不同栽培方式下大蒜各器官中蒜氨酸含量变化

为探究不同栽培方式下大蒜(Allium sativum L.)各器官出苗期、萌芽期、分化期、膨大期蒜氨酸含量变化,以2种大蒜为材料,分别进行土培和水培试验,采用HPLC法测定2种培养方式下大蒜植株中根、鳞茎、叶片3种器官的蒜氨酸含量。结果表明,在出苗期、萌芽期、分化期,土培方式下2种大蒜植株根中蒜氨酸含量均呈先下降后升高的趋势,水培方式下2种大蒜植株根中蒜氨酸含量均基本保持不变;土培方式下2种大蒜植株鳞茎中蒜氨酸含量均呈先降低后升高的趋势,水培方式下2种大蒜植株鳞茎中蒜氨酸含量均呈先升高后降低再升高的趋势;土培方式下2种大蒜植株叶片中蒜氨酸含量均呈下降趋势,水培方式下2种大蒜植株叶片中蒜氨酸含量均呈升高趋势。综上,2种栽培方式下不同生长期大蒜植株各器官蒜氨酸含量变化存在差异,在萌芽期、分化期,水培方式下2种大蒜不同器官中蒜氨酸含量均高于土培,且在出苗期、萌芽期、分化期,水培方式下2种大蒜植株叶片中蒜氨酸含量均高于其他器官。

蒜氨酸通过CBS/CSE途径改善小鼠非酒精性脂肪肝病的研究

【目的】研究蒜氨酸对非酒精性脂肪肝病(NAFLD)小鼠肝脏中胱硫醚-β-裂解酶(cystathionine-β-synthase,CBS)、胱硫醚-γ-裂解酶(cystathionine-γ-lyase,CSE)表达的影响,阐释蒜氨酸改善NAFLD的作用途径,为临床药物研发提供科学依据。【方法】50只雄性C57/6J小鼠随机分为5组:正常组、模型组、硫氢化钠组、蒜氨酸组和蒜氨酸+PAG组(DL-炔丙基甘氨酸,DL-propargylglycine,PAG),每组10只。正常组饲喂普通饲料,其他4组饲喂高脂饲料。蒜氨酸组灌胃给予蒜氨酸20 mg/kg;蒜氨酸+PAG组灌胃给予蒜氨酸20 mg/kg,同时腹腔注射PAG 15 mg/kg;硫氢化钠组腹腔注射硫氢化钠2 mg/kg;正常组和模型组灌胃给予等剂量的蒸馏水,每天1次,每周称体重1次,预防给药6周后处死,观察肝脏形态学和病理学变化,检测血清中总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、高密度脂蛋白(high density lipoprotein,HDL-C)、低密度脂蛋白(low density lipoprotein,LDL-C)的水平,Western blotting检测肝脏组织中CBS和CSE蛋白表达水平。【结果】与正常组相比,模型组小鼠体重显著增加(P<0.05),其他组小鼠体重无显著变化(P>0.05)。形态学观察显示,模型组小鼠肝脏偏黄无光泽,成花斑状,其他组小鼠肝脏表面光滑、质地均匀、颜色与正常组小鼠接近。肝脏病理学HE染色可见,正常组切片正常,模型组出现明显脂肪空泡和脂滴沉积,说明脂肪肝模型建立成功;与模型组相比,硫氢化钠组和蒜氨酸组均有明显好转;与蒜氨酸组相比,蒜氨酸+PAG组抗脂肪变性作用减弱。与正常组相比,模型组小鼠血清中TG、TC、LDL-C均显著升高(P<0.05),各给药组小鼠TC、TG、LDL-C相较于模型组显著降低(P<0.05)。与正常组相比,模型组小鼠CBS和CSE蛋白表达水平显著下降(P<0.05),硫氢化钠组和蒜氨酸组干预后CBS和CSE蛋白表达水平显著或极显著上调(P<0.05;P<0.01);与模型组相相比,蒜氨酸+PAG组小鼠CBS和CSE表达无显著差异(P>0.05)。【结论】蒜氨酸可明显增加高脂饮食诱导的NAFLD小鼠肝脏组织中CBS和CSE表达,改善血清中血脂各项指标,减少小鼠肝细胞脂质沉积,发挥保护肝脏作用。

