蒿本内酯对葡聚糖硫酸钠诱导的溃疡性结肠炎小鼠的改善作用

目的:探究蒿本内酯(ligustilide,Lig)对葡聚糖硫酸钠(dextran sodium sulfate,DSS)诱导溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)小鼠的改善作用及机制。方法:将60只雄性SPF级C57BL/6小鼠随机分成6组,分别为空白组、DSS组、阳性药柳氮磺吡啶(sulfasalazine,SASP)组、Lig低、中、高剂量组。DSS组小鼠自由饮用3%DSS水溶液7 d复制UC模型,同时对Lig低、中、高剂量组小鼠灌胃给予药物干预治疗。通过记录小鼠每日体重和结肠长度,检测疾病活动指数(disease activity index,DAI)评分,采用酶联免疫吸附测定试剂盒定量检测血清中TNF-α、IL-6和IL-1β的表达水平,检测结肠中TLR4/NF-κB蛋白表达水平,并结合苏木素-伊红染色实验,探究Lig对小鼠UC的作用及机制。结果:与空白组比较,DSS组小鼠体重显著减轻(P<0.05),结肠长度显著缩短(P<0.05),DAI评分显著升高(P<0.05),肠道出现大量炎症性浸润现象,且结肠组织中TNF-α、IL-6和IL-1β表达水平显著升高(P<0.05);与DSS组比较,Lig中剂量组和高剂量组小鼠的肠道组织中TNF-α、IL-6和IL-1β的表达以及TLR4/NF-κB信号均被显著抑制(P<0.05),表明Lig中剂量组和高剂量组小鼠肠道损伤得到显著改善。结论:Lig能有效改善DSS诱导的小鼠UC,其机制可能是抑制NF-κB信号通路的激活。

川芎中洋川芎内酯A和Z-蒿本内酯的HPLC法测定

建立了HPLC法测定川芎药材中的洋川芎内酯A和Z-蒿本内酯。采用ZorbaxSB-C18色谱柱,以乙腈-1%乙酸为流动相,梯度洗脱,检测波长280nm。洋川芎内酯A和Z-蒿本内酯在0.0488～2.44mg/ml和0.0409～2.05mg/ml浓度范围内线性关系良好。回收率为98.77%和99.05%,RSD为0.83%和1.10%。

蒿本内酯镇咳作用研究

目的研究蒿本内酯对小鼠、豚鼠的镇咳作用。方法将小鼠随机分为5组:1.0、2.5、5.0 g/kg蒿本内酯组、阳性对照磷酸可待因组、空白对照组(给予食用豆油);豚鼠随机分为5组:5、201、00 mg/(kg.d)的蒿本内酯组、阳性对照磷酸可待因组、空白对照组(给予食用豆油)。采用氨水诱发小鼠咳嗽、枸橼酸诱发豚鼠咳嗽模型观察蒿本内酯的镇咳作用。结果蒿本内酯对氨水诱发小鼠咳嗽、枸橼酸所诱发的豚鼠咳嗽均有明显的抑制作用,显著延长咳嗽潜伏期(P<0.01);同时,明显减少咳嗽次数(P<0.01)。其中高剂量蒿本内酯组小鼠咳嗽潜伏期较空白对照组提高2倍,高剂量蒿本内酯组豚鼠咳嗽次数较空白对照组减少50%,蒿本内酯的镇咳作用呈剂量相关性。结论口服蒿本内酯具有明显的镇咳作用。

蒿本内酯早期应用对实验性脑出血大鼠的神经保护作用

目的探讨蒿本内酯(ligustilide,LIG)早期应用对大鼠脑出血(intracerebral hemorrhage,ICH)的神经保护作用。方法将96只雄性SD大鼠按随机分为被随机分为对照组(Control组)、脑出血+载体组(ICH+Vehicle组)、脑出血+蒿本内酯(ICH+LIG 5mg)处理组和脑出血+蒿本内酯(ICH+LIG 10mg)处理组,每组24只。Control组对右侧基底节区穿刺不注血,另3组均抽取右股动脉自体血100μL注入右基底节区造脑出血模型,药物治疗组术后5min经尾静脉给药,术后每天1次。术后24h,检测脑水含量、检测血脑屏障通透性和电镜观察线粒体的变化。术后72h,HE检测细胞形态和行为学评分。结果术后24h,ICH+Vehicle处理组脑含水量明显高于其它组,ICH+Vehicle处理组EB含量显著高于其它组,药物处理组脑水含量和血脑屏障通透性显著改善,差异均有统计学意义(P<0.05);电镜观察ICH+Vehicle处理组线粒体肿胀程度较其它组明显,药物处理组线粒体肿胀程度显著改善。术后72h,HE染色ICH+Vehicle处理组细胞数明显高于其它组,ICH+Vehicle处理组行为学评分显著低于其它组,药物处理组细胞坏死和行为学评分显著改善,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论蒿本内酯早期足量应用能够降低脑出血大鼠脑水肿,改善血脑屏障通透性,减少神经细胞坏死,改善脑出血大鼠神经功能。

