短穗鱼尾葵花粉泛过敏原profilin基因的克隆表达、纯化及免疫学鉴定

目的克隆并表达短穗鱼尾葵花粉中泛变应原肌动蛋白抑制蛋白(profilin)。方法利用RT-PCR结合RACE技术克隆短穗鱼尾葵花粉中泛变应原profilin的全长基因,并进行序列分析。然后设计带有酶切位点的特异性引物,采用RT-PCR获得整个短穗鱼尾葵花粉profilin的开放阅读框,将其与pET28a载体连接并转化大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达,通过Ni2+亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,采用Western-blot检测其IgE结合活性。结果克隆获得了短穗鱼尾葵花粉profilin的全长基因,由608个碱基组成,开放阅读框为396个碱基(包括终止密码子),编码131个氨基酸。该序列编码的蛋白为小分子量酸性蛋白,等电点为4.52,相对分子质量约为14200。此序列已被GenBank收录,登陆号为EF173600。重组短穗鱼尾葵花粉profilin在大肠杆菌中高效的表达,进一步经Ni2+亲和层析柱纯化后经Western-blot检测具有良好的免疫学活性。结论成功地克隆和表达了短穗鱼尾葵花粉profilin,为短穗鱼尾葵花粉过敏的诊断和免疫治疗奠定了基础。

短穗鱼尾葵及长穗鱼尾葵花粉过敏原的分析、鉴定与纯化

目的对长穗鱼尾葵和短穗鱼尾葵花粉变应原蛋白进行分析、鉴定与纯化。方法提取这两种花粉的粗提液,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离粗提液蛋白质组分并测定其分子量。收集过敏病人血清,采用免疫印迹(Western-blotting)法鉴定其变应原成分,通过离子交换层析对花粉变应原进行初步纯化和免疫印迹鉴定。结果长穗鱼尾葵花粉有30余条蛋白带,其中主要条带有18条,12000和14000 Mr为长穗鱼尾葵花粉特异性变应原;短穗鱼尾葵花粉有30余条蛋白带,其中主要条带有9条,26000、12000和14000 Mr为短穗鱼尾葵花粉特异性变应原,其中14000 Mr为主要变应原;通过离子交换层析方法纯化出长穗鱼尾葵花粉相对分子质量为12000和14000的变应原主要分布在Ⅱ峰中,短穗鱼尾葵花粉相对分子质量为14000的主要变应原分布在Ⅴ峰和Ⅵ峰中。结论对长穗和短穗鱼尾葵花粉变应原进行了初步的分离、鉴定和纯化,为临床鱼尾葵花粉变态反应疾病的诊断和治疗奠定了基础。

黑龙江葵花粉治疗前列腺增生的药效学研究

目的 :开发利用蜜源花粉药用资源 ,寻找治疗前列腺增生的有效药物。方法 :采用皮下注射丙酸睾丸素的方法制作前列腺增生的动物模型 ,观察葵花粉对实验性前列腺增生小鼠前列腺重量、睾丸重量的影响及尿量的变化。同时放免测定各用药组小鼠血清睾酮含量 ,观察对雌性小鼠性器官重量的影响及对二甲苯致炎症的抑制作用。结果 :葵花粉可明显减轻前列腺增生小鼠前列腺重量及睾丸重量 ,并有明显利尿作用 ;并可明显降低其血清睾丸酮含量。且有增加雌性小鼠性器官重量的作用 ,对二甲苯致小鼠耳肿胀有明显抑制作用 ,且无毒性。结论

葵花粉和茶花粉中8种无机元素含量

用原子吸收法测定了葵花粉和茶花粉中铁、锌、钾、镁、钠、铜、钙、锰 8种微量元素 。

海南省过敏性鼻炎致敏花粉:鱼尾葵花粉

目的了解海南省临床鱼尾葵花粉过敏情况,为过敏性鼻炎的流行病学研究及临床诊断、治疗和预防提供依据。方法收集2009年1月至2012年12月就诊于海口市人民医院耳鼻咽喉科门诊患者资料。所有患者均为过敏性鼻炎患者且均进行了皮肤点刺试验。随机选择30例鱼尾葵花粉过敏原点刺阳性患者进行鱼尾葵花粉过敏原鼻黏膜激发试验。结果 2047例皮肤点刺试验中,鱼尾葵花粉过敏原阳性者占44.26%(9062047)。30例鱼尾葵花粉过敏原皮肤点刺阳性患者过敏原鼻黏膜激发试验阳性者为100%,20例阴性对照未见阳性反应。结论皮肤点刺和过敏原鼻黏膜激发试验结果相符合,鱼尾葵花粉为海南省重要过敏原。