基于网络药理学和体外实验验证大蒜含硫化合物蒜氨酸抑制慢性气道炎症的作用机制研究

目的通过网络药理学、分子对接模拟和体外细胞实验探讨蒜氨酸治疗慢性气道炎症的相关作用机制。方法运用数据库整理分析蒜氨酸与疾病共同靶点,进行KEGG通路富集分析,构建可视化药物-靶点-通路-疾病网络图。利用分子对接技术模拟获得相关通路蛋白与蒜氨酸结合能。通过MTT实验检测蒜氨酸对16HBE细胞活性的影响,并利用流式细胞术观察蒜氨酸对细胞氧化应激的保护作用,采用ELISA法检测蒜氨酸对细胞上清液中IL-6、TNF-α表达的影响、Western blot法检测各组中IL-6、TGF-β1、PPARα蛋白表达水平。结果蒜氨酸与疾病关键潜在靶点有EGFR、MMP9、AKT1、MAPK1、PPARα等,KEGG通路富集分析得到主要信号通路有MAPK信号通路和PPAR信号通路等,分子对接实验中蒜氨酸与MMP9、AKT1、STAT、PPARα结合能稳定,小于-20.92 kJ·mol^(-1)。体外细胞实验结果表明蒜氨酸对细胞无明显毒性作用,结果显示蒜氨酸可以明显降低炎症状态下细胞内过多的活性氧水平,上调PPARα表达,并显著下调炎症因子IL-6、TNF-α与TGF-β1的表达。结论蒜氨酸能改善因香烟烟雾与脂多糖刺激下16HBE细胞的氧化应激和炎症反应,可能通过调控PPARα信号通路改善细胞炎症损伤状态,从而恢复细胞内正常的抗氧化、炎症反应。

蒜氨酸通过激活自噬改善HepG2细胞脂质的积聚

研究蒜氨酸对棕榈酸诱导的HepG2细胞脂质积聚的影响,并探讨蒜氨酸的作用机制与自噬的关系。利用CCK8法测定细胞活性,采用尼罗红染色法观察细胞内脂质堆积情况,并使用ELISA试剂盒法检测甘油三酯和总胆固醇含量,采用WesternBlot测定自噬标志蛋白含量。结果显示,与空白组相比,阳性对照组中HepG2细胞的总胆固醇和甘油三酯含量显著增加,分别增加约1.69和1.36倍;而在蒜氨酸在40~160μmol/L浓度范围作用下,细胞脂滴减少,总胆固醇和甘油三酯显著降低,且呈现剂量依赖性,在160μmol/L浓度的蒜氨酸作用下总胆固醇和甘油三酯含量均极显著下降,分别降低了37.52%和33.33%。同时,蒜氨酸在80~160μmol/L浓度范围内显著增加自噬标志蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比例,分别增加了23.87%和66.13%。因此得出,蒜氨酸改善了棕榈酸诱导的HepG2细胞脂质积聚,并可能通过激活细胞自噬的活性起到改善细胞脂质积聚的作用。

蒜氨酸药用制剂与生物活性研究进展

蒜氨酸为大蒜氨基酸成分,对机体无毒副作用,在体内代谢酶作用下分解成大蒜素,具有多种药理作用和广阔的临床应用前景。本文就蒜氨酸的分离提取、制剂及生物活性研究现状进行综述,以供参考。

高效液相色谱测定大蒜原料及大蒜片中蒜氨酸和大蒜素的方法研究

本文利用蒜氨酸的改性衍生物,建立了一种提取蒜氨酸和大蒜素的独特样品制备方法。对蒜氨酸采用酶抑制剂水溶液,邻苯二甲醛(OPA)试剂为衍生试剂,在pH值为9.0~10.0条件下提取,获得较好的反应和稳定性。用pH 6.0的醋酸钠缓冲液提取大蒜素,以获得更稳定的大蒜素。结果显示,5℃的进样温度可使蒜氨酸和大蒜素在溶液中保持48 h的稳定。

