扰MMP2抑制细胞侵袭。

不同病理类型的葡萄膜黑色素瘤中微小RNA差异表达谱分析

背景目前研究证实微小RNA（miRNA）参与大多数人类肿瘤疾病的发生和发展，其作用类似于抑癌基因或癌基因。葡萄膜黑色素瘤（UM）是成人常见的眼部恶性肿瘤，其发生和转移机制仍未完全阐明。探讨UM组织中miRNA的差异表达情况有望为UM的靶向治疗提供依据。目的筛选不同病理类型的UM组织中特异性miRNA表达谱。方法收集于2013年3月至2015年10月在北京同仁医院手术局部切除并经常规组织病理学和免疫组织化学检测证实为梭型细胞型UM的标本4例和上皮细胞型UM标本4例，采用miRNA芯片分别检测2种UM组织中miRNA的表达，收集同期死于非肿瘤疾病的8个供体眼的正常葡萄膜组织作为对照，利用组间差异倍数筛选出差异≥2倍差异表达的miRNA；用在线软件预测差异表达miRNA的靶基因，采用生物信息学方法分析靶基因参与的信号功能通路。采用实时定量PCR法验证芯片检测结果。结果收集的梭形细胞型和上皮细胞型UM标本经组织病理学检查均得到确诊，免疫组织化学检测梭形细胞型及上皮细胞型UM组织中HMB45、黑色素-A和S-100均呈阳性反应。与正常葡萄膜组织比较，在梭形细胞型UM组织中差异表达的miRNA有109个，其中29个上调，80个下调，上调的miRNA包括miR-146a-5P、miR-25-3P和miR-29b-1-5P，下调的miRNA包括miR-126-5P、miR-183-5P和miR-96-5P；上皮细胞型UM中差异表达的miRNA有50个，其中23个上调，27个下调，上调的miRNA包括miR-155-5p、miR-210和miR-378a-5p；下调的miRNA包括miR-199a-5p、miR-143-3p和miR-143-5p。在梭形细胞型和上皮细胞型UM组织中共同上调的miRNA为miR-132-3p、miR-21-5P、miR-34a-5P和miR-34b-5P，共同下调的miRNA为miR-125b-2-3P、miR-126-3p、miR-199a-3P和miR-214-3P。梭形细胞型和上皮细胞型UM组织中差异表达的miRNA所预测的靶基因分别参与癌症通路、丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路、Wnt信号通路、细胞间黏附、胞吞作用、前列腺癌通路、结直肠癌通路和细胞黏附通路。结论与正常葡萄膜组织相比，梭形细胞型UM和上皮细胞型UM组织中存在多种miRNA的差异表达，梭形细胞型UM和上皮细胞型UM组织之间也存在明显的miRNA差异表达，这些差异表达的miRNA可通过不同的信号转导通路参与调控UM的生物学行为。

葡萄膜黑色素瘤和视网膜组织相关性的病理学分析（英文）

目的:分析葡萄膜黑色素瘤的形状对视网膜结构的影响。方法:回顾性分析葡萄膜黑色素瘤患者的病理切片和临床资料,分析肿瘤形状、大小、高度-基底比值、视网膜薄变和浸润的差异。结果:本研究包括102例患者(102眼),平均年龄45.6±12.4岁。其中葡萄膜黑色素瘤76眼(75%)为梭形细胞型,6眼(6%)为上皮样细胞型,16眼(16%)为混合细胞型,其它4眼(4%)。按肿瘤部位分:睫状体黑色素瘤3眼(2.9%),睫状体和脉络膜黑色素瘤28眼(27.5%),脉络膜黑色素瘤71眼(69.6%)。视网膜组织的分析中,43眼(43%)发现视网膜变薄,86眼(84%)发现视网膜浸润。肿瘤的高度在1.2~15.6(平均8.3±3.6) mm,肿瘤基底直径为4.8~31.2(平均17.3±6.5) mm。肿瘤峰高度-基底R值为0.53±0.32。视网膜薄变组(n=43)的平均R值显着高于无视网膜薄变组(n=59)(0.69±0.31与0.42±0.27;P<0.01)。视网膜肿瘤浸润组(n=86)的平均R值比无视网膜浸润组(n=16)略高(0.56±0.33比0.41±0.25;P=0.09),但无统计学意义。结论:高R值的肿瘤与其邻近视网膜薄变有关,与视网膜内肿瘤细胞浸润相关性不大。葡萄膜黑色素瘤的切面形状和邻近视网膜组织的受累情况关系紧密。