软叶针葵花粉和鱼尾葵花粉致敏患者嗜碱性粒细胞活化情况研究

目的探讨软叶针葵花粉和鱼尾葵花粉致敏患者的嗜碱性粒细胞活化情况。方法选取83例软叶针葵花粉和鱼尾葵花粉致敏患者纳入观察组,另选取同时期83例健康体检者纳入对照组。比较2组嗜碱性粒细胞活化指标(CD63、CD203c及CD45)荧光强度,并比较观察组内不同过敏原类型、过敏原种数及UniCAP分级者的检测结果,采用Spearman秩相关分析探讨嗜碱性粒细胞活化指标荧光强度与UniCAP分级的关系。结果观察组的嗜碱性粒细胞CD63、CD203c及CD45的荧光强度为(32.26±2.23)、(50.31±5.61)及(36.36±5.03),分别高于对照组的(6.15±1.20)、(18.28±2.63)及(7.02±1.36),差异有统计学意义(P<0.05)。观察组内不同过敏原类型及不同过敏原种数患者的检测结果比较,差异无统计学意义(P>0.05);UniCAP分级5~6级者的嗜碱性粒细胞CD63、CD203c、CD45的荧光强度为(38.16±3.15)、(66.73±6.96)、(50.86±6.59),分别高于UniCAP分级3~4级者的(29.37±2.31)、(51.13±5.78)、(39.10±5.13)和UniCAP分级1~2级者的(18.68±1.76)、(29.36±3.79)、(22.32±1.93),且UniCAP分级3~4级者高于UniCAP分级1~2级者,差异均有统计学意义(P<0.05);Spearman秩相关分析显示,嗜碱性粒细胞活化指标CD63、CD203c、CD45均与UniCAP分级呈正相关(P<0.05)。结论软叶针葵花粉和鱼尾葵花粉致敏患者嗜碱性粒细胞活化情况突出,且活化指标CD63、CD203c、CD45表达程度与UniCAP分级密切相关,具有较高的检测价值。

软叶针葵花粉疫苗治疗小鼠过敏性鼻炎的效果和机制

目的建立小鼠过敏性鼻炎模型,用重组软叶针葵花粉profilin疫苗免疫预防治疗,观察过敏性鼻炎小鼠的病理变化,探讨该疫苗对过敏性鼻炎治疗效果及可能机制。方法用腹腔注射法建立BALB/c小鼠软叶针葵花粉过敏性鼻炎模型,皮下注射过敏原疫苗进行预防治疗。通过小鼠无创肺功能仪检测小鼠治疗前后气道高反应性、间接ELISA检测血清中特异性抗体(IgE和IgG2a)、细胞因子,透射电镜观察鼻黏膜组织超微结构变化。结果疫苗特异性免疫治疗后,小鼠鼻部症状和气道高反应性减轻,其血清中特异性IgG2a水平升高、IgE水平降低,培养脾细胞上清中INF-γ、IL-10含量增加,IL-4生成减少。结论重组软叶针葵花粉profilin作为疫苗对花粉过敏性鼻炎有一定的疗效,可能与促使Th2向Th1转换,调节辅助性T细胞的平衡有关。

葵花粉与黄豆粉不同配比饲料对蜜蜂初生重的影响

利用不同配比的葵花粉和黄豆粉饲料饲喂蜂群,测定后代工蜂的初生重。结果显示,饲喂100%葵花粉和饲喂"75%葵花粉+25%黄豆粉"的蜂群,所育工蜂的初生重差异不显著;与饲喂"70%葵花粉+30%黄豆粉"、"65%葵花粉+35%黄豆粉"和饲喂100%黄豆粉的蜂群相比差异显著;本试验结果表明,不同比例花粉蛋白质营养水平对工蜂初生重具有显著的影响。

饲料中添加葵花盘粉对肉羊生产性能和羊肉品质的影响

目的研究饲料中添加不同水平葵花盘粉对湖羊生产性能和肉品质的影响。方法试验选用40只3月龄左右湖羊公羊羔,随机分为4组,每组10只。各组精料中葵花盘粉添加水平分别为0%(CK组)、5%(Ⅰ组)、10%(Ⅱ组)、15%(Ⅲ组)。结果Ⅱ组羊的平均日增质量显著高于CK组(p<0.05),Ⅰ组、Ⅲ组较CK组差异不显著;Ⅰ组、Ⅱ组与CK组相较,屠宰率、眼肌面积,净肉率、GR值差异不显著,Ⅲ组与CK组相较,眼肌面积减小,差异显著(p<0.05),屠宰率、净肉率、GR值差异不显著;Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组羊肉的PH 45 min、剪切力、滴水损失与CK组相较差异不显著,但Ⅲ组熟肉率与CK组相较降低,差异显著(p<0.05),其他各组间差异不显著。结论精料中添加适量的葵花盘粉,能够提高湖羊的平均日增质量,对屠宰性能和肉品质没有显著影响。

