葫芦素B通过AKT/mTOR和MAPK信号通路诱导非小细胞肺癌细胞自噬

目的:观察葫芦素B(Cucurbitacin B,CuB)对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞自噬的影响,探讨其可能的机制。方法:应用CCK-8法测定不同浓度CuB对A549细胞及H1299细胞增殖能力的影响。应用丹酰戊二胺(monodansylcadaverine,MDC)染色,荧光显微镜下观察细胞自噬,应用透射电镜观察自噬小体和自噬溶酶体。另外,应用自噬双标腺病毒(mRFP-GFP-LC3)进行转染,使用共聚焦显微镜观察药物处理后的自噬流变化。Western blot方法检测自噬相关标志物LC3II/I、p62及Beclin-1的表达水平变化。应用Western blot考察AKT、mTOR、ERK、p38、JNK蛋白及其磷酸化蛋白表达水平变化。结果:CuB呈剂量依赖抑制A549及H1299细胞增殖。MDC染色荧光显微镜下观察,药物处理组可见明显绿色致密斑点;药物处理48 h后透射电镜观察可见自噬溶酶体;mRFP-GFP-LC3转染A549及H1299细胞后显示CuB组红色荧光增加,提示自噬流增加;0.04μmol/L的CuB处理A549及1299细胞48 h后,LC3II/I及Beclin-1的蛋白表达增加,p62表达水平降低,AKT及mTOR蛋白磷酸化水平表达降低,ERK、JNK、p38 MAPK磷酸化蛋白水平升高。结论:本研究首次阐明了CuB在非小细胞肺癌中具有诱导自噬的能力,这种作用可能与抑制AKT/mTOR、激活MAPK信号通路有关。

葫芦素B诱导人结直肠癌细胞铁死亡的分子机制研究

为了探究葫芦素B(Cucurbitacin B,CuB)的抗结肠癌活性,并明确铁死亡在CuB发挥抗癌作用中的关键作用及其分子机制。本文将人结肠癌细胞HCT-116作为研究对象,评价了CuB的抗结肠癌活性,检测了铁死亡相关指标如细胞内铁离子浓度、谷胱甘肽(Glutathione,GSH)含量和乳酸脱氢酶(Lactatedehydrogenase,LDH)水平,并采用网络药理学分析、代谢组学分析、分子对接及分子动力学模拟,探究了CuB抑制结肠癌的作用机制。结果表明,CuB能显著(P<0.05)抑制人结肠癌细胞HCT-116增殖,半数抑制浓度(IC50)为64.48 nmol/L。此外,CuB可以降低细胞内GSH含量、促进总铁离子的积累和LDH的释放,并且铁死亡抑制剂Fer-1能够逆转CuB诱导的LDH释放。网络药理学分析和代谢组学分析结果表明,CuB抑制结肠癌的作用机制与铁死亡密切相关的谷胱甘肽代谢途径有关。随后,分子对接结果提示CuB能与谷胱甘肽代谢通路中的关键蛋白SLC7A11和GPX4分别以-4.819和-3.833的得分结合,分子动力学模拟结果表明CuB与SLC7A11的结合具有较好的结构稳定性、波动性以及能量稳定性。由此,本研究发现CuB可以通过诱导人结肠癌细胞HCT-116中铁死亡的发生来发挥抗癌作用。