蒿本内酯对急性肺损伤大鼠的肺泡灌洗液中TNF-α IL-1β的影响

目的通过动物实验评价当归有效成分蒿本内酯对急性肺损伤（ALI）的保护作用，探讨其防治Au的作用机制。方法SD大鼠40只随机分为四组：空白对照组、模型组、溶剂组、蒿本内酯组，每组各10只。采用气管内滴注内毒素法制备ALI大鼠模型，溶剂组腹腔注射脂肪乳，单体组腹腔注射剂量为10mg／kg，在造模前24h，造模，造模后24h内行腹腔注射给药，空白对照组不作任何处理。在造模后48h采集标本，并且行肺组织HE染色，进行肺泡灌洗液（BALF）中总细胞数及中性粒细胞计数，检测其总蛋白含量及乳酸脱氢酶（LDH），采用酶联免疫法检测大鼠支气管BALF中TNF-α、IL-1β的含量。结果与模型组和溶剂组比较，蒿本内酯显著减轻肺间质炎性细胞浸润、肺间质水肿、肺泡壁增厚、肺泡腔破坏程度，并且可以降低BALF中的总细胞数、中性粒细胞比值、总蛋白含量及TNF-α和IL—1β水平（P〈0．05）。其对BALF中的LDH影响不明显（P〉0．05）。结论蒿本内酯对ALI的治疗作用可能和其降低肺组织中TNF—α、IL-1β等重要促炎因子水平从而达到降低BALF中的总细胞数、中性粒细胞比值以及总蛋白含量有关。

蒿本内酯介导PI3K/AKT/mTOR信号通路对脑缺血再灌注损伤大鼠的神经保护机制研究

目的:探究蒿本内酯介导PI3K/AKT/mTOR信号通路对脑缺血再灌注损伤大鼠的神经保护作用机制。方法:40只大鼠随机分为假手术组、模型组、蒿本内酯组和蒿本内酯+PI3K抑制剂LY294002组,每组各10只。采用改良大脑中动脉线栓法制作大鼠缺血再灌注损伤模型,比较各组大鼠神经行为学评分、脑梗死体积比值、细胞凋亡阳性细胞数,检测脑组织中凋亡相关因子以及PI3K/AKT/mTOR信号通路的表达水平。结果:蒿本内酯组神经行为学评分、脑梗死体积比值、细胞凋亡阳性细胞数低于模型组和蒿本内酯+PI3K抑制剂LY294002组(P<0.05);蒿本内酯组大鼠脑组织中凋亡相关因子Bcl 2 mRNA水平高于模型组和蒿本内酯+PI3K抑制剂LY294002组(P<0.05),而Bax、caspase3 mRNA水平低于模型组和蒿本内酯+PI3K抑制剂LY294002组(P<0.05);蒿本内酯组大鼠脑组织中凋亡相关因子Bcl 2蛋白及p-PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白表达高于模型组和蒿本内酯+PI3K抑制剂LY294002组(P<0.05),Bax、caspase3蛋白表达低于模型组和蒿本内酯+PI3K抑制剂LY294002组(P<0.05)。结论:蒿本内酯可通过激活PI3K/AKT/mTOR信号通路来抑制神经细胞凋亡,进而发挥对脑缺血再灌注损伤大鼠的神经保护作用。