软叶针葵花粉肌动蛋白抑制蛋白基因的克隆表达与纯化及免疫学鉴定

花粉是最主要的吸入性过敏原之一。软叶针葵是一种热带、亚热带常见植物，在授粉季节所产花粉量较大，具很大的过敏潜能。但目前国内外尚鲜见软叶针葵花粉过敏原研究的报道。本研究用简并性引物从软叶针葵花粉中获得1个肌动蛋白抑制蛋白（profilin）基因，并在大肠杆菌中进行表达，获得有活性的重组profilin，同时研究其免疫学特性，并为软叶针葵花粉过敏诊断及免疫学治疗奠定基础。

应用双向电泳和免疫印迹技术分析软叶针葵花粉变应原

目的：采用双向电泳和免疫印迹技术对软叶针葵花粉提取液蛋白质组分进行分析,寻找软叶针葵花粉的主要变应原。方法：提取软叶针葵花粉变应原,应用双向电泳（2-DE）结合免疫印迹技术,获得相应的电泳图谱和免疫印迹图谱。结果：软叶针葵花粉蛋白提取液经双向电泳后,用考马斯亮蓝染色,得到的电泳图显示约有601个主要蛋白斑点。分子量（Mr）分布约20～130kD;等电点（pI）主要集中在4.0～8.0。免疫印迹分析结果显示,阳性组与对照组的差异蛋白点数约为19个。结论：双向电泳联合免疫印迹技术对软叶针葵花粉提取液蛋白质组分分析,可寻找到其主要变应原,并可进一步用于变应原致敏组分的研究。

BSA-ELISA初步检测短穗鱼尾葵花粉特异性IgE

目的对短穗鱼尾葵花粉粗浸液的主要变应原进行分析、鉴定。方法通过SDS-PAGE分析短穗鱼尾葵花粉蛋白质组份,采用Western blotting鉴定主要变应原,以短穗鱼尾葵花粉粗浸液包板,摸索出其包被浓度、血清稀释度和酶结合物浓度,采用BSA-ELISA法对短穗鱼尾葵花粉过敏患者血清进行初步检测,并与皮肤挑刺试验比较。结果短穗鱼尾葵花粉粗浸液SDS-PAGE显示有30余条蛋白条带,其中主要蛋白条带有10条,Western blotting显示5例短穗鱼尾葵花粉过敏患者的混合血清能与其中3条蛋白条带起反应,分子量分别是26000、14000和12000Mr。BSA-ELISA检测短穗鱼尾葵花粉特异性IgE,最适粗浸液稀释度为1:100,血清稀释倍数为1:5,生物素化抗体为1:1000,辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素(strepavidin-HRP)为1:1000。在此条件下BSA-ELISA与浸液皮试比较,检出结果与皮试阳性患者血清符合率为90%,与皮试阴性患者符合率为80%,与健康人对照检测符合率为100%。结论本实验对短穗鱼尾葵花粉主要变应原进行了分离和鉴定,BSA-ELISA法测定结果与皮肤挑刺试验初步比较符合率较好。

鱼尾葵花粉过敏的变应性鼻炎患者中血清总IgE及特异性IgE结果的分析

目的:探讨鱼尾葵花粉过敏的变应性鼻炎(AR)患者中血清总IgE、特异性IgE和变应原皮肤试验之间的关系。方法:选择429例对鱼尾葵花粉过敏的AR患者为实验组,243例健康体检者为对照组。实验组进行皮肤试验和特异性IgE水平检测,鱼尾葵花粉特异性IgE采用BSA-ELISA法;所有个体均检测血清总IgE水平。结果:实验组血清总IgE的阳性率明显高于对照组的阳性率(分别为66.2%和15.6%,P<0.01);实验组皮肤试验与血清特异性IgE之间差异无统计学意义(χ2=0.758 8,P>0.05);实验组血清特异性IgE和总IgE之间差异有统计学意义(χ2=50.639,P<0.01);海口长居患者与来海南旅游过客血清特异性IgE之间、总IgE之间差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:变应原皮肤试验与检测鱼尾葵花粉特异性IgE 2种方法在诊断鱼尾葵花粉过敏的AR中有重要作用,检测血清总IgE对鱼尾葵花粉过敏的AR患者的诊断有参考价值,鱼尾葵花粉过敏的AR患者IgE的阳性率与接触时间之间的关系,有待进一步研究。

