蒙氏假单胞菌(Pseudomonas monteilii)对食用油脂的利用效率研究

筛选具有利用食用油脂功能的菌株,为废弃食用油脂的资源化应用开展基础性前期研究。利用油脂中性红平板筛选法筛选到1株具有脂类降解能力的菌株鉴定为蒙氏假单胞菌。通过菌株形态特征扫描、生理生化特性,进而利用分光光度法探索了该菌株最适温度、最适pH等生长条件。并研究其在最适生长条件下的生长曲线及其在不同油脂作唯一碳源条件下的生长情况。结果表明,该菌株生长的最适温度为28℃、最适pH值为7. 0、最适盐度为2g/L,达到最大培养生物量的时间为7h。对玉米油、动物油、花生油、芝麻油、椰子油、橄榄油共7种食用油脂具有相应的利用能力。

降解烃类的假单胞菌Pseudomonas sp.超微结构的研究

本文报道了对生长于两种培养基上的降解烃类的假单胞菌Pseudomonas sp.的电镜观察结果。实验表明实验组与对照组细菌的外形与内部结构有明显的差异,生长于含有烃类基质上的实验组菌的外表有许多折皱和纤毛,菌体内有大小不等的油滴累积,油滴没有膜的界限。某些实验组菌体细胞膜上有膨胀的突起部分。整个观察表明,实验组细菌将烃类基质由菌体表面吸收入菌体,进而在体内累积,最终由胞内酶降解。

南极海洋假单胞菌Pseudomonas sp.NJ-013的化学成分

本研究进行了一株南极假单胞菌Pseudomonas sp.NJ-013代谢产物多样性分析、化学成分的分离和结构鉴定,以探讨其产物结构类型。菌株NJ-013甲醇提取物经LC-TOF MS测试分析其代谢产物多样性;还经柱层析和半制备高效液相色谱制备得到4个化学成分;化合物结构经TOF MS、1H-和13C-NMR等波谱学方法和文献数据对照鉴定。假单胞菌Pseudomonas sp.NJ-013的代谢产物主要类型为含氮的生物碱或寡肽类,分离得到的化合物1-4分别鉴定为环(4'-羟基苯丙氨酸-脯氨酸)(1)、环(4-羟基脯氨酸-亮氨酸)(2)、环(4-羟基脯氨酸-苯丙氨酸)(3)、环(异亮氨酸-脯氨酸)(4)。结构较为复杂的微量成分尚待进一步富集、研究。

假单胞菌Pseudomonas promysalinigenes RW10S1次级代谢产物研究

目的研究假单胞菌Pseudomonas promysalinigenes RW10S1的次级代谢产物。方法采用MCI柱色谱及半制备高效液相色谱法对发酵产物进行分离纯化,通过HR-ESI-MS、NMR等多种波谱学技术鉴定化合物的化学结构。结果从假单胞菌Pseudomonas promysalinigenes RW10S1的液体发酵物乙酸乙酯萃取部位分离得到了3个化合物,分别鉴定为promysalin(1)、promynicotin(2)、dihydrodeoxypromynicotin(3)。结论化合物2和3为新化合物。

蒙氏假单胞菌3A菌株对烟草漂浮育苗中TMV的钝化效果

选用对烟草花叶病毒Tobacco mosaic virus(TMV)具有显著拮抗活性的蒙氏假单胞菌Pseudomonas monteilii3A菌株对烟草漂浮育苗过程中被TMV污染的育苗棚、育苗盘、基质及剪叶机械等进行生物钝化,并利用real-time RT-PCR对污染基质中TMV的含量进行了定量检测。结果显示,200、400倍及600倍P.monteilii 3A菌悬液稀释液均可显著钝化病苗残留干叶及干根中的TMV;剪叶机械经不同稀释倍数的P.monteilii 3A菌悬液处理后,在一定程度上抑制了TMV的发生,相对防效达51.42%~100%;基质经不同稀释倍数的P.monteilii 3A菌悬液处理后,其中TMV的含量也下降了72.73%~88.46%,对TMV的相对防效达61.56%~87.46%。其中,200倍P.monteilii 3A稀释液处理育苗棚、育苗盘20min以上,浸泡剪叶机械1min以上对TMV钝化效果最好。

