蒙氏假单胞菌3A菌株对烟草漂浮育苗中TMV的钝化效果

选用对烟草花叶病毒Tobacco mosaic virus(TMV)具有显著拮抗活性的蒙氏假单胞菌Pseudomonas monteilii3A菌株对烟草漂浮育苗过程中被TMV污染的育苗棚、育苗盘、基质及剪叶机械等进行生物钝化,并利用real-time RT-PCR对污染基质中TMV的含量进行了定量检测。结果显示,200、400倍及600倍P.monteilii 3A菌悬液稀释液均可显著钝化病苗残留干叶及干根中的TMV;剪叶机械经不同稀释倍数的P.monteilii 3A菌悬液处理后,在一定程度上抑制了TMV的发生,相对防效达51.42%~100%;基质经不同稀释倍数的P.monteilii 3A菌悬液处理后,其中TMV的含量也下降了72.73%~88.46%,对TMV的相对防效达61.56%~87.46%。其中,200倍P.monteilii 3A稀释液处理育苗棚、育苗盘20min以上,浸泡剪叶机械1min以上对TMV钝化效果最好。

假单胞菌23—1菌株烃代谢产生表面活性剂的研究

Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ２３—１菌株烃代谢产生一种胞外糖脂类表面活性剂。分析表明，糖脂的糖基为鼠李糖，脂肪酸是十碳癸酸。发酵液糖脂含量１１．５ｇ／Ｌ，其临界胶束浓度（ＣＭＣ）为２００ｍｇ／Ｌ，乳化性能稳定。产生糖脂类生物表面活性可能是该菌株微生物采油增油效果显著的主要原因。

假单胞菌23-1菌株烃代谢产生有机酸和气体的研究

假单胞菌 2 3- 1烃代谢产生乙酸 ,产酸量 0 .0 15mol/L ;产生 CO2 和 CH4 两种气体 ,产气量 2 0 m L /L。产酸产气 2 3- 1菌株成为微生物采油优良菌种。

交替假单胞菌(Pseudoalteromonas sp.)DY3菌株产内切葡聚糖酶的性质研究及基因克隆

从深海样品ES0 10 9中分离到一株具有高内切葡聚糖酶活力的细菌DY3 ,16SrDNA序列分析表明该菌与交替假单胞菌属 (Pseudoalteromonassp .)的Pseudoalteromonascitrea和Pseudoalteromonaselyakovii的同源性为 99%。PCR扩增DY3的内切葡聚糖酶基因celX全长 14 79bp ,编码一个 492AA的蛋白质。酶的氨基酸序列分析表明CelX与Pseudoalteromonashaloplanktis的内切葡聚糖酶CelG有 95%的相似性 ,包括一个糖基水解酶家族 5的催化结构域 ,一个连接序列和位于C端的的CBM5结构域。对酶性质的初步研究发现 ,CelX的最适温度为 40℃ ,酶的最适pH在 6～

基于TLR4/NF-κB通路探究NLRP3对铜绿假单胞菌的清除机制

目的基于TLR4/NF-κB通路探究NLRP3对铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)的清除机制。方法采用PA感染的HP-1诱导分化的巨噬细胞和原代人单核来源巨噬细胞,然后沉默巨噬细胞中NLRP3(si-NLRP3)和TLR4(si-TLR4),用ELISA检测上清液中IL-1β和IL-8的表达水平;RT-PCR检测细胞中NLRP3、caspase-1 mRNA表达;蛋白质印迹检测细胞中TLR4、p-NF-κB P65蛋白表达。结果铜绿假单胞菌感染的THP-1诱导分化的巨噬细胞和原代人单核来源巨噬细胞hMDMs上清液中IL-1β、IL-8水平、NLRP3、caspase-1 mRNA表达及TLR4、p-NF-κB P65蛋白表达明显增加(P<0.05)。和si-NC组相比,THP-1诱导分化的巨噬细胞和原代人单核来源巨噬细胞hMDMs沉默NLRP3和TLR4后的si-NLRP3和si-TLR4组上清液中IL-1β、IL-8表达、NLRP3、caspase-1 mRNA表达及TLR4、p-NF-κB P65蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。和si-NC组相比,沉默PA感染的THP-1巨噬细胞和原代人单核来源巨噬细胞hMDMs中NLRP3和TLR4表达细胞清除率明显增加(P<0.05)。结论沉默NLRP3可增加巨噬细胞对PA的清除作用,其作用机制可能和抑制TLR4/NF-κB信号通路激活有关。