短穗鱼尾葵花粉总蛋白的双向电泳及分析

目的对短穗鱼尾葵花粉过敏原蛋白质组分进行双向电泳及其结果分析,构建短穗鱼尾葵花粉蛋白双向电泳图谱,明确短穗鱼尾葵花粉的过敏原蛋白组分的分布和构建蛋白质组学数据库。方法提取短穗鱼尾葵花粉的总蛋白,取上清液进行Bradford法定量总蛋白浓度,采用13 cm IPG胶条(p H 3~10)和12%的SDS-PAGE凝胶作为二项分离胶进行双向电泳(2D)分离,银染法分析其总蛋白组成,利用Image Master2D软件对2D胶进行检测和图像分析。结果双向电泳图谱共检测到516个短穗鱼尾葵花粉蛋白点,其蛋白相对分子质量在12~174 k D,主要在10~50 k D;等电点在p H 3~10,主要分布在p H 5~8。含量最多的蛋白质其相对分子质量和等电点分别为13 k D和p H 6.258 37。含量最低的蛋白质其相对分子质量和等电点分别为29 k D和p H 3.615 79。结论成功构建较为完整的短穗鱼尾葵花粉蛋白双向电泳图谱,为建立短穗鱼尾葵花粉蛋白质组学数据库及其过敏的诊断和治疗提供了依据。

软叶针葵花粉致变应性鼻炎趋化因子及受体变化

目的探究与分析软叶针葵花粉致变应性鼻炎患者血清趋化因子及受体表达的变化情况。方法选取2018年6月至2020年3月该院70例软叶针葵花粉致变应性鼻炎患者为观察组,选取同时期70例健康同龄者作为对照组。比较两组血清趋化因子[调节活化正常T细胞表达和分泌的趋化因子(RANTES)、胸腺活化调节趋化因子(CCL17)、巨噬细胞源性趋化因子(CCL22)]及其受体[CC趋化因子受体(CCR)3、CCR4及CCR5]表达水平,并比较不同严重程度观察组血清趋化因子及受体表达水平,采用Spearman秩相关分析上述指标与变应性鼻炎严重程度的相关性。结果与对照组比较,观察组RANTES[(431.23±28.76)ng/L vs.(652.66±39.89)ng/L]、CCL17[(553.63±33.76)ng/L vs.(660.72±50.78)ng/L]、CCL22[(653.75±31.32)ng/L vs.(773.63±52.39)ng/L]、CCR3[(1.50±0.20)%vs.(2.72±0.39)%]、CCR4[(9.97±1.52)%vs.(13.73±2.26)%]及CCR5[(12.23±1.39)%vs.(19.31±2.35)%]表达水平更高,且不同严重程度观察组血清趋化因子及受体表达水平比较,差异有统计学意义(P<0.05)。Spearman秩相关分析显示血清趋化因子及受体与变应性鼻炎的严重程度呈正相关(P<0.05)。结论软叶针葵花粉致变应性鼻炎患者血清趋化因子及受体表达水平升高,且与疾病严重程度有相关性。

一种抗痛风中草药葵花盘粉的药理作用

通过提取中草药葵花盘粉颗粒不同成分,比较葵花盘粉总黄酮、生物碱、多糖、小分子肽的抗炎、降尿酸作用,确定葵花盘果粉抗痛风的有效成分及作用。结果显示葵花盘颗粒及其中成分黄酮、生物碱、小分子肽显示出显著的抗炎、降尿酸、止痛作用,葵花盘粉的有效成分为生物碱、总黄酮以及小分子肽,共同起到治疗痛风、降低血尿酸、调控体内嘌呤代谢作用。

添加葵花托盘粉对芦花鸡生产性能的影响

试验旨在研究日粮中添加不同水平的葵花盘粉对芦花鸡的增重和产蛋性能的影响.试验选用180只15周龄龄芦花鸡,随机分为4组,每组45只.试验各组日粮中添加葵花盘粉添加水平分别为0(对照组,Ⅰ组)、5%(Ⅱ组)、10%(Ⅲ组)、15%(Ⅳ组),试验期为98d,预饲7d.结果显示:(1)与对照组相比,日粮中添加10%、15%葵花盘粉,对15~19周龄芦花鸡能显著提高其体重(P<0.05).(2)与对照组相比,日粮中添加10%、15%葵花盘粉能显著提高19周龄芦花鸡的产蛋率和19~28周龄的平均蛋重(P<0.05).(3)与对照组相比,日粮中添加10%葵花盘粉能显著降低软蛋率、畸形率、破蛋率(P<0.05).(4)与对照组相比,日粮中添加10%葵花盘粉能显著提高芦花鸡的蛋形指数和蛋壳厚度(P<0.05).结果显示,芦花鸡日粮中添加一定量的葵花盘粉对鸡的生长性能和屠宰性能无影响,且能够提高羊肉品质,适宜添加比例为5%~10%,综合饲养成本和经济效益等方面考虑,最佳添加比例为10%.