葡萄膜黑色素瘤的磁共振成像与病理诊断

目的 :探讨影响核磁共振成像 (MRI)诊断葡萄膜黑色素瘤的因素。方法 :10例经MRI检查并与病理学检查进行对比分析。结果 :MRI诊断 9例葡萄膜黑色瘤 ,病理诊断黑色素瘤 7例 ,睫状体成年型髓上皮腺瘤、视网膜下出血各 1例。MRI诊断 1例晶状体前上方肿瘤 ,病理诊断睫状体黑色素瘤。结论 :核磁共振对葡萄膜黑色素瘤的诊断有重要价值 。

基于生物信息学的葡萄膜黑色素瘤缺氧相关lncRNA预后模型的构建

目的基于生物信息学构建葡萄膜黑色素瘤(UM)缺氧相关长链非编码RNA(lncRNA)的预后模型。方法从TCGA数据库中筛选UM lncRNA表达谱及临床信息数据。采用Lasso回归、单因素与多因素Cox回归鉴定UM缺氧相关lncRNA预后标志物并构建预后模型;ROC评估预后模型灵敏度和特异度并绘制列线图。根据中位风险评分将UM分为高风险组和低风险组;采用Kaplan-Meier比较高、低风险组患者总生存期。采用KEGG对基于缺氧相关lncRNA差异基因进行功能富集分析。结果共获得983个缺氧相关的lncRNA。共筛选出7个具有独立预后意义的UM缺氧相关lncRNA预后标志物(AC100791.3、SOS1-IT1、LHFPL3-AS1、AP005121.1、AL121820.2、LINC01006、AC104825.1)并构建其预后模型。预后模型的风险评分是UM患者的独立预后因素(P<0.001)。ROC结果显示,预后模型具有较高的准确性。高风险组总生存期低于低风险组(P<0.001)。KEGG富集分析结果显示,氧化磷酸化通路、乙醛酸与二羧酸代谢、系统性红斑狼疮、抗原的加工与呈递、P53信号通路富集于高风险组人群。结论基于7个缺氧相关lncRNA构建的预后模型可预测UM患者的预后价值。

葡萄膜黑色素瘤病理类型对患者预后影响研究

目的:探讨葡萄膜黑色素瘤病理类型与患者预后的关系。方法:回顾性分析82例葡萄膜黑色素瘤患者病理类型及预后的临床资料,运用Kaplan-meier单因素生存分析方法进行分析,并运用Log-rank、Brelow、Tarone-Ware三种方法进行显著性检验。结果:在葡萄膜黑色素瘤的3种基本病理类型(上皮细胞型、梭形细胞型、混合细胞型)中,上皮细胞型26例、死亡9例,混合细胞型25例、死亡7例,梭形细胞型31例、死亡4例;Kaplan-Meier单因素分析以及Log-rank、Brelow、Tarone-Ware 3种方法检验显示,混合细胞型与梭形细胞型患者的预后间差异无统计学意义(P>0.05),上皮细胞型与混合细胞型患者的预后间差异无统计学意义(P>0.05),而上皮细胞型与梭形细胞型患者的预后间差异有统计学意义(P<0.05)。结论:葡萄膜黑色素瘤病理类型对患者预后有影响,上皮细胞型的葡萄膜黑色素瘤患者预后较差。

葡萄膜黑色素瘤患者生活质量相关评估工具的研究进展

检索近10年葡萄膜黑色素瘤患者生活质量的相关文献,对该类患者的生活质量评估工具及应用现状进行综述,以期为国内葡萄膜黑色素瘤患者生活质量评估工具的开发,汉化及应用提供参考依据,并为未来开展相关研究提供参考。

组织内AEG-1表达情况对葡萄膜黑色素瘤病理特征的影响

目的探究组织内星形胶质细胞活化基因-1(AEG-1)表达情况对葡萄膜恶性黑色素瘤(UM)病理特征的影响。方法选取2016年3月~2018年8月我院眼科诊治的62例(62眼)于病理室存放的UM石蜡组织标本纳入研究组。并选取同期20例(20眼)因外部原因受伤采取眼球摘除术但少量UM或绝大部分葡萄膜组织正常的石蜡组织标本作为对照组。对比分析两组患者AEG-1基因表达情况以及AEG-1表达情况与UM病理特征的相关性。结果UM组织中AEG-1 mRNA相对表达量为(1.09±0.05),正常葡萄膜膜组织中AEG-1 mRNA相对表达量为(1.01±0.12),差异有统计学意义(P<0.05);研究组62例(62眼)AEG-1阳性表达为37眼(59.68%),阴性表达为25眼(40.32%);对照组20例(20眼)AEG-1均呈阴性表达,差异有统计学意义(P<0.05);肿瘤高度>8 mm、累及睫状体、侵犯巩膜导管、眼外生长、视盘受累以及继发视网膜脱落与AEG-1高表达均有明显相关性(P<0.05)。结论UM高度>8 mm、累及睫状体、侵犯巩膜导管、眼外生长、继发视网膜脱落及视盘受累病理特征均与AEG-1的高表达具有密切联系,显著影响UM转移风险和预后,为UM临床诊断和治疗提供有效参考。