一株托拉斯假单胞菌(Pseudomonas tolaasii)G86的鉴定及其对亚硝酸盐的降解作用

从河北邯郸某虹鳟养殖场的底泥中分离得到一株革兰氏阴性菌,对其形态特征及16S rRNA基因序列进行测定分析并做生理生化鉴定,确定为一株托拉斯假单胞菌(Pseudomonas tolaasii),编号为G86。经发酵培养试验得到优化后的培养基和培养条件为:温度10℃,pH 6,转速180 r/min。以亚硝酸钠为唯一氮源,在上述培养条件下在72 h对总氮和亚硝酸盐氮的去除率分别为33.05%和31.85%。本次分离得到的托拉斯假单胞菌G86可以作为养殖生产上降解亚硝酸盐的备选菌株。

一株产褐藻酸多糖的海洋假单胞细菌 Pseudomonass P．QDA的筛选和鉴定

根据已获褐藻酸多糖生物合成基因簇中褐藻胶裂解酸基因(algL)的序列设计特异性引物，利用PCR技术从海洋微生物中筛选到1株能够分泌胞外多糖的细菌。采用形态学观察和DNA序列分析鉴定该菌株，结果为假单胞属细菌，命名为Pseudomonassp．QDA；系统发育树显示该菌株与P.purida亲缘关系最近。菌株产生的胞外多糖可被褐藻胶裂解酶(AlgL)降解，并在紫外234nm处检测到特征性吸收，初步证明含有褐藻酸多糖。

一株红树林来源施氏假单胞菌的分离及其在水质净化中的应用

随着水产养殖业的快速发展,养殖水环境日趋恶化,养殖动物病害频发。益生菌因其对环境友好和安全而被广泛应用于养殖水环境的改善中。但细菌易受外界环境影响,稳定性不高,这严重制约了其在养殖水环境中的应用。固定化微生物技术可以大幅提高优势菌种在水环境中的稳定性,为细菌在水质净化应用提供了方向。该研究从三亚白鹭公园红树林根际土壤中筛选出一株高降解亚硝酸盐的菌株X1,该菌株在第4 d时亚硝酸盐降解率可达到97.18%。经16S rRNA基因的系统发育树分析表明,该菌株属于施氏假单胞菌(Pseudomonas stutzeri)。将该菌株与海藻酸钠-壳聚糖复合载体结合形成固定化小球,投入到养殖废水中,亚硝酸盐降解率在第2天就可以达到98.15%,第3天和第4天降解率保持平稳,并无亚硝酸盐积累,在第5天达到98.35%。该研究结果证实了施氏假单胞菌能够高效、快速且安全地降解水体中的亚硝酸盐,使用固定化技术能够更好地提高该菌株的降解速率及其稳定性,这为固定化施氏假单胞菌应用于水体净化提供了一定的参考。

血鹦鹉铜绿假单胞菌病原菌鉴定和药敏试验

对从患病血鹦鹉(Cichlasoma var.)肝、眼部脓肿处分离到2株细菌,对该分离菌进行人工感染实验、鉴定和药敏实验。结果显示:通过人工感染实验证明其对血鹦鹉有较强的致病性。分离菌革兰氏阴性杆状,氧化酶阳性、接触酶阳性、甲基红阴性,能够利用枸橼酸盐、丙二酸盐,发酵葡萄糖。综合分离菌的表型特征及分子生物学结果,鉴定分离菌为假单胞菌属(Pseudomonas)的铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)。药敏试验结果显示头孢哌酮、头孢他啶、壮观霉素、阿米卡星、阿奇霉素、氨噻酸单胺菌素和阿洛西林抑菌效果显著。

一株假单胞菌的亚硝酸盐降解特性及其对鱼池底泥的净化作用

从海水养殖池的底泥中筛选到一株对亚硝酸盐有强降解作用的假单胞菌（Pseudomonas sp．）SF1，在实验室条件下研究了SF1的亚硝酸盐降解特性及其对高污染鱼池底泥的净化作用。研究结果表明，SF1具有高效降解转化高浓度亚硝酸钠的能力，其适宜降解条件为：亚硝酸钠质量浓度范围为1～1000mg／L；菌种接种量为10％；中量充气发酵；发酵时间为12～36h；发酵pH值为6．5～8．0。直接接种SF1发酵液（接种量10％，菌液A值0．36）到鱼池底泥，36h后，底泥的亚硝酸盐去除率达到67％，显示了SF1对鱼池底泥较强的净化作用。

