葡萄苦腐病菌的分子检测方法

葡萄苦腐病菌(Greeneria uvicola)是我国检疫性有害生物。本研究根据G.uvicola的ITS基因序列,设计了PCR引物GUA-1和GUA-2以及实时荧光PCR引物GUA-P1和GUA-P2及荧光探针GUA-Probe-117。利用引物GUA-1和GUA-2进行PCR扩增,G.uvicola和感染G.uvicola的红提葡萄可产生354 bp的特异性片段;实时荧光PCR扩增,G.uvicola和感染G.uvicola的红提葡萄均出现强荧光信号(△Rn)增加。而葡萄上其他常见真菌样品以及健康的红提葡萄既无特异性扩增也无荧光信号增加。灵敏度测试中,普通PCR可检测到含G.uvicolaDNA浓度0.05ng/μL以上的样品,实时荧光PCR可检测到含G.uvicolaDNA浓度0.0005 ng/μL以上的样品。由此确立了G.uvicola的两种稳定可靠、灵敏的分子检测方法。

来自于台湾地区葡萄苦腐病菌的检疫鉴定

自来源于台湾的船检葡萄样品上,采用常规平板分离法获得1株疑似葡萄苦腐病菌(Greeneria uvicola)的菌株,编号7407。该菌株在PDA上产生分生孢子盘和大量分生孢子,未见有性阶段。经rDNA ITS基因序列比对分析,发现该菌株与GenBank中多个葡萄苦腐病菌菌株的ITS基因序列一致性达99%以上,位于同一个发育分支。经特异性引物GUA-1/GUA-2扩增,可产生354 bp的DNA条带。致病性测定结果表明,该菌株可侵染葡萄果实,引起典型的葡萄苦腐病菌为害症状。以上结果表明,来自于台湾的葡萄携带葡萄苦腐病菌(Greeneria uvicola),这是我国口岸首次截获该种检疫性真菌。