葱鳞葡萄孢菌诱导下韭菜RT-qPCR内参基因的筛选和验证

葱鳞葡萄胞菌引起的韭菜灰霉病是影响韭菜产量和品质的主要因素之一。为了筛选出感染灰霉病后韭菜叶片中稳定表达的内参基因用于基因定量表达分析,以模拟接种和接种葱鳞葡萄孢菌24、48、72 h的韭菜叶片为材料,基于前期的转录组测序结果选取UBC1、UBC2、UBQ1、UBQ2、GAPDH3、GAPDH4、TUB、EF-1α、40S RP、DDX、eIF-1A、PABP和DnaJ共13个基因为候选内参基因,利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术检测13个基因的表达情况,采用geNorm、NormFinder、BestKeeper软件和Reffinder在线程序对候选内参基因的表达稳定性进行评估。结果表明,13个候选内参基因中UBQ1的Ct值变化范围最小,表达水平最稳定。GeNorm、NormFinder和BestKeeper软件筛选出的最佳内参基因不同,RefFinder综合评估显示,UBC2和UBQ1是韭菜叶片接种葱鳞葡萄孢菌后表达稳定性较好的基因,DDX是稳定性较差的基因。为了验证所筛选内参基因的可靠性,选择6个稳定性不同的候选内参基因分别作为定量分析的内部参照,对接种葱鳞葡萄孢菌后不同时间韭菜叶片中GST676和PRP902基因的表达水平进行归一化处理。结果显示,以稳定性较高的UBC2或UBQ1为内参基因时,校正的GST676和PRP902基因的表达趋势与转录组测序结果一致,而以稳定性相对较差的40S RP、eIF-1A、GAPDH4或DDX为内参基因时,校正的目的基因的表达趋势与转录组测序结果稍有差异。软件分析和实验验证结果表明,UBC2和UBQ1基因可作为葱鳞葡萄孢菌侵染韭菜叶片后相关基因定量表达分析的最合适内参基因。研究结果为后续开展韭菜抗灰霉病关键基因表达分析和功能研究奠定了基础。

侵染葱鳞葡萄孢的一种新型dsRNA病毒

测定了葱鳞葡萄孢（Botrytissquamosa）菌株LeekBc-10和GarlicBc-2的菌丝生长速度、致病力和菌株LeekBc-10中一种dsRNA病毒的eDNA序列及其推定编码的蛋白质序列，并对该病毒进行了系统进化分析。结果表明：菌株OarlicBc-2菌丝生长较快、致病力较强，菌株LeekBc-10菌丝生长较慢、致病力较弱。菌株Leek-Bc-10菌丝中有2条dsRNA片段（dsRNA-1和dsRNAu2），序列测定表明：dsRNA-1和dsRNA-2核苷酸序列与相对应BotrytisporriRNAvirus1（BpRV1）中2条dsRNA片段的相似性分别为91．7％和97．7％，故可判断菌株LeekBc-10中的dsRNA是一种真菌病毒，暂时命名为BotrytissquareosaRNAvirus1（BsRV1）。BsRV1中dsRNA-1和dsRNA-2分别含有一个大的开放阅读框（ORF），即ORFⅠ和ORFⅡ，各自编码长度为1901和1788个氨基酸的假定蛋白，且分别与BpRV1中的对应假定蛋白的相似度为97．1％和98．7％。对BsRVlORFl编码的假定蛋白的分析表明：该蛋白含有RdRp-4（RNAdependemRNApolymerase）超家族蛋白的保守结构域。BsRVl的RdRp与Totiviridae、Chrysoviridae和Megabirnaviridae等科病毒的RdRp同源性为19％～23％，且具有上述病毒RdRp的8个保守结构域。系统发育分析表明：BsRVl与BpRVl聚在一起形成一个独立分支，属于同一种病毒，且不能归到任何已有的病毒科中，因而可能代表一个新的病毒科。

葱鳞葡萄孢与灰葡萄孢毒素及其致病性的探索

葱鳞葡萄孢Botrytis squamosa(简称B.s.,下同)为韭菜、葱、蒜灰霉病病原;灰葡萄孢B.cinerea(简称B.c.,下同)引起黄瓜、番茄等多种蔬菜的灰霉病,均为保护地重要病害。试验探索了B.s.、B.c.毒素的提取方法,并用生物测定(毒素浸茎及抑制种子根),初步明确毒素粗提液可抑制种子根伸长,抑制率59.2％-79.05％,抗病品种抑制率低于感病品种,毒素浸茎出现典型的灰霉症状。

葱鳞葡萄孢菌的异核现象

本文报导了葱鳞葡萄孢菌(Botrytis squamosa)的异核现象。采用荧光染色法证实了该菌的分生孢子和菌丝细胞均是多核的。以该菌的自然形态和生长特征为遗传标记,在193个单孢子培养物中获得了三种菌型:菌核型(S)、菌丝型(M)、界于菌核和菌丝之间的菌核菌丝型(SM)。SM型在形态上与原始菌株相同。S型和M型在连续的传代过程中其特征保持稳定,因而被认为是同核型。SM型在连续传代过程中是不稳定的,且一再分离出S型和M型,因此被认为是异核型。用传代稳定的S型和M型重新合成的异核体在特征上相同于原始菌株和SM型。用这个合成的异核体再次进行单孢子分离,三种菌型重新被获得。三种菌型在致病力方面没有表现出显著的差异。

韭菜灰霉病病原鉴定及其生物学特性

以斑点型韭菜灰霉病的病原菌为研究对象,采用柯赫氏法则、形态特征观察及SCAR标记检测等方法,对病原菌进行了鉴定,并研究了病原菌的生物学特性,以期为韭菜灰霉病的科学防治提供参考依据。结果表明:斑点型韭菜灰霉病的病原菌为葱鳞葡萄孢(Botrytis squamosa),其菌丝生长对环境条件的适应性很强,对光照不敏感,在葡萄糖、果糖、肌醇和D-半乳糖为碳源,pH 5.0~7.0的弱酸性培养基中,温度为15~25℃的冷凉条件下均能生长良好。葱鳞葡萄孢菌丝生长的最适碳源是葡萄糖,最适pH为6.0,最适温度为20℃,高温对菌丝生长有明显的抑制作用,30℃时,菌丝生长显著变慢,35℃时,菌丝停止生长。

大棚蔬菜灰霉病与缺素有关吗

手机尾号为7865的用户问：大棚蔬菜灰霉病与缺素有关吗？ 专家解答：灰霉病与缺素没有关系。灰霉病主要由病原菌引起。侵染蔬菜的病原菌主要有两种：一种是灰葡萄孢菌（Botrytis cinerea），可侵染番茄、茄子、黄瓜、西葫芦、草莓、葡萄、苹果等多种作物。另一种是葱鳞葡萄孢菌（B．squamosa），可侵染200多种寄主，是韭菜、葱、蒜等作物灰霉病的病原。可侵染叶片、叶柄和花，症状包括叶斑、叶枯萎、茎腐、果腐、根腐及幼苗瘁倒，造成花瓣提早枯萎、脱落，严重时致使全株死亡。发病有3个条件，作物、病原菌、环境。