应用高速逆流一次性分离川芎中的蛇床内酯A和Z-蒿本内酯

目的:研究高速逆流色谱分离川芎活性成分的方法。方法:应用高速逆流技术一次性从川芎挥发油中分离出主要成分蛇床内酯A和Z-蒿本内酯。采用两相溶剂系统正己烷-乙酸乙酯-乙醇-水的四元体系,上相为固定相,下相为流动相,转速为892RPM,流速为1.2mL/min。结果:经过EI-MS和1H-NMR的鉴定,可以分别确认是蛇床内酯A和Z-蒿本内酯,纯度可以达到95%。结论:高速逆流色谱技术适合应用于分离内酯类这种极性较小的成分,分离度好,产物纯度较高。

蒿本内酯对三硝基苯磺酸诱导溃疡性结肠炎大鼠的保护作用及机制

目的研究蒿本内酯对三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的大鼠溃疡性结肠炎的保护作用及机制。方法按照体重将大鼠随机分为5组:空白组、模型组与低、中、高3个剂量实验组(蒿本内酯10,20,40 mg·kg^(-1)),每组12只。除空白组外其余大鼠结肠注入TNBS 100 mg·kg^(-1)和50%乙醇制备溃疡性结肠炎模型。造模后第3天开始灌胃给药,连续14 d。观察大鼠疾病活动指数,以酶联免疫吸附法测定血清中白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素^(-1)0(IL^(-1)0)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量。结果空白组、模型组与高、中、低3个剂量实验组的疾病活动指数评分分别为(0. 33±0. 14),(1. 83±0. 49),(0. 94±0. 27),(1. 18±0. 33),(1. 35±0. 30)分;这5组的IL-4水平分别为(118. 27±15. 23),(51. 35±9. 80),(93. 04±13. 26),(86. 31±11. 92)和(73. 09±10. 57) ng·L^(-1);这5组的IL^(-1)0水平分别为(85. 63±10. 05),(38. 13±5. 86),(70. 92±8. 87),(62. 09±9. 28)和(53. 38±7. 41) ng·L^(-1);这5组的TNF-α水平分别为(43. 63±5. 97),(81. 25±11. 36),(52. 89±6. 22),(63. 30±7. 83)和(72. 85±10. 73) ng·L^(-1)。模型组与空白组比较,所有指标差异均有统计学意义(均P <0. 01)。高、中2个剂量实验组与模型组比较,所有指标差异均有统计学意义(P <0. 05,P <0. 01)。结论蒿本内酯对大鼠溃疡性结肠炎具有保护作用,其机制可能与上调IL-4、IL^(-1)0和下调TNF-α水平有关。

蒿本内酯对心肌缺血再灌注大鼠心肌损伤的影响

目的探索蒿本内酯对心肌缺血再灌注(MIRI)大鼠心肌损伤的影响。方法60只SD大鼠随机分为对照组、I/R组、阳性对照组(地尔硫卓,5 mg/kg)、蒿本内酯组低中高剂量组(10、20、40 mg/kg)。造模后,超声心动图检查LVEF、FS和LVWT;ELISA检测血清CK-MB、Mb、cTnI、IL-18、IL-1β、IL-6、MCP-1和TNF-α;检测Caspase-3、ATG7、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、p62、PI3K/AKT/mTOR通路表达。结果与I/R组比,蒿本内酯高剂量组大鼠HR、LVSP、LVWT、LVEF、FS升高,血清CK-MB、Mb、cTnI、IL-18、IL-1β、IL-6、MCP-1和TNF-α下降(P<0.05);心肌组织中ATG7、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Caspase-3、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR表达下调(P<0.05),p62表达上调(P<0.05)。结论蒿本内酯可能通过抑制PI3K/AKT/mTOR的磷酸化,改善MIRI心肌组织损伤。

颈复康颗粒原药材配伍所含挥发油中Z-蒿本内酯和洋川芎内酯A的测定

目的建立颈复康颗粒原药材所含挥发油中Z-蒿本内酯及洋川芎内酯A的测定方法。方法采用气相色谱法,HP-5石英毛细管柱(30 m×0.32 mm),FID检测器,程序升温,检测器温度250℃,进样口温度250℃,分流比20∶1。结果 Z-蒿本内酯的线性范围是0.022 49～0.224 9 mg/mL,r=0.999 1;洋川芎内酯A的线性范围是0.016 38～0.163 8 mg/mL,r=0.999 9;Z-蒿本内酯和洋川芎内酯A的加样回收率分别为99.31%和100.3%,RSD为1.81%和1.32%。结论该方法简便、准确、重现性好,可用于检测颈复康颗粒药材所含挥发油中Z-蒿本内酯及洋川芎内酯A的量。