一株假单胞菌对活性艳红X-3B的脱色研究

从常州清潭污水处理厂处理池的污泥中分离到一株活性艳红X-3B脱色菌WLY,具有较高的脱色活性,经生理生化实验初步鉴定为假单胞菌属(Pseudomonas.sp)。本实验考察了温度、培养时间、pH、染料浓度、培养方式和接种量等因素对WLY脱色能力的影响。结果表明,菌株WLY在24 h和48 h内对30 mg/L活性艳红X-3B的脱色率分别为86.29%和93.16%;且接种量在1-3 mL(OD600为1.2)范围内,脱色效果最好;最适温度为35-40℃,最佳pH为7,且静置培养较振荡培养条件下的脱色率高;在本实验应用上,随染料质量浓度的增加,脱色率降低,500 mg/L的活性艳红X-3B在24 h内并无脱色。

甲基对硫磷降解菌假单胞菌WBC-3的筛选及其降解性能的研究

从农药污染土样中分离出的一株细菌具有彻底降解甲基对硫磷的能力。该菌经生理生化特性分析和 1 6SrDNA序列同源性分析 ,鉴定为假单胞菌属 ,命名为Pseudomonassp .WBC 3。该菌在pH7～ 8、温度 2 3℃～ 3 0℃范围内均生长良好 ,对甲基对硫磷的耐受浓度在单纯无机盐培养基中可达到 80 0mg L ,在含有 0 1 %葡萄糖的培养基中可达到 2 0 0 0mg L。该菌能够以甲基对硫磷作为唯一碳源、氮源 ,将其彻底降解作为生长基质 ,对于 3 0 0mg L甲基对硫磷的降解速度达 1 5mg L·h ,于 2 2h后达到其稳定生长期。该菌对于多种有机磷农药及部分芳烃类化合物具有生化代谢能力。从该菌的细胞周质组分中纯化出的有机磷水解酶在SDS PAGE胶上显示为分子量约为 3 3 5× 1 0 3 的条带。

抑制姜瘟青枯假单胞菌的木霉菌株的筛选及其抑菌机理

筛选得到一株可有效抑制姜瘟青枯假单胞菌的木霉菌株SMF2 (TricodermasppSMF2 ) ,证实其胞外分泌的抗生素———木霉素是抑制姜瘟菌生长的主要物质 ,该物质对热稳定 .固体发酵是培养木霉制剂的有效方法 ,并对培养基的组成、培养条件进行了初步优化。

筛选假单胞菌株 M18 防治大棚黄瓜枯萎病害

设计了一种新的高效筛选程序，从植物根际土壤中分离出一株具有ＡＣＣ脱氨酶活性的促生拮抗双功能假单胞菌株Ｍ１８．在培养皿中，Ｍ１８能有效地抑制黄瓜枯萎病菌以及多种其他枯萎病原菌和植物病原菌的生长．Ｍ１８活菌浸种处理春黄瓜种子以及在大棚定植后根际土壤浇灌的试验中，与对照组相比，黄瓜枯萎病的株发病率降低７０％～８０％，霜霉病的发病率和病情指数都同时平均下降７０％左右，黄瓜产量提高２０％以上，每公顷可增加产值０．９万元以上，Ｍ１８的生物防治效果达到极显著程度．

假单胞菌产壳聚糖酶突变菌株的筛选

以假单胞菌Y1为出发菌株 ,分别通过亚硝基胍 (NTG) ,Co6 0 ,UV(紫外 )诱变 ,采用透明圈法筛选 ,获得了产壳聚糖酶较好的突变菌株假单胞菌Y8,其所产酶活力达到 3.0U·ml- 1,酶活力提高近 6倍 ,并具有较好的遗传稳定性。 3种诱变方法中 ,UV诱变效果最好。