蒜氨酸和蒜氨酸酶的制备及抑菌作用的研究

从大蒜(Allium Sativum L.)分离纯化了蒜氨酸酶和蒜氨酸,对它们抑菌作用的研究表明,蒜氨酸酶对一些致病的革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌有较强抑制作用,尤其对白色假丝酵母菌(Candida albicaus)和克柔假丝酵母菌(Candida krusei)两种真菌有明显的抑制作用。

大蒜中含硫氨基酸研究进展

介绍以蒜氨酸 (alliin,SACS)为代表的大蒜等百合科植物中含硫氨基酸化学和药理等方面的研究进展 。

HPLC测定不同产地大蒜中蒜氨酸的含量

目的建立高效液相色谱法测定不同产地大蒜中蒜氨酸的含量。方法采用色谱柱ZirchromODS柱,流动相甲醇水(3∶7)为,检测波长214nm。结果蒜氨酸进样量在0.0103～0.5151mg·mL-1范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9998),平均回收率98.7%。日内精密度RSD为1.1%,日间精密度RSD为1.9%。结论实验表明该法简便、快速、适用性好。

大蒜中蒜氨酸的分离与鉴定

目的 蒜氨酸的分离与鉴定。方法 采用硅胶色谱柱分离 ,物理、化学和光谱学方法鉴定结构。结果 确定了蒜氨酸的结构。结论 第一次利用 1D -NMR和 2D -NMR技术完整地确定了蒜氨酸中所有碳氢的信号归属。

金属离子对蒜氨酸酶活性的影响

旨在对大蒜中的蒜氨酸酶和蒜氨酸进行提取的基础上,研究不同金属离子对蒜氨酸酶活性的影响。研究表明,大多数金属离子对蒜氨酸酶活性有影响,其中Mg2+、Fe3+、Ca2+、Fe2+、Mn2+对蒜氨酸酶有明显的激活作用,且这种激活作用在有甘油、葡萄糖、蔗糖等多羟基化合物存在的条件下激活效果更好;Cu2+对蒜氨酸酶有抑制作用。

蒜氨酸的热分解及其机理分析

为明确蒜氨酸在水溶液中的热稳定性,研究了蒜氨酸水溶液的热分解动力学过程,拟合得到动力学参数:活化能为80.5 kJ/mol,指前因子为1.27×10~7。采用气相色谱-质谱联用方法检测蒜氨酸水溶液在不同反应温度条件下的热分解产物,发现随着反应温度的升高,二烯丙基二硫醚的含量由91.59%持续降低至53.62%,而二烯丙基三硫醚的含量则先增加后减少,二烯丙基四硫醚的含量始终呈增加趋势,说明高温可促进硫醚类化合物的断裂和重排。采用质谱和2,4-二硝基苯肼法分析液相产物,证实产物中含有S-烯丙基-L-半胱氨酸钠盐和丙酮酸。采用B3LYP方法,在3-21+G(d,p)基组条件下,优化反应物与产物的结构,对蒜氨酸的分解过渡态进行理论计算,结合蒜氨酸的分解动力学以及热分解产物分析后初步推断出:蒜氨酸分解过程中会形成一个五元环的过渡中间体,而后发生Cope消除生成次硫酸与丙酮酸,次硫酸进一步反应,形成二烯丙基二硫醚与二烯丙基三硫醚等一系列产物。

HPLC法测定大蒜中蒜氨酸和大蒜素的含量

建立了大蒜中大蒜素和蒜氨酸含量测定的HPLC法。结果表明:蒜氨酸的测定条件为,YMC-PackODS-A C18(25 cm×4.6 mm)色谱柱,流动相为20%甲醇,流速0.7 mL/min,检测波长214 nm;大蒜素的测定条件为,YMC-Pack ODS-A C18(25 cm×4.6 mm)色谱柱,流动相为85%甲醇,流速0.8 mL/min,检测波长214 nm;蒜氨酸和大蒜素的平均回收率分别为,89.9%±1.6%和87.2%±1.3%,精密度(RSD)分别为1.02%和1.46%;大蒜中蒜氨酸和大蒜素的含量分别为,1.67%和0.93%。