葫芦素B预防小鼠脓毒症急性肺损伤的作用及机制

目的研究葫芦素B(CB)对脓毒症急性肺损伤(ALI)的预防作用及机制。方法将小鼠分为对照组、模型组、地塞米松组(阳性对照,2 mg/kg)和CB低、高剂量组(25、50 mg/kg),各组小鼠腹腔注射相应药物,每天1次,连续3 d。末次给药24 h后,除对照组小鼠外,其余各组小鼠采用腹腔注射脂多糖(10 mg/kg)的方法构建脓毒症ALI模型(每组8只小鼠纳入实验)。24 h后,检测小鼠血常规指标(全血中白细胞总数、中性粒细胞数、淋巴细胞数)、肺功能指标(肺总阻力、肺出气阻力、肺动态顺应性、呼气峰值流速和最大通气量)、肺组织干湿比;检测小鼠肺组织中髓过氧化物酶(MPO)水平和血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平;观察小鼠肺组织病理学形态;免疫组化法检测小鼠肺组织中磷酸化信号转导及转录活化因子3(p-STAT3)阳性表达情况;Western blot法检测小鼠肺组织IL-6/Janus激酶2(JAK2)/STAT3信号通路相关蛋白表达水平。结果与对照组比较,模型组小鼠肺总阻力、肺出气阻力、肺组织干湿比,全血中白细胞总数、中性粒细胞数、淋巴细胞数,肺组织中MPO水平,血清中MDA、IL-6、IL-1β、TNF-α水平,p-STAT3蛋白光密度值以及IL-6、IL-6受体(IL-6R)蛋白表达水平和JAK2、STAT3蛋白磷酸化水平均显著升高(P<0.01);肺动态顺应性、呼吸峰值流速、最大通气量和血清中SOD水平均显著降低(P<0.05或P<0.01),肺组织出现肺泡塌陷和炎症细胞浸润。与模型组比较,地塞米松组和CB各剂量组小鼠上述指标均显著逆转(P<0.05或P<0.01),肺组织病理损伤减轻。结论CB可能通过抑制IL-6/JAK2/STAT3信号通路活性,减轻炎症反应,进而预防小鼠脓毒症ALI。

葫芦素B诱导消化系统肿瘤细胞凋亡的研究进展

葫芦素B,一种由葫芦科植物所产生的四环三萜类化合物,其多种药效如保护肝脏、抵御炎症、对抗化学诱导的癌症、对抗肿瘤以及提升身体的免疫功能。当前,葫芦素B的抗肿瘤活性逐渐成为国内外研究热点。近年来,消化道肿瘤的发病率、病死率逐年上升,对人民的身体健康带来严重的威胁,消化道肿瘤的防治工作任重道远。体内外研究表明:葫芦素B能明显抑制胰腺癌、肝癌、结肠癌等消化道肿瘤细胞增殖并诱导其凋亡,其可能主要作用机制包括:Bcl-2蛋白酶家族的蛋白表达,有助于推动细胞色素C的释放、阻滞细胞周期的正常进行、诱导细胞内活性氧产生、抑制肿瘤细胞横向迁移及纵向侵袭能力等方面。该文对葫芦素B诱导消化系统肿瘤细胞凋亡的作用及其可能机制进行综述。

葫芦素B通过p53及mTOR信号通路调控骨肉瘤细胞的增殖、迁移、侵袭和凋亡

目的:探究葫芦素B(cucurbitacin B,CuB)对骨肉瘤细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响及其机制。方法:不同浓度的CuB干预骨肉瘤细胞系MG63和U2OS,CCK-8实验检测CuB对细胞活力的影响;克隆形成实验检测细胞增殖能力;划痕实验和Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭能力;流式细胞术检测细胞周期和凋亡情况;Western blot法检测细胞周期相关蛋白(CyclinB1、CDK1)、凋亡相关蛋白(Cleaved PARP、BCL-2)、上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transformation,EMT)相关蛋白(E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、MMP)、p53转录因子及磷脂酰肌醇激酶(phosphatidylinositol-3-hydroxykinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)/雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路相关蛋白的表达。结果:CuB抑制骨肉瘤细胞系MG63和U2OS的增殖、迁移和侵袭能力,抑制细胞的上皮间质转化过程,将细胞周期阻滞于G_(2)/M期,并促进细胞凋亡。此外,CuB上调了骨肉瘤细胞中p53转录因子的表达及其磷酸化,抑制了PI3K的表达及mTOR、AKT的磷酸化。结论:CuB抑制骨肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭,并促进细胞凋亡。这一作用可能与p53及PI3K/AKT/mTOR信号通路的调控有关。

