两种葫芦科病毒的分子检测和致病性研究

小西葫芦黄化花叶病毒 (ZYMV)和黄瓜花叶病毒 (CMV)是浙江及其周边地区侵染葫芦科植物最主要的病毒种类。本文通过RT PCR和基因克隆 ,获得了侵染南瓜的CMV杭州分离物 (HZ0 1S10 )的 3' 端序列 ,通过CP氨基酸序列同源性分析 ,确定其属于CMV亚组I;分别以3 2 P标记的ZYMV和CMV基因组cDNA作为探针 ,用RNA点杂交方法定点检测了浙江地区自然感病的葫芦科作物中以上 2种病毒的发生情况。ZYMV和CMV在葫芦科作物上的发生表现出显著的季节性差异 :夏季CMV发生普遍 ,只有部分南瓜和甜瓜感染ZYMV ;ZYMV则主要发生在秋季 ,同一时期未检测到CMV。此外 ,幼苗期接种试验显示 :以上 2种病毒对西葫芦 (早青一代 )、丝瓜 (中长 )、黄瓜 (津绿 4号 )的致病性存在明显差异 ,供试西葫芦对ZYMV比较敏感 ,供试丝瓜对CMV更敏感 ,而供试黄瓜品种对以上 2种病毒均表现抗病。

4种葫芦科植物病毒复合胶体金免疫层析试纸条的研制

使用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,在pH值7.6,蛋白用量10～15μg/mL条件下,制备形成4种葫芦科植物病毒多克隆抗体的稳定胶体金蛋白复合物;设计了双向复合试纸条,使用微定量喷头在试纸条两侧的硝酸纤维素膜上分别喷2条病毒检测线和1条质控线,组装制成免疫层析检测试纸条。结果表明经过条件优化后制备的双向复合试纸条特异性好,可在10min内同时检测4种葫芦科植物病毒,且对不同病毒阳性材料的检测灵敏度可达到稀释103倍以上。