3-蒈烯对铜绿假单胞菌的抑菌活性及机理初探

为了开发一种新的食品防腐保鲜剂,本文初步研究了3-蒈烯对铜绿假单胞菌的抑菌活性及机理。通过肉汤稀释法测定最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC),评价了3-蒈烯的抑菌活性,考察了3-蒈烯对细菌生长曲线、细胞形态、细胞膜通透性、膜电位及呼吸链脱氢酶等的影响。结果表明:3-蒈烯对铜绿假单胞菌的MIC为20mL/L,MBC为40mL/L。3-蒈烯可以抑制铜绿假单胞菌的生长,破坏细胞的正常形态,提高细胞膜的通透性,造成蛋白质、电解质的外泄。3-蒈烯能够降低铜绿假单胞菌菌体的膜电位,干扰细胞正常代谢活动,还能抑制细胞内呼吸链脱氢酶的活性。综上所述,3-蒈烯通过破坏铜绿假单胞菌细胞膜,抑制细菌正常生长,导致细菌细胞死亡。

荧光假单胞菌工程菌株的构建及对黄瓜枯萎病的防治效果

采用基因工程的方法，将含有2，4-DAPG基因的质粒pMON5122导入到野生型荧光假单胞菌株中，探索了不同热激时间、不同CaCl2浓度和荧光假单胞菌的不同生长时期对转化子形成的影响；研究了荧光假单胞菌工程菌株对黄瓜枯萎病的防治效果。结果表明，荧光假单胞菌生长到OD约0．53时，用0．025mol／L CaCl2处理细胞，热激3～4min，转化频率最高；荧光假单胞工程菌株对黄瓜枯萎病的盆栽防治效果达到75．0％，并且能够提高黄瓜出苗率。

假单胞菌株M18分泌羧基吩嗪抑制黄瓜枯萎病害

设计并应用新的高效筛选程序 ,从植物根际土壤分离出同时具有促进植物生长和抑制黄瓜枯萎病害的假单胞菌株 M1 8.它对黄瓜幼苗的根系具有明显的促进作用 ,在培养皿中 ,M1 8能有效地抑制黄瓜枯萎病菌以及多种其他植物病原菌菌丝体的生长 .经 M1 8活菌浸种处理春黄瓜种子并在大棚内浇灌定植后的根际土壤 ,与对照相比 ,黄瓜枯萎病的株发病率降低 70 %～ 80 % ,霜霉病的发病率和病情指数都同时平均下降 70 %左右 ,黄瓜产量提高 2 0 %以上 .M1 8的生物防治效果达到极显著程度 .对培养液中纯化的抗真菌物质进行光谱分析和 LC- MC测定的结果表明 ,M1

绿针假单胞菌PL9菌株对烟草疫霉的拮抗作用研究

利用离体拮抗试验和烟草幼苗生物测定法研究了棉花根圈细菌绿针假单胞菌 (Pseudomonascholoraphis)PL9菌株对烟草黑胫病病原菌烟草疫霉 (Phytophthoraparasiticavar .nicotianae)的拮抗作用 ,该菌株对烟草疫霉菌丝体有很强的抑制作用 ,并且可以完全抑制烟草疫霉游动孢子对烟草幼苗的侵染 ,其液体培养物浓缩过滤液也有相同的抑制作用 ,拮抗作用机理研究结果表明 ,其拮抗作用可能与PL9菌株分泌的抗生素类物质有关。为了解PL9菌株在烟草根圈的定殖情况 ,采用全套发光酶基因 (luxCDABE)标记的菌株PL9L进行跟踪 ,结果表明该菌株可以在烟草根圈成功定殖。