葫芦素B对肾癌768-O细胞生物学行为的影响

目的 探究葫芦素B对肾癌细胞增殖、侵袭、转移和自噬的影响及其经由的细胞通路。方法 培养人肾癌768-O细胞,利用MTT细胞增殖实验,得到最佳作用浓度。即利用培养基饥饿过夜处理后加入不同浓度的(20、40、60、80 nmol/L)葫芦素B处理48 h,通过不同处理方法分为对照组、葫芦素B组、Akt通路抑制剂LY294002组、葫芦素B+LY294002组,分别通过MTT法、划痕实验、Transwell实验检测细胞增殖、迁移及侵袭能力4种处理方法分为对照组、葫芦素B组、Akt通路抑制剂LY294002组、葫芦素B+LY294002组;Western Blot实验检测t-Akt、p-Akt、N-cadherin、EGFR、LC3-Ⅱ蛋白的表达情况;免疫荧光实验检测细胞自噬情况。结果 葫芦素B呈浓度梯度抑制细胞增殖;葫芦素B组细胞增殖、迁移、侵袭明显低于对照组,自噬增加(P<0.01);Western Blot结果显示,与对照组相比,加入葫芦素B后,细胞的p-Akt、N-cadherin及EGFR蛋白表达减少,LC3-Ⅱ表达增加(P<0.01)。结论 葫芦素B在768-O肾癌细胞中通过下调EGFR、p-Akt、N-cadherin的表达,抑制肾癌细胞增殖、侵袭、转移,促进自噬。

基于代谢组学研究葫芦素B诱导人肝内胆管癌HuCCT1细胞凋亡的作用机制

目的探究葫芦素B(CuB)诱导人肝内胆管癌HuCCT1细胞凋亡的作用及机制。方法将HuCCT1细胞分为对照组,CuB给药低(50 nmol·L^(-1))、中(100 nmol·L^(-1))、高(200 nmol·L^(-1))剂量组,给予药物干预24 h,采用Annexin V/PI双染法和Hoechst染色法检测细胞凋亡情况。采用超高效液相色谱/四极杆飞行时间质谱(UHPLC-Q/TOF-MS)检测其主要差异代谢物,并分析其相关代谢通路。结果Annexin V/PI双染结果发现,与对照组相比,经CuB给予处理后HuCCT1细胞的凋亡比例从7.86%±0.73%增加到16.53%±0.27%,P<0.0001;Hoechst染色结果发现,与对照组相比,经200 nmol·L^(-1)CuB给予处理24 h后细胞结构被破坏,细胞破碎,边缘轮廓不规则,出现大量核固缩现象;代谢组学分析筛选出了20个显著的差异代谢物,主要涉及的代谢通路包括TCA循环、能量代谢、氨基酸代谢和脂质代谢等。结论CuB具有较好的抗肿瘤作用,可能是通过干扰HuCCT1细胞的多条代谢通路,引起细胞快速增殖的物质缺乏,最终导致细胞凋亡,而发挥药理作用。