蒜氨酸与牛及人血清白蛋白的相互作用

运用荧光光谱和同步荧光光谱法,研究在pH 7.40的Tris-HCI缓冲体系下,蒜氨酸与牛血清白蛋白(BSA)和人血清白蛋白(HSA)的相互作用。采用荧光分光光度计,以280nm为激发波长,扫描300~500nm范围的荧光发射光谱;分别设置波长差Δλ=15nm和Δλ=60nm扫描同步荧光光谱图;用Stem-Volmer和Lineweaver-Burk方程及热力学方程处理数据。荧光光谱法结果表明蒜氨酸能猝灭BSA及HAS的荧光;得到蒜氨酸与BSA反应的结合常数在298和310K时分别9.81×10~2和6.15×10~2 L·mol^(-1);与HSA反应的结合常数在298和310K时分别2.21×102和6.84×10~2 L·mol^(-1);蒜氨酸与两种蛋白的反应均为自发进行;与BSA的作用力为静电作用而与HSA的作用为疏水作用力;同步荧光光谱表明,蒜氨酸与BSA作用过程中主要影响酪氨酸残基,对HSA中的两种氨基酸残基均有影响。实验结果为研究蒜氨酸与生物小分子物质相互作用的机制提供了一定的理论依据。

蒜粉中蒜氨酸酶的分离纯化及性质测定

蒜粉以Na/K磷酸缓冲液抽提、25%～40%(NH4)2SO4分级沉淀后,用Sephadex G-200柱分离得到纯化200倍的电泳纯蒜氨酸酶.测定其性质的结果表明,此酶在25℃下对半胱氨酸亚砜的Km为0.87 mmol·L-1,Vmax为0.46μmol·min-1,最适反应温度为40℃,热稳定性的温度范围在45℃以下,最适pH为6.6.

蒜氨酸标准物质的定值研究

建立蒜氨酸标准物质的定值方法。鲜蒜经一系列提取、分离、纯化得蒜氨酸标准物质。应用高效液相色谱面积归一法确定蒜氨酸标准物质的纯度。随机抽取10瓶样品进行均匀性检验,经F检验,样品均匀性良好。长期稳定性结果经t检验表明在4℃条件下蒜氨酸的稳定期不少于43个月。采取9个实验室协作定值的方法对样品进行检测定值,定值结果由标准值和不确定度表示为(99.49±0.95)%。研制的蒜氨酸标准物质通过了国家标准委的审评,并已应用于实际检测中。

高效液相色谱法测定大蒜中蒜氨酸含量

采用高效液相色谱法对大蒜中的蒜氨酸进行定性定量研究,利用微波灭酶、水煮灭酶、有机溶剂冷冻灭酶3种方法对大蒜中蒜氨酸进行提取。蒜氨酸的出峰时间为3.717min,测得蒜氨酸的含量为:0.823%、0.730%和0.156%。同时对大蒜破碎放置1d后体系中剩余蒜氨酸的含量进行了分析,测得剩余蒜氨酸含量占蒜氨酸总量的23.0%。通过向破碎的大蒜体系中添加磷酸吡哆醛(PLP),能够显著提高蒜氨酸的转化率。

蒜氨酸、蒜酶及二者联用对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的抗菌作用

目的了解蒜氨酸、蒜酶及蒜氨酸+蒜酶对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的体外抗菌活性。方法采用液体稀释法、平板计数法检测蒜氨酸、蒜酶及蒜氨酸+蒜酶对10株临床分离的MRSA体外抗菌活性,并采用菌落法绘制时间-杀伤曲线。结果蒜氨酸和蒜氨酸+蒜酶均对MRSA有抗菌活性,而蒜酶无作用。结论蒜氨酸和蒜氨酸+蒜酶均为对MRSA敏感的抗菌药物,有望用于治疗由MRSA引起的感染性疾病。