金银花主要成分对铜绿假单胞菌多耐药菌株的抑制作用研究

目的研究金银花主要成分对铜绿假单胞菌质控菌株和多耐药菌株的体外抑菌作用,及金银花有机酸总样与氨基糖苷类抗生素联合使用对多耐药菌株的抑菌效果。方法平板倍比稀释法测定金银花中主要成分绿原酸、异绿原酸组分和木犀草素以及氨基糖苷类抗生素硫酸阿米卡星和庆大霉素对铜绿假单胞菌质控菌株和耐药菌株的最低抑菌浓度(MIC),在此基础上研究金银花有机酸总样与硫酸阿米卡星联合用药的抑菌效果。结果金银花主要成分绿原酸、异绿原酸组分和木犀草素对铜绿假单胞菌多耐药菌株的MIC分别为10,5和2.5 mg/mL,对质控菌株的MIC分别为>10,5和2.5 mg/mL。金银花有机酸总样与氨基糖苷类抗生素联合用药,可降低硫酸阿米卡星对多耐药铜绿假单胞菌的MIC,两者联用有一定的协同作用。结论金银花主要成分绿原酸、异绿原酸和木犀草素均有抑制铜绿假单胞菌的作用,其中绿原酸对耐药菌株的抑制作用最强。金银花有机酸组分与氨基糖苷类抗生素联合用药,对铜绿假单胞菌多耐药菌株具有协同抑制作用。

铜绿假单胞菌噬菌体PaP3基因组测序

目的 对新分离的铜绿假单胞菌dsDNA溶原性噬菌体PaP3进行基因组测序。方法 用CsCl梯度离心纯化噬菌体PaP3颗粒 ,提取噬菌体基因组DNA ,建立shot-gun随机文库 ,从文库中随机挑取克隆进行测序并完成序列组装 ,同时通过限制性内切酶图谱结合酶切片段的变性、复性实验分析基因组末端。结果 共进行了 778条序列的测定与拼接 ,测序量达到 1 3 5倍覆盖率 ,得到一条长为 4 42 4 9bp的重叠群 ,此重叠群错误率为 9 4 6ERR 1 0KB ,测序结果和酶切图谱分析表明该PaP3基因组是一 4 42 4 9bp长的线性平端dsDNA分子。其碱基组成为A =2 4 2 4 % ,G =2 6 1 8% ,T =2 3 6 3% ,C =2 5 94 % ;稀有碱基 =0 ;A +T =4 7 87% ,C +G=52 1 3%。结论 噬菌体PaP3基因组是由 4 42 4 9bp组成的线性平端双链DNA分子。测序完成为生物信息学分析和功能基因研究奠定了基础。

噬菌体PaP3多糖解聚酶对铜绿假单胞菌生物膜的作用研究

目的检测重组铜绿假单胞菌噬菌体PaP3多糖解聚酶对铜绿假单胞菌生物膜的降解活性。方法经FITC-ConA/PI荧光双染色后,采用激光扫描共聚焦显微镜观察重组多糖解聚酶处理前后PA3生物膜的形态变化,以测定多糖解聚酶对生物膜的降解活性;测定多糖解聚酶作用前、后铜绿假单胞菌对4种敏感抗生素(乳酸环丙沙星、加替沙星、头孢他啶、硫酸庆大霉素)的MIC、MBC变化情况,从而判断多糖解聚酶对抗生素的协同杀菌作用。结果FITC-ConA/PI荧光双染色结果显示,经重组多糖解聚酶处理后,铜绿假单胞菌生物膜的胞外多糖组分少而分散,包裹在胞外多糖组分里的细菌数量也大大减少,表明多糖解聚酶确实能够特异性的降解生物膜的胞外多糖组分。多糖解聚酶作用后四种抗生素相应的MIC、MBC都出现了不同程度的降低,其中以头孢他啶降低最为明显,表明多糖解聚酶对抗生素具有协同杀菌活性。结论重组噬菌体PaP3多糖解聚酶在体外可以特异性的降解铜绿假单胞菌生物膜的胞外多糖,有利于抗生素通透生物膜,作用于菌体,具有协同抗菌作用。

铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素的耐药机制——耐药株外膜蛋白OprD_2缺失

目的;研究铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素的耐药机制。方法:以亚胺培南为代表,应用十二烷酸磺酸钠－聚丙烯酞胺凝胶电泳(SDS-PAGE)外膜蛋白图谱、凝胶分光光度扫描分析方法,分别研究临床分离的铜绿假单胞菌亚胺培南耐药株和亚胺培南敏感株。结果:耐药组OprD2相对含量显著低于敏感组。结论:OprD2的缺失是铜绿假单胞菌对以亚胺培南为代表碳青霉烯类抗生素耐药的主要原因。