甲下恶性黑色素瘤28例临床病理分析

目的:探讨原发甲下恶性黑色素瘤的临床病理特征。方法:回顾性分析2013年1月至2022年06月山东第一医科大学附属皮肤病医院病理科28例甲下恶性黑色素瘤的临床病理资料。结果:28例甲下恶性黑色素瘤中,男12例、女16例,平均年龄50岁,好发于拇指,临床表现为甲黑线、甲破坏等,黑线宽度均>3 mm,哈钦森征阳性9例;组织学类型主要为肢端雀斑样痣型,细胞组成主要为上皮样细胞,免疫组化SOX10比S100表达阳性率高;28例中随访16例7例扩大切除8例局部截肢治疗1例化疗后死亡。12例失访。结论:甲下恶性黑色素瘤有不同于其他部位恶性黑色素瘤的临床病理学特点,临床与病理均易误诊。对于年龄大于50岁,临床表现为甲黑线,宽度>3 mm,哈钦森阳性的患者均应警惕甲下恶性黑色素瘤,应及时做病理检查。

miR-26a对葡萄膜黑色素瘤细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响及机制研究

目的分析miR26a在葡萄膜黑色素瘤中的表达及对葡萄膜黑色素瘤细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响。方法对葡萄膜黑色素瘤细胞系SP6.5、M23及正常葡萄膜上皮细胞系ARPE-19行RT-PCR实验,检测3种细胞系中miR-26a的相对表达差异;将葡萄膜黑色素瘤细胞系SP6.5分成miR-26a模拟物组和NC组,分别转染miR-26a mimics和对照序列scramble,用CCK-8实验和流式细胞术分别检测两组细胞增殖和凋亡;采用细胞划痕实验及Transwell实验分别检测两组细胞的迁移和侵袭能力;采用Western blot检测其下游蛋白组蛋白甲基化转移酶果蝇zeste基因增强子同源物2(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)的表达水平。结果葡萄膜黑色素瘤细胞系SP6.5中miR-26a相对表达量为0.250±0.029,细胞系M23中为0.350±0.017,正常葡萄膜上皮细胞系ARPE-19中miR-26a相对表达量为1.0,在细胞系SP6.5及M23中miR-26a的相对表达量均低于正常葡萄膜上皮细胞系ARPE-19中miR-26a的相对表达量(均为P<0.001)。miR-26a模拟物组在培养72 h、96 h、120 h OD450值(0.69±0.09、1.23±0.15、2.12±0.23)均显著低于NC组(1.39±0.11、2.35±0.25、3.53±0.27),差异均有统计学意义(均为P<0.05)。miR-26a模拟物组细胞凋亡率(15.60±2.30)%高于NC组(5.00±0.70)%(P<0.01);miR-26a模拟物组划痕愈合率(23.7±2.1)%低于NC组(68.9±5.1)%(P<0.01);侵袭细胞数(45.1±3.9)个低于NC组(115.3±8.9)个(P<0.01)。miR-26a模拟物组EZH2蛋白相对表达量(0.39±0.09)低于NC组(1.0;P<0.01)。结论 miR-26a在葡萄膜黑色素瘤中低表达,过表达miR-26a显著抑制葡萄膜黑色素瘤细胞增殖,促进凋亡,并抑制迁移和侵袭,其可能是通过下调EZH2的表达来发挥作用的。

葡萄膜黑色素瘤的MRI诊断

目的探讨MRI对葡萄膜黑色素瘤的诊断价值。资料与方法对35例葡萄膜黑色素瘤患者行MRI横断面、冠状面、斜矢状面平扫及增强扫描。结果35例黑色素瘤患者中27例在T1WI表现为高信号,8例为等信号,T2WI上均为低信号,增强后为中度至明显强化。21例继发的视网膜脱离在T1WI上为高信号,T2WI上为等或高信号,无强化。结论MRI可对肿瘤进行精确定位,同时能显示肿瘤的大小和信号特征,有助于对葡萄膜黑色素瘤的诊断及鉴别诊断。