固氮斯氏假单胞菌四碳二羧酸转运调控基因dctB的功能研究

为研究固氮斯氏假单胞菌(Pseudomonas stutzeri)A1501四碳二羧酸转运相关基因dctB的生物学功能,构建了携带功能完整的dctB基因片段的广宿主质粒pLL2922,通过三亲接合将该质粒转移至dctB突变株及野生型菌株A1501,并对其以琥珀酸、延胡索酸、苹果酸等四碳二羧酸为唯一碳源的培养基中的生长情况与固氮活性进行了测定.结果表明:dctB突变株不能利用琥珀酸和延胡索酸进行生长和固氮,但能以苹果酸为唯一碳源进行生长和固氮.携带功能完整dctB的广宿主质粒pLL2922,可以互补dctB位点的突变,并部分恢复突变株的四碳二羧酸转运和固氮能力.将该质粒转入A1501野生型菌株可以提高A1501的固氮活性,在琥珀酸,延胡索酸,苹果酸为唯一碳源的培养基上固氮活性比野生型菌株提高62.8%,33.9%,27.8%.表明dctB基因对于四碳二羧酸的转运及固氮能力均具有重要作用.

假单胞菌H3壳聚糖酶的纯化及部分酶学性质

对 Pseudmona sp.H3产生的壳聚糖酶粗酶液采用(NH_4)_2SO_4盐析、Sephadex G-25脱盐、Sepharose Q-XL阴离子交换层析和Superdex G-75分子筛层析进行纯化,经SDS-PAGE鉴定为单蛋白带,分子质量约为33.8ku,酶反应最适温度为40℃,最适pH为5.0,降解壳聚精(D.A.90.14％)Km值为3.59g/L,V_(max)值为 3.80mmol/(L·min);Ba^(2+)、K^+、Co^(2+)对该酶有激活作用,而Zn^(2+)、Mn^(2+)、Al^(3+)、Cu^(2+)则对酶有抑制作用;此外,该酶除了能降解壳聚糖以外,还具有CMCase活性。

洋葱假单胞菌产脂肪酶条件的优化

采用Rashid N p-nPP比色法,通过单因素试验和正交试验对洋葱假单胞菌(Pseudomonas cepacia)产脂肪酶的培养基主要成分和发酵条件进行优化,以提高聚丁二酸丁二醇酯(PBS)的生物降解速率。结果表明,该菌种产脂肪酶的最适培养基为菜子油5.0 g/L,酵母膏0.5 g/L,乳化剂Tween-60 2.5 g/L,培养基初始pH 8.0;最适培养条件为接种量9%,培养温度35℃,摇床转速130 r/min,培养时间3 d。在此优化培养基条件下,洋葱假单胞菌产脂肪酶活性可达32.935 U/mL。

锦鲤致病性假单胞菌的分离鉴定及生物学特性研究

从发病的外塘锦鲤的肝、脾、肾等组织中分离到大量优势生长的细菌,经表型特征分析和16S r DNA序列测定,发现该菌为假单胞菌(Pseudomonas sp.)。通过对正常的锦鲤进行人工感染试验,7 d后锦鲤全部死亡,症状与自然发病症状相似,表明该菌对锦鲤有致病性;用含有抗生素的20种药敏纸片进行药敏实验,发现该假单胞菌对庆大霉素、卡那霉素、妥布霉素高敏,对诺氟沙星、环丙沙星、阿米卡星中敏,对其他14种抗生素有耐药性。本研究旨在为锦鲤致病性病原的确定和防治提供参考依据。

一株拮抗姜瘟根际青枯假单胞杆菌的沙雷氏菌的分离与鉴定

从生姜连作地土壤中分离到1株对生姜青枯假单胞杆菌(Pseudomonas solanacarum Smith)有强拮抗作用的沙雷氏菌株R11,对该菌株进行了形态特征、培养特征、生理生化和16S r DNA序列分析的系统鉴定,发现R11为革兰氏阴性菌,端生一根鞭毛。以16S r DNA序列为基础构建了包括11株相关种属细菌在内的系统发育树,R11与沙雷氏菌(Serratia sp.)十分接近,序列相似性值达99%。

好氧反硝化菌Pseudomonas aeruginosa NO62筛选分离与性质鉴定

从生活污水处理场活性污泥中筛选分离到1株具有好氧反硝化特性的菌株NO62,经过常规生理生化鉴定、Vitek-32细菌鉴定系统鉴定结合16S rDNA鉴定,确定其为铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)。菌株P.aeruginosa NO62在好氧培养(150 r/min)时在37℃生长最好,但其反硝化活性则在30℃培养时最好。反硝化活性与菌体生长成正相关,在菌体的对数生长期硝态氮迅速被还原成亚硝态氮,继续培养则亚硝态氮浓度也逐渐降低,表明亚硝态氮被进一步还原。通过PCR的方法在NO62的总DNA中也检测到硝酸盐还原酶的编码基因narG。对NO62菌株反硝化活性的研究,可为该菌应用于污水脱氮处理奠定良好的理论基础。

