葱属蔬菜作物叶绿体DNA提取及其质量评价体系的建立

为了探究不同提取方法对葱属蔬菜作物叶绿体DNA提取效果的影响,首先以大葱叶片为实验材料,采用高盐低p H值法和蔗糖DNase法,对其进行叶绿体DNA提取测试。结果表明,高盐低pH法优于蔗糖DNase法,其DNA纯度相似,A260/A280值分别1.984和1.977;产率差异大,分别为0.482μg/g FW (fresh weight, FW)和0.059μg/g FW,高盐低pH值法是蔗糖DNase法产率的8.17倍。随后,利用叶绿体MatK、线粒体Atp6和核LFY基因设计引物,根据各组引物自身的扩增效率,以试剂盒提取的总DNA为对照,分别对三种细胞器DNA拷贝数的比值进行评估研究,高盐低pH法提取叶绿体DNA含量是试剂盒法的78.38倍,而蔗糖DNase法为15.51倍,高盐低pH法是蔗糖DNase法的5.05倍。高盐低pH法提取的叶绿体DNA产率和含量均优于蔗糖DNase法,同时在此基础建立了细胞器DNA含量定量分析方法。随后我们用高盐低pH法对葱属蔬菜作物的洋葱、大蒜和韭菜进行了测试,获得了预期的效果。该研究为今后葱属作物高效、高纯度、无污染的叶绿体DNA提取和葱属蔬菜作物细胞器全基因组测序提供依据。