MiR-127-3p靶向MAPK4对葡萄膜黑色素瘤细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响

[目的]探讨miR-127-3p对葡萄膜黑色素瘤细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的作用。[方法]通过RT-qPCR检测人葡萄膜黑色素瘤组织及细胞、正常组织及细胞中miR-127-3p与MAPK4mRNA的表达;通过Lipofectamine2000说明书将mimic-NC、miR-127-3pmimic、pc-MAPK4质粒分别或联合转染进入SP6.5或OM431细胞;通过双荧光素酶报告检测miR-127-3p与MAPK4复染靶向关系;通过CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell法检测细胞侵袭能力,蛋白印迹法检测AKT/mTOR通路蛋白相对表达水平。[结果]在葡萄膜黑色素瘤组织和细胞系中,miR-127-3p表达明显下调(P<0.01),而MAPK4表达明显上调(P<0.01);miR-127-3p与MAPK43′UTR区存在结合位点,miR-127-3p高表达明显抑制了含有野生型MAPK4质粒的荧光素酶活性(P<0.01),但对突变型MAPK4质粒的荧光素酶活性无影响;与Control组相比,miR-127-3pmimic组SP6.5细胞和OM431细胞增殖均明显下降(P<0.01),凋亡率均明显增加(P<0.01),划痕闭合率均明显降低(P<0.01),每视野侵袭细胞数目均明显减少(P<0.01),p-AKT(T308)/AKT、p-mTORr(S473)/mTOR蛋白表达均明显下调(P<0.01),共转染pc-MAPK4逆转上述变化。[结论]M iR-127-3p通过靶向下调MAPK4来抑制葡萄膜黑色素瘤细胞增殖、迁移和侵袭,诱导细胞凋亡,这可能与抑制AKT/mTOR通路激活有关。

TGF-βRⅡ和Smad4蛋白在葡萄膜黑色素瘤中的表达

目的研究转化生长因子Ⅱ型受体(TGFβRⅡ)及其下游的抑癌基因Smad4蛋白在葡萄膜黑色素瘤中的表达。方法应用免疫组织化学SP法对24例葡萄膜黑色素瘤瘤组织中TGFβRⅡ和Smad4蛋白的表达进行检测。结果在24例葡萄膜黑色素瘤组织切片中,可见瘤细胞TGFβRⅡ阳性12例(50%),Smad4阳性11例(45.8%),两者均阳性5例,两者均阴性6例。结论葡萄膜黑色素瘤组织中存在TGFβRⅡ和/或Smad4的蛋白表达异常,可能与葡萄膜黑色素瘤的发病有关。

miR-34a对葡萄膜黑色素瘤细胞生物学行为的抑制作用及其机制

目的研究微小RNA-34a(miR-34a)对葡萄膜黑色素瘤细胞生物学行为的影响及其机制。方法采用葡萄膜黑色素瘤M23细胞作为研究对象,在细胞中分别转染miR-34a mimics和mimics阴性对照,分别记作miR-34a转染组和阴性对照组,设置不转染的细胞为正常对照组。采用real-time PCR法检测转染后miR-34a过表达效果,MTT法检测细胞增生情况,Transwell小室试验检测细胞侵袭和迁移。靶基因预测库预测miR-34a的靶基因,荧光素酶报告载体鉴定靶基因,real-time PCR和Western blot法检测靶基因的mRNA和蛋白表达。在M23细胞中共转染miR-34a mimics和小眼畸形相关转录因子(MITF)过表达载体,采用MTT法和Transwell小室试验分别检测细胞增生、侵袭和迁移能力变化,real-time PCR和Western blot法检测MITF mRNA和蛋白表达。结果转染miR-34a mimics后的M23细胞中miR-34a表达水平升高。正常对照组、阴性对照组和miR-34a转染组间细胞增生值、侵袭细胞数目和迁移细胞数目总体比较,差异均有统计学意义(F=18.000,P=0.003;F=20.345,P=0.002;F=15.717,P=0.004),其中miR-34a转染组较正常对照组、阴性对照组细胞增生值减小,侵袭细胞数目和迁移细胞数目减少,差异均有统计学意义(均P<0.05)。靶基因预测库及荧光素酶活性报告基因载体显示,MITF为miR-34a的靶基因。miR-34a转染组MITF mRNA和MITF蛋白的相对表达量分别为0.45±0.06和0.36±0.04,阴性对照组分别为0.99±0.11和0.62±0.05,正常对照组分别为1.00±0.07和0.63±0.08,miR-34a转染组MITF mRNA和蛋白表达水平明显低于阴性对照组和正常对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。miR-34a+MITF组细胞增生值(A570)、侵袭细胞数目和迁移细胞数目分别为0.35±0.02、(29.48±3.20)个和(41.87±5.82)个,明显高于miR-34a+Vector组的0.26±0.03、(18.53±1.47)个和(27.64±2.45)个,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论miR-34a具有抑制葡萄膜黑色素瘤细胞恶性表型的作用,其作用机制与抑制靶基因MITF的表达有关。