葫芦素B调节Hippo-Yes相关蛋白通路对宫颈癌中调节性T细胞介导免疫逃逸的有关机制研究

目的探讨葫芦素B调节Hippo-Yes相关蛋白(YAP)通路对宫颈癌中调节性T细胞(Treg)介导的免疫逃逸的影响。方法选取BALB/c裸鼠32只作为研究对象,皮下注射人宫颈癌Hela细胞建立裸鼠移植瘤模型,将造模成功的裸鼠按照随机数字表法分为CON组、葫芦素B组、LPA组和葫芦素B-LPA组,每组8只。CON组采用腹腔注射生理盐水,葫芦素B组和LPA组采用腹腔注射剂量0.5 mg/kg的葫芦素B和剂量为3 mg/kg的JAP激活剂LPA,葫芦素B-LPA组采用腹腔同时注射0.5 mg/kg的葫芦素B和3 mg/kg的LPA,每2天给药一次,共处理21 d后取材;采用ELISA试剂盒法比较各组裸鼠血清白介素-2(IL-2)、IL-10和转化生长因子-β_(1)(TGF-β_(1))水平;采用流式细胞术比较各组裸鼠淋巴细胞CD4^(+)、CD4^(+)CD25^(+)叉状头状螺旋转录因子3(Foxp3^(+))Treg水平;采用Western blot法比较各组瘤组织Foxp3、TGF-β、YAP、大肿瘤抑制基因1(LATS1)、哺乳动物不育系20样激酶1(MST1)蛋白表达。结果21 d后,葫芦素B组裸鼠的肿瘤质量、血清IL-2、IL-10、TGF-β_(1)表达、CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg/CD4^(+)比例、Foxp3、TGF-β、YAP蛋白表达低于CON组,LATS1、MST1蛋白表达高于CON组,差异有统计学意义(P<0.05);LPA组裸鼠的肿瘤质量、血清IL-2、IL-10、TGF-β_(1)表达、CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg/CD4^(+)比例、Foxp3、TGF-β、YAP蛋白表达高于CON组,差异有统计学意义(P<0.05);LPA组和CON组的LATS1、MST1蛋白表达比较,差异无统计学意义(P>0.05);葫芦素B-LPA组裸鼠的肿瘤质量、血清IL-2、IL-10、TGF-β_(1)表达、CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg/CD4^(+)比例、Foxp3、TGF-β、YAP蛋白表达高于葫芦素B组,低于LPA组,差异有统计学意义(P<0.05);葫芦素B-LPA组和葫芦素B组的LATS1、MST1蛋白表达比较,差异无统计学意义(P>0.05);葫芦素B-LPA组的LATS1、MST1蛋白表达高于LPA组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论葫芦素B可通过调节Hippo-YAP通路抑制宫颈癌中Treg介导的免疫逃逸。

葫芦素B诱导细胞铁死亡抑制肝癌Huh-7细胞增殖的机制

目的 研究葫芦素B(cucurbitacin B,Cu B)对肝癌Huh-7细胞增殖的影响及其作用机制。方法 CCK-8法检测不同浓度Cu B对Huh-7细胞的存活率;葫芦素B(0.5、1、2μmol·L^(-1))作用于Huh-7细胞24 h, EdU染色检测细胞增殖;DCFH-DA,C11-BODIPY和FeRhonox-1荧光探针分别检测细胞内活性氧水平,细胞内脂质过氧化水平和细胞内Fe^(2+)浓度;谷胱甘肽(GSH)试剂盒和丙二醛(MDA)试剂盒分别检测细胞内GSH和MDA水平;Real-time PCR和Western blot分别检测SLC7A11、GPX4、SLC40A1、Transferrin、Nrf2、HO-1的mRNA水平和蛋白表达情况;免疫共沉淀法检测GPX4蛋白的泛素化。结果 与对照组比较,随Cu B药物浓度增大,Huh-7细胞存活率逐渐降低,其IC50为0.96μmol·L^(-1);与对照组比较,不同剂量Cu B干预后,EdU阳性细胞明显减少(P<0.05);细胞内活性氧、脂质过氧化水平和Fe^(2+)浓度的荧光强度明显增强(P<0.05);同时细胞内脂质过氧化产物MDA的积累明显增多(P<0.05),而细胞内GSH水平明显下降(P<0.05);此外,不同剂量Cu B干预后,GPX4的mRNA水平和蛋白水平明显降低(P<0.05);而且Nrf2和HO-1的蛋白水平明显降低(P<0.05)。免疫共沉淀分析显示,Cu B促进了GPX4的泛素化和降解。结论 Cu B可能通过促进GPX4泛素化和降解诱导细胞铁死亡抑制肝癌细胞Huh-7增殖。

