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葡萄茎痘伴随病毒cDNA探针检测技术研究
被引量:
5
1
作者
牛建新
李西平
+2 位作者
张强
赵英
马兵钢
《西北农业学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第3期239-243,共5页
选取经RT-PCR检测确认带葡萄茎痘伴随病毒的全球红葡萄品种,以葡萄叶片、皮层作为试材,采用SDS法提取高质量总RNA作为模板,以GRSPaV的特异互补引物引导,反转录合成cDNA,通过PCR扩增,获得830 bp的预期目的片段,并将其克隆测序,其同源性与...
选取经RT-PCR检测确认带葡萄茎痘伴随病毒的全球红葡萄品种,以葡萄叶片、皮层作为试材,采用SDS法提取高质量总RNA作为模板,以GRSPaV的特异互补引物引导,反转录合成cDNA,通过PCR扩增,获得830 bp的预期目的片段,并将其克隆测序,其同源性与NCBI中的相关序列的同源性达96%。利用克隆质粒合成了生物素标记的GRSPaV的cDNA探针,在此基础上,研究了影响GRSPaV斑点杂交的因素,结果表明当探针浓度为200 ng/mL,甲酰胺浓度为45%,42℃杂交反应4 h,可获得较高灵敏度。
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关键词
葡萄茎痘伴随病毒
CDNA探针
检测
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职称材料
利用内标为基础的RT-PCR技术检测葡萄茎痘伴随病毒
被引量:
2
2
作者
牛建新
李西平
+2 位作者
赵英
张强
马兵钢
《园艺学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第5期1083-1086,共4页
选取经RT-PCR检测确认带葡萄茎痘伴随病毒的‘全球红’葡萄品种。以葡萄叶片、韧皮部作为试材,采用SDS法提取高质量总RNA作为模板,以GRSPaV的特异互补引物引导,反转录合成cDNA,通过PCR扩增,获得830bp的预期目的片段。以线粒体nad5基因...
选取经RT-PCR检测确认带葡萄茎痘伴随病毒的‘全球红’葡萄品种。以葡萄叶片、韧皮部作为试材,采用SDS法提取高质量总RNA作为模板,以GRSPaV的特异互补引物引导,反转录合成cDNA,通过PCR扩增,获得830bp的预期目的片段。以线粒体nad5基因为内标,建立了GRSPaV与nad5共扩增体系,将扩增的GRSPaV特异性片段及nad5目的片段分别克隆测序,与NCBI中所提交的核酸序列进行比对,GRSPaV与序列号AF057136的同源性达96%;nad5与序列号D37958的同源性达96·67%。
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关键词
葡萄茎痘伴随病毒
RT-PCR
had5
检测
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职称材料
沙地葡萄茎痘伴随病毒双重巢式RT-PCR检测方法的建立与应用
被引量:
1
3
作者
胡国君
张尊平
+4 位作者
范旭东
任芳
翟秀丽
时晓燕
董雅凤
《中国果树》
北大核心
2022年第8期39-43,共5页
根据GenBank数据库中的沙地葡萄茎痘伴随病毒(grapevine rupestris stem pitting-associated virus,GRSPaV)全基因组序列设计了2组巢式RT-PCR检测引物repF1/R1→repF2/R2和cpF1/R1→cpF2/R2,扩增片段分别为902 bp和438 bp。通过对第1轮...
根据GenBank数据库中的沙地葡萄茎痘伴随病毒(grapevine rupestris stem pitting-associated virus,GRSPaV)全基因组序列设计了2组巢式RT-PCR检测引物repF1/R1→repF2/R2和cpF1/R1→cpF2/R2,扩增片段分别为902 bp和438 bp。通过对第1轮PCR扩增中引物组合repF1/R1-cpF1/R1、dNTPs、Taq DNA聚合酶和cDNA用量的优化,以及第2轮PCR扩增中引物组合repF2/R2-cpF2/R2、dNTPs和Taq DNA聚合酶用量的优化,建立了GRSPaV双重巢式RT-PCR检测方法。采用该方法对109份葡萄样品进行检测,结果显示,2对普通PCR引物RSP 52/53和RSP 9F/9R的合计检出率为65.1%,2组单一巢式PCR引物repF1/R1→repF2/R2和cpF1/R1→cpF2/R2的检出率总和为93.6%,而双重巢式PCR引物组合repF1/R1-cpF1/R1→repF2/R2-cpF2/R2的检出率也达到93.6%。该技术在保证检测效率的基础上降低了检测成本,适用于大量田间样品的检测。
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关键词
葡萄
沙地
葡萄茎痘伴随病毒
巢式RT-PCR
双重巢式RT-PCR
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职称材料
题名
葡萄茎痘伴随病毒cDNA探针检测技术研究
被引量:
5
1
作者
牛建新
李西平
张强
赵英
马兵钢
机构
石河子大学农学院园艺系
出处