长穗鱼尾葵花粉主要变应原的研究

目的探讨用双向电泳对长穗鱼尾葵花粉提取液蛋白质组分进行分析的价值,并用蛋白质印迹法寻找鱼尾葵花粉主要变应原。方法提取长穗鱼尾葵花粉变应原,用双向电泳(2-DE)结合蛋白质印迹法,用长穗鱼尾葵花粉过敏阳性患者和健康对照者分别作为阳性和阴性组,获得相应的电泳图谱和免疫印迹图,对比结果以获得特异性变应原蛋白点。结果长穗鱼尾葵花粉蛋白提取液经双向电泳后,考马斯亮蓝染色,在分子量为10~170 k Da和等电点p I3.0~10.0发现约604个蛋白质点。蛋白质印迹法结果,阳性和阴性组对比,特异性变应原蛋白点数约为3个。结论可以用双向电泳联合蛋白质印迹法对长穗鱼尾葵花粉提取液蛋白质组分分析,并可进一步用于变应原致敏组分的研究。

葵花盘粉颗粒抗痛风作用机理及有效部位分析

通过提取中草药葵花盘粉颗粒不同成分,比较葵花盘粉,葵花盘总黄酮,葵花盘生物碱,多糖的抗炎消肿、降尿酸作用,确定葵花盘果粉抗痛风的有效部位及作用机理。结果显示葵花盘颗粒中黄酮、生物碱、多糖均显示出显著的抗炎消肿、降尿酸,止痛作用,葵花盘粉的有效成分为生物碱,总黄酮以及多糖,共同起到治疗痛风,降低血尿酸,调控体内嘌呤代谢作用。

葵花盘粉有效成分对小鼠高尿酸血症的治疗作用

目的:探讨葵花盘粉主要成分小分子肽、生物碱、总黄酮和多糖等对小鼠高尿酸血症的治疗作用,阐明葵花盘粉对小鼠血尿酸(UA)水平和大鼠关节肿胀的影响及对肝和肾组织的保护作用。方法:取昆明雄鼠96只,随机分为8组,各组12只,一组为空白对照组,其余用作高尿酸血症模型制备。高尿酸血症模型造模成功的小鼠随机分为模型组、阳性对照(别嘌醇)组、小分子肽组、生物碱组、总黄酮组、多糖组和葵花盘粉组,分别灌胃给药,给药7d后检测各组小鼠血UA水平;取每组小鼠肝和肾组织,采用HE染色法观察各组小鼠肝和肾组织形态表现。在雄性SD大鼠膝关节腔注射3mg尿酸钠,建立大鼠急性痛风性关节炎模型。实验分为空白组、模型组、阳性对照药秋水仙碱组、不同浓度(0%、20%、40%、60%、80%和100%)乙醇葵花盘提取物(SDE)组,每组4只。分别测定0、12、24和48h大鼠关节周长。采用ELISA试剂盒检测各组大鼠血清中相关炎症因子白细胞介素10(IL-10)和巨噬细胞炎性蛋白1α(MIP-1α)水平。结果:与模型组比较,别嘌醇组、小分子肽组、生物碱组、总黄酮组和葵花盘粉组小鼠血UA水平均在给药后明显降低(P<0.05),其中别嘌醇组小鼠血UA水平降低最大,小分子肽组次之。HE染色观察,小分子肽组小鼠肝小叶内肝细胞及肝细胞索清晰,肝细胞胞质饱满,且肾细胞与空白对照组比较未见异常。注射尿酸钠48h后,与模型组比较,SDE组大鼠关节肿胀度最多减少27.1%。与模型组比较,20%SDE组大鼠血清IL-10水平明显升高(P<0.01),血清中MIP-1α水平亦明显升高(P<0.01)。结论:葵花盘粉可降低血UA水平,并对肝和肾组织有一定的保护作用,且可通过提高机体抗炎活性降低机体炎症反应,实现抗痛风性关节炎活性的作用。