高速逆流色谱分离制备甜瓜蒂中葫芦素类化合物

采用高速逆流色谱法分离制备了甜瓜蒂中3种葫芦素类化合物。以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(1.2∶0.8∶0.8∶1.2,V/V)为两相溶剂系统,上相为固定相,下相为流动相。在主机转速800 r/min、流动相流速2.0 mL/min、分离温度25℃、检测波长254 nm条件下进行分离,所得产物纯度经HPLC检测,结构经MS、1 H-NMR和13 C-NMR鉴定。4 h内从200 mg经XAD-16大孔树脂预处理的粗提物中一步分离制备得到33.5mg葫芦素B、21.7 mg葫芦素E和14.9 mg葫芦素Ⅰ,纯度分别为99.1%、98.3%和97.5%,结构经鉴定与文献相符。

葫芦素B调控circ-ITCH对鼻咽癌细胞生物学行为的影响及其机制

目的探讨葫芦素(Cu)B对鼻咽癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其对circ-ITCH的调控作用。方法采用不同剂量(10、30、60 nmol/L)CuB处理鼻咽癌细胞5-8F(CuB-L组、CuB-M组、CuB-H组),正常培养的5-8F细胞为Con组;pcDNA、pcDNA-circ-ITCH分别转染入5-8F细胞(pcDNA组、pcDNA-circ-ITCH组);si-NC、si-circ-ITCH分别转染入5-8F细胞后加入CuB处理细胞(CuB-H+si-NC组、CuB-H+si-circ-ITCH组);采用CCK-8实验、平板克隆形成实验、Transwell小室实验检测5-8F细胞活力、克隆形成能力、迁移及侵袭能力;采用实时荧光定量(qRT)-聚合酶链反应(PCR)检测人永生化的正常鼻咽上皮细胞NP69、5-8F细胞及各组5-8F细胞中circ-ITCH的表达量;采用Western印迹检测基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9蛋白表达量。结果与Con组比较,CuB-L组、CuB-M组、CuB-H组细胞活力、克隆形成数、迁移及侵袭细胞数、MMP-2、MMP-9蛋白水平均明显降低,且不同剂量组比较差异有统计学意义(均P<0.05);与NP69细胞比较,5-8F细胞中circ-ITCH表达水平明显降低(P<0.05),而CuB不同剂量组中circ-ITCH表达水平明显升高(P<0.05);pcDNA-circ-ITCH组细胞活力、克隆形成数、迁移及侵袭细胞数、MMP-2、MMP-9蛋白水平均比pcDNA组明显降低(P<0.05);CuB-H+si-circ-ITCH组细胞活力、克隆形成数、迁移及侵袭细胞数、MMP-2、MMP-9蛋白水平均明显高于CuB-H+si-NC组(P<0.05)。结论CuB可通过上调circ-ITCH的表达从而减弱鼻咽癌细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭能力。

HPLC法同时测定葫芦素原料中葫芦素B和葫芦素E的含量

目的建立同时测定葫芦素原料中葫芦索B和葫芦素E含量的方法。方法采用HPLC法。色谱柱为Diamonsil C18柱（200mm×4．6mm，5μm），流动相为乙腈一水一冰醋酸（体积比50：50：0．1），流速为1．0mL·min^-1，柱温为室温，检测波长为234nm，进样量为20μL。结果葫芦素B和葫芦素E质量浓度分别在28．2-253．8mg·L^-1和2．02-18．18mg·L^-1内与峰面积呈良好的线性关系，平均回收率分别为100．1％（RSD=1．0％，n=9）和99．5％（RSD=0．83％n=9）。结论该方法快速、准确、重复性好，能更好的控制葫芦素原料的质量。