蒿本内酯通过lncRNA NKILA对干扰素α诱导的人脑血管外膜成纤维细胞增殖及凋亡的影响

该文旨在探讨蒿本内酯对干扰素α(IFN-α)诱导的人脑血管外膜成纤维细胞(HBVAF)增殖及凋亡的影响及其可能作用机制。HBVAF细胞经IFN-α诱导后建立细胞损伤模型,将不同剂量的蒿本内酯作用于IFN-α诱导的HBVAF细胞后,采用MTT法、平板克隆形成实验、流式细胞术分别检测细胞增殖、克隆形成及凋亡情况,qRT-PCR法检测lncRNA NKILA的表达量;为探究蒿本内酯与lncRNA NKILA对IFN-α诱导的HBVAF细胞增殖及凋亡的影响,将pcDNA、pcDNA-lncRNA NKILA分别转染至HBVAF细胞后加入IFN-α处理24 h,si-NC、si-lncRNA NKILA分别转染至HBVAF细胞后加入蒿本内酯与IFN-α共处理24 h,Western blot测定凋亡相关蛋白表达量。结果显示,蒿本内酯处理后细胞存活率和lncRNA NKILA的表达量升高(P<0.05),细胞克隆形成数增多(P<0.05),细胞凋亡率和Cleaved-caspase3、Cleaved-caspase9蛋白水平降低(P<0.05),且呈剂量依赖性;转染pcDNA-lncRNA NKILA后,细胞存活率升高(P<0.05),细胞克隆形成数增多(P<0.05),细胞凋亡率和Cleaved-caspase3、Cleaved-caspase9蛋白水平降低(P<0.05);转染si-lncRNANKILA可减弱蒿本内酯对IFN-α诱导的HBVAF细胞增殖、克隆形成及凋亡的作用。总之,蒿本内酯可通过上调lncRNA NKILA表达而促进IFN-α诱导的脑血管外膜成纤维细胞增殖、克隆形成及抑制细胞凋亡。

反相高效液相色谱法同时测定川芎中的四种内酯类化合物

用反相高效液相色谱法同时测定了川芎中的4种主要内酯类成分(洋川芎内酯-H、洋川芎内酯-I、瑟丹酸内酯和蒿本内酯).采用XDB-C8柱,以甲醇-1%乙酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,甲醇-1%乙酸水溶液的体积比在15 min内从55:45线性变化至100:0,流速0.8 mL/min,紫外检测波长280 nm.4种内酯类化合物的检测限为0.011～0.027 μg,回收率为96% ～108% .该方法操作简单,结果准确,重现性好,可用于川芎药材及饮片中4种内酯类化合物的同时测定,具有很高的实用价值.

SPE-HPLC测定四物合剂中藁本内酯的含量

目的:建立四物合剂中藁本内酯的含量测定方法。方法:应用HPLC-DAD检测法,采用固相萃取(SPE)技术对样品进行预处理,PhenomenexLunaC18柱(5μm,4.6mm×150mm),流动相为甲醇水(65∶35),流速1mL·min-1。测定了四物合剂中藁本内酯的含量。结果:藁本内酯在0.175～0.7μg范围内线性关系良好(r=0.9999),平均回收率100.2,RSD为1.6(n=6)。结论:该方法简便、快速准确,可用于该制剂的质量控制。

中心复合设计-效应面法优化复方延胡索微乳凝胶贴膏中挥发油的提取工艺

目的通过中心复合设计-效应面法优化挥发油的提取工艺。方法建立分析方法,采用水蒸气蒸馏法提取挥发油,选取加水量、浸泡时间、提取时间作为考察因素,挥发油收率、蒿本内酯、桂皮醛含量作为优化指标,得出最优处方,并进行验证性实验。结果最佳提取工艺为加10倍水,浸泡100 min,提取8 h,预计挥发油收率为0.413%,蒿本内酯含量39.20%、桂皮醛23.30%,实际值与预测值误差均小于0.05。结论中心复合设计-效应面法用于优选复方延胡索微乳凝胶贴膏挥发油提取工艺准确性高,所得工艺参数合理可靠。