斯氏假单胞菌对草鱼养殖水体水质的调控作用

为研究斯氏假单胞菌(Pseudomonas stutzeri F1M)对草鱼养殖水质的调控作用,进行了室外试验。试验选择初始体重为(5.0±0.5)g的草鱼2 400尾,随机分为4组,每组3个重复,每7 d分别向水中添加0、2×107、1×108和2×108cfu/L斯氏假单胞菌,各组投喂相同饲料。试验期为15 d,每3 d测定亚硝酸盐氮、硝酸盐氮、氨氮、总氮、正磷酸盐、总磷等水质指标。结果显示,斯氏假单胞菌用量1×108cfu/L和2×108cfu/L均可有效降解水体亚硝酸盐氮和总无机氮,第15天时,亚硝酸盐氮和总无机氮浓度分别比对照组减16.8%、15.3%和49.5%(P<0.01)、51.8%(P<0.01)。表明斯氏假单胞菌调控草鱼养殖水体水质的最适添加量为1×108 cfu/L。

基于16S rDNA序列的4株假单胞菌属细菌的分子鉴定

对分离自养殖水环境的4株假单胞菌属细菌的16S rDNA序列进行PCR扩增并测定其核酸序列,在Gen-Bank中通过BLAST查找其同源序列,应用MegAlign软件中的Jotun Hein、Clustal V、Clustal W 3种方法进行序列差异和同源性分析,分别使用Mega 4.0软件中的邻接法(N-J)、最小进化法(ME)、最大简约法(MP)、非加权组平均法(UPGMA)构建系统发育树。3种序列分析方法结果显示,由Jotun Hein法可知,菌株T3与菌株T6序列相似度最高为98.5%,菌株T4与Pseudomonas sp.N9-1序列相似度最高为99.1%,菌株T5与Pseudomonas sp.N9-1序列相似度最高为99.6%,菌株T6与Pseudomonas putida KF703及菌株T5序列相似度最高为99.1%;由Clustal V法可知,菌株T3与Pseudomonas sp.N9-1序列相似度最高为97.0%,菌株T4与Pseudomonas plecoglossicida S21、Pseudomonas sp.N9-1及菌株T5序列相似度最高为97.7%,菌株T5与Pseudomonas plecoglossicida S21序列相似度最高为98.9%,菌株T6与菌株T5序列相似度最高为97.2%;由Clustal W法可知,菌株T3与Pseudomonas sp.N9-1序列相似度最高均为97.7%,菌株T4与Pseudomonas plecoglossicida S21序列相似度最高为99.3%,菌株T5与Pseudomonas plecoglossicidaS21序列相似度最高为99.6%,菌株T6与Pseudomonas sp.N9-1序列相似度最高为97.9%。4种方法构建的系统发育树基本一致,可初步确立4株菌株的分类地位:菌株T3与Pseudomonas sp.G53亲缘关系最近,菌株T4与序列Pseudomonas sp.N9-1以及Pseudomonas sp.WP6亲缘关系最近,菌株T5与Pseudomonas sp.3-3(2010)亲缘关系最近,菌株T6与Pseudomonas plecoglossicida S21亲缘关系最近。

烧伤病区多重耐药铜绿假单胞菌DNA的脉冲场凝胶电泳分析

目的:了解烧伤病区铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)感染的分子流行病学特征。方法:采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型的方法,对15株分离自烧伤临床病人的多重耐药PA染色体组DNA进行分析。结果:15株检测菌株中有9株菌分别属于两种不同的PFGE图谱类型,具有同源性的菌株占测试菌株的60%。结论:导致我院烧伤患者感染多重耐药的PA中有同源性的比例较高,提示在烧伤救治中采取有针对性的措施,防止烧伤病房内的交叉感染对于降低烧伤感染率、提高烧伤救治水平具有重要意义。

冷鲜梅条肉中假单胞菌生长预测模型的建立与验证

研究冷鲜梅条肉中假单胞菌（Pseudomonas）在0~20℃内的生长曲线。运用修正的Gompertz模型拟合不同温度条件下假单胞菌的变化情况,建立生长预测一级模型（R2〉0.99）,准确因子Af、偏差因子Bf均接近1.0;利用平方根模型描述温度与最大比生长速率和延滞期的关系,得到假单胞菌的生长预测二级模型。模型可用来预测0~20℃内冷鲜梅条肉中假单胞菌的生长情况,为保证冷鲜肉质量安全提供依据。