超高效液相色谱-大气压化学电离-三重四极杆质谱法同时测定血浆、尿液和瓜果类蔬菜中葫芦素B、E和I

建立了超高效液相色谱-三重四极杆质谱测定血浆、尿液和瓜果类蔬菜中葫芦素B、E和I的检测方法。血浆和尿液样品经固相支持液液萃取法(SLE)提取净化,瓜果类蔬菜样品经乙腈提取后用水稀释。以XBridge BEH C18色谱柱(100 mm×3.0 mm,2.5μm)为分析柱进行分离,以甲醇-0.025%(v/v)氨水溶液为流动相进行梯度洗脱。采用大气压化学电离源,在负离子、多反应监测(MRM)模式下检测,以夹竹桃甙作为内标物,基质工作曲线内标法定量血浆和尿液中3种葫芦素;以溶剂标准曲线外标法定量瓜果类蔬菜中的待测物。血浆和尿液中3种葫芦素的检出限均为0.03μg/L,平均加标回收率为89.0%~113%,相对标准偏差为1.7%~12.2%(n=6);瓜果类蔬菜中3种葫芦素的检出限为5~10μg/kg,平均加标回收率为87.6%~114%,相对标准偏差为4.1%~11.1%(n=6)。该法简单、灵敏、准确,已应用于食用苦葫芦瓜引起中毒的病人血浆和尿液,以及葫芦瓜的检测,并检出了葫芦素B。

葫芦素B通过靶向STAT3促进铁死亡抑制非小细胞肺癌的生长

目的葫芦素B(CuB)是一种具有特殊苦味和细胞毒性的四环三萜分子,具有广泛的生物活性。本研究探索CuB在非小细胞肺癌(NSCLC)中诱导铁死亡的可能。方法数据库综合分析结果揭示CuB介导的NSCLC铁死亡的潜在可能。通过蛋白-蛋白相互作用(PPI)网络预测CuB诱导NSCLC的枢纽靶点。利用分子对接、分子动力学检测CuB与枢纽靶点的结合效应。最后,通过体外实验包括脂质过氧化、活性氧、亚铁离子水平、线粒体膜电位测定和药物毒性分析、蛋白印迹、免疫荧光、热迁移等技术探究CuB诱导NSCLC铁死亡的潜在机制。结果网络药理学分析显示,CuB在NSCLC中介导26个铁死亡基因的改变,预测STAT3是其中最重要的靶点之一。使用KRAS-G12C突变的H358细胞进行体外实验验证。结果表明,CuB通过靶向STAT3诱导H358细胞铁死亡。结论本研究首次阐明了CuB在NSCLC中诱导铁死亡的潜力。CuB通过靶向STAT3诱导H358细胞铁死亡,为从天然产物中提取有效成分开发新的靶向铁死亡的肺癌治疗药物提供新的线索。

葫芦素B纳米混悬剂制备及其体内药动学研究

目的制备葫芦素B纳米混悬剂,并考察其体内药动学。方法高压均质法制备纳米混悬剂。以稳定剂种类、稳定剂与药物比例、均质次数为影响因素,粒径、PDI为评价指标,单因素试验优化处方,测定溶解度、稳定性,进行晶型分析。18只大鼠随机分为3组,分别灌胃给予葫芦素B、物理混合物、葫芦素B纳米混悬剂喷雾粉的0.5%CMC-Na混悬液(10 mg/kg),于0.5、1、2、3、4、8、10、12 h采血,UPLC-MS/MS法测定葫芦素B血药浓度,计算主要药动学参数。结果最优处方为稳定剂羟丙基纤维素+十二烷基硫酸钠(1∶1),稳定剂与药物比例3∶1,均质压力80 MPa,均质次数12次,平均粒径为200 nm,PDI为0.140,Zeta电位为-32 mV。纳米混悬剂溶解度明显高于原料药、物理混合物,在6个月内稳定性良好。葫芦素B以无定形状态存在于纳米混悬剂中。与原料药、物理混合物比较,纳米混悬剂t max缩短(P<0.01),t 1/2延长(P<0.05,P<0.01),C_(max)、AUC_(0~t)、AUC_(0~∞)升高(P<0.01),相对生物利用度与原料药相比增加至4.32倍。结论纳米混悬剂可改善葫芦素B溶出度、口服生物利用度。