《西北农业学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第3期239-243,共5页
基金
国家自然科学基金资助项目(30060053
30360066)
+1 种基金
兵团科委项目(NKB02SDXNK01SW)
国家科技攻关计划引导项目(2003BA546C)
文摘
选取经RT-PCR检测确认带葡萄茎痘伴随病毒的全球红葡萄品种,以葡萄叶片、皮层作为试材,采用SDS法提取高质量总RNA作为模板,以GRSPaV的特异互补引物引导,反转录合成cDNA,通过PCR扩增,获得830 bp的预期目的片段,并将其克隆测序,其同源性与NCBI中的相关序列的同源性达96%。利用克隆质粒合成了生物素标记的GRSPaV的cDNA探针,在此基础上,研究了影响GRSPaV斑点杂交的因素,结果表明当探针浓度为200 ng/mL,甲酰胺浓度为45%,42℃杂交反应4 h,可获得较高灵敏度。
关键词
葡萄茎痘伴随病毒
CDNA探针
检测
Keywords
Grapevine Rupestris Stem Pitting associated Virus (GRSPaV)
eDNA prob
Detection
分类号
S436.631 [农业科学—农业昆虫与害虫防治]
下载PDF
职称材料
题名
利用内标为基础的RT-PCR技术检测葡萄茎痘伴随病毒
被引量:
2
2
作者
牛建新
李西平
赵英
张强
马兵钢
机构
石河子大学农学院园艺系
出处
《园艺学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第5期1083-1086,共4页
基金
国家自然科学基金资助项目(30060053
30360066)
+1 种基金
兵团科委项目(NKB02SDXNK01SW)
国家科技攻关计划引导项目(2003BA546C)
文摘
选取经RT-PCR检测确认带葡萄茎痘伴随病毒的‘全球红’葡萄品种。以葡萄叶片、韧皮部作为试材,采用SDS法提取高质量总RNA作为模板,以GRSPaV的特异互补引物引导,反转录合成cDNA,通过PCR扩增,获得830bp的预期目的片段。以线粒体nad5基因为内标,建立了GRSPaV与nad5共扩增体系,将扩增的GRSPaV特异性片段及nad5目的片段分别克隆测序,与NCBI中所提交的核酸序列进行比对,GRSPaV与序列号AF057136的同源性达96%;nad5与序列号D37958的同源性达96·67%。
关键词
葡萄茎痘伴随病毒
RT-PCR
had5
检测
Keywords
Grapevine rupestris stem pitting associated virus (GRSPaV)
RT-PCR
nad5
Detection
分类号
S663.1 [农业科学—果树学]
S436 [农业科学—农业昆虫与害虫防治]
下载PDF
职称材料
题名
沙地葡萄茎痘伴随病毒双重巢式RT-PCR检测方法的建立与应用
被引量:
1
3
作者
胡国君
张尊平
范旭东
任芳
翟秀丽
时晓燕
董雅凤
机构
中国农业科学院果树研究所
赤峰市森林草原保护发展中心
出处
《中国果树》
北大核心
2022年第8期39-43,共5页
基金
财政部和农业农村部:国家现代农业产业技术体系资助
中国农业科学院科技创新工程资助。
文摘
根据GenBank数据库中的沙地葡萄茎痘伴随病毒(grapevine rupestris stem pitting-associated virus,GRSPaV)全基因组序列设计了2组巢式RT-PCR检测引物repF1/R1→repF2/R2和cpF1/R1→cpF2/R2,扩增片段分别为902 bp和438 bp。通过对第1轮PCR扩增中引物组合repF1/R1-cpF1/R1、dNTPs、Taq DNA聚合酶和cDNA用量的优化,以及第2轮PCR扩增中引物组合repF2/R2-cpF2/R2、dNTPs和Taq DNA聚合酶用量的优化,建立了GRSPaV双重巢式RT-PCR检测方法。采用该方法对109份葡萄样品进行检测,结果显示,2对普通PCR引物RSP 52/53和RSP 9F/9R的合计检出率为65.1%,2组单一巢式PCR引物repF1/R1→repF2/R2和cpF1/R1→cpF2/R2的检出率总和为93.6%,而双重巢式PCR引物组合repF1/R1-cpF1/R1→repF2/R2-cpF2/R2的检出率也达到93.6%。该技术在保证检测效率的基础上降低了检测成本,适用于大量田间样品的检测。
关键词
葡萄
沙地
葡萄茎痘伴随病毒
巢式RT-PCR
双重巢式RT-PCR
分类号
S436.631.19 [农业科学—农业昆虫与害虫防治]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
葡萄茎痘伴随病毒cDNA探针检测技术研究
牛建新
李西平
张强
赵英
马兵钢
《西北农业学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007
5
下载PDF
职称材料
2
利用内标为基础的RT-PCR技术检测葡萄茎痘伴随病毒
牛建新
李西平
赵英
张强
马兵钢
《园艺学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006
2
下载PDF
职称材料
3
沙地葡萄茎痘伴随病毒双重巢式RT-PCR检测方法的建立与应用
胡国君
张尊平
范旭东
任芳
翟秀丽
时晓燕
董雅凤
《中国果树》
北大核心
2022
1
下载PDF
职称材料
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