西瓜葫芦素E变化规律及其相关基因关联分析

为探明西瓜(Citrullus lanatus)不同发育时期果实中葫芦素E积累机制,通过高效液相色谱法测定西瓜不同发育时期果实、叶片和茎蔓中葫芦素E含量,在葫芦科数据库中鉴定西瓜葫芦素E合成代谢关键基因,结合前期构建的转录组数据挖掘葫芦素E代谢相关关键基因,共筛选得到9个参与葫芦素E生物合成的候选基因,与其他葫芦科作物同源基因作同源性比对及系统进化树构建,初步推测细胞色素P450酶基因家族、氧化角鲨烯环化酶(OSC)基因、转录因子ClBt基因和乙酰转移酶(ACT)基因上调表达与西瓜果实中葫芦素E积累相关,Cla007078、ACT和OSC基因为西瓜葫芦素E合成代谢相关候选基因。研究为进一步探究西瓜葫芦素E积累相关基因功能提供参考。

本氏烟草中异源合成抗癌药物葫芦素前体

葫芦素具有显著的抗癌活性,解析其生物合成途径对异源生产葫芦素具有重要意义。葫芦素首先由葫芦二烯醇(Cuol)在氧化鲨烯环化酶(OSCs)家族的葫芦二烯醇合酶(CBS)催化下生成2,3-氧化鲨烯,后者在细胞色素P450(CYP)等酶催化下氧化修饰产生葫芦素系列化合物。本研究在建立高效的根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导的瞬时表达体系的基础上,将雪胆(Hemsleya chinensis Cogn.)CBS基因(HcOSC6)与截短的燕麦(Avena strigosa)3-羟基-3-甲基-戊二酰辅酶A还原酶基因(tHMGR)共表达,通过不断优化烟草共表达体系,将本氏烟草(Nicotiana benthamiana)叶片中的Cuol产量从2.832 mg/g(干重)提高到9.48 mg/g(干重)。同时,将雪胆的HcCYP87D20共渗入烟草叶片,获得葫芦素生物合成的重要中间体11-羰基-20β-羟基-葫芦二烯醇。本研究结果将为葫芦素的高效异源合成提供理论依据。

戒酒灵口服液中葫芦素B、葫芦素E的TLC鉴别和HPLC含量测定

目的：建立戒酒灵口服液中葫芦素B和葫芦素E的TLC鉴别和HPLC含量测定的方法，为建立戒酒灵口服液质量标准提供参考。方法采用TLC法对戒酒灵口服液中葫芦素B和葫芦素E进行定性鉴别，并采用HPLC法对二者进行含量测定。色谱条件：COSMOSIL C18色谱柱（250 mm ×4.6 mm，5μm）；乙腈（A）和0.2％醋酸-水溶液（B）梯度洗脱（0.0～15.0 min：30％～40％ A；15.0～40.0 min：40％～45％A）；检测波长为234 nm；柱温为室温；流速为1 mL／min；进样量为10μL。结果在TLC图中，戒酒灵口服液的供试品溶液分别与葫芦素B、E的对照品溶液在相同位置上显现暗斑。含量测定实验中，葫芦素B和葫芦素E质量浓度分别在0.01574～0.3148 mg／mL和0.003744～0.07488 mg／mL范围内与峰面积呈良好的线性关系，平均回收率分别为97.7％（RSD＝1.29％，n＝6）和98.4％（RSD＝1.68％，n＝6）。戒酒灵口服液中葫芦素B和葫芦素E的平均含量分别为0.36 mg／mL（ RSD＝0.85％，n＝6）和0.033 mg／mL（ RSD＝0.78％，n＝6）。结论此鉴别和含量测定方法简便、快捷、准确、可靠，能有效地对戒酒灵口服液的质量进行控制。

科学家研究首次揭示葫芦素的转运分子机制

中国农业科学院深圳农业基因组研究所联合国内多家科研单位围绕葫芦素的运输机制进行了深入研究,首次揭示了葫芦科瓜类作物中一种三萜化合物——葫芦素的转运分子机制,并阐明了葫芦素通过调节根际菌群的互作模式提高植物抗病性的新机制。相关研究成果发表在《自然—植物》。