少腹逐瘀丸多种挥发性成分同时检测的方法研究

目的:建立同时测定少腹逐瘀丸中桂皮醛、反式茴香脑、蒿本内酯含量的方法。方法:采用气相色谱法、DM-5毛细柱、程序升温、FID检测器进行检测。结果:肉桂中桂皮醛、小茴香中反式茴香脑、当归与川芎中蒿本内酯在各自的线性范围内与其峰面积呈良好的线性关系;平均加样回收率在98.29%~99.02%,RSD均符合规定。结论:该方法准确、简便、快速,可用于少腹逐瘀丸中多味药材的多种挥发性成分的检测。

挥发油包合物质量控制方法的改进

【目的】改进挥发油包合物质量控制的方法,提高其质量评定的准确性与可靠性。【方法】以当归挥发油为模型药物,采用正交设计优选饱和水溶液法制备包合物的处方和工艺。室温下甲醇超声萃取包合物中的挥发油,建立HPLC法测定挥发油中的主要有效成分蒿本内酯的含量,计算包合物的包封率和载药量,采用综合评分法进行质量评定。【结果】蒿本内酯的浓度在0.991~31.712μg/ml,线性关系良好;二次正交试验得到的最优处方为质量体积比为8：1,温度为40℃,包合时间为3 h,包封率与载药量分别为49.64%与9.64%。【结论】建立的挥发油质量控制方法准确、可靠,经处方优化后的包合物质量稳定,包封率与载药量均较高。

香姜颗粒挥发油的萃取工艺研究

目的：研究香姜颗粒挥发油超临界CO2流体萃取的最佳工艺.方法：以蒿本内酯含量和收油率为指标,95%乙醇为夹带剂,用正交试验法进行优选;用高效液相色谱法对蒿本内酯的含量进行测定,色谱柱为Phenomenex Luna C18（250mm×4.6mm,5μm）,流动相为甲醇-0.5%醋酸（30∶70）,检测波长为280nm.结果：香姜颗粒挥发油萃取的最佳工艺条件为萃取温度50℃,萃取压力45MPa,萃取时间3h,95%乙醇作为夹带剂.蒿本内酯在5.1～25.5 μg·mL-1浓度范围内线性关系良好（r=0.999 8）.结论：该工艺制备简便,操作可行,可为大生产提供理论依据.

补阳还五汤抗动脉粥样硬化8个效应成分UPLC-MS/MS测定方法研究

目的:建立补阳还五汤抗动脉粥样硬化8个效应成分(羟基红花黄色素A、芍药内酯苷、芍药苷、苦杏仁苷、黄芪甲苷、正丁烯基苯酞、Z-蒿本内酯和阿魏酸)的UPLC-MS/MS含量测定分析方法。方法:基于Citespace软件进行文献分析,明确补阳还五汤中8个抗动脉粥样硬化效应成分。采用ACQUITY UPLC BEH C_(18)(50 mm×2.1 mm,1.7μm)色谱柱,柱温40℃,以0.1%甲酸水(A)-乙腈(B)为流动相,梯度洗脱,进样量0.3 mL·min^(-1),电喷雾离子化(ESI)源,正离子模式扫描,多反应监测模式(MRM)检测各有效成分。结果:羟基红花黄色素A的质量浓度在10.00~1350.00 ng·m L^(-1)的范围内线性关系良好(r=0.9999),芍药内酯苷、芍药苷和苦杏仁苷的质量浓度均在2.00~2700.00 ng·m L^(-1)的范围内线性关系良好(r=0.9999),黄芪甲苷、正丁烯基苯酞和Z-蒿本内酯的质量浓度均在2.00~270.00 ng·mL^(-1)的范围内线性关系良好(r=0.9999),阿魏酸的质量浓度在5.00~675.00 ng·mL^(-1)的范围内线性关系良好(r=0.9998);平均回收率分别为94.6%、100.5%、96.3%、91.8%、108.2%、104.1%、99.8%、105.2%,RSD分别为8.5%、9.0%、5.2%、3.7%、3.9%、5.0%、7.1%、6.2%。补阳还五汤样品中上述抗动脉粥样硬化8个效应成分含量的RSD均<5%。结论:该方法重复性、回收率好,可为抗动脉粥样硬化复方补阳还五汤质量控制提供分析方法。

臭氧与硫熏处理后当归品质变化情况的比较

目的：比较臭氧处理及硫熏处理后当归品质的变化情况,为臭氧处理作为硫熏处理替代技术的可行性分析提供参考。方法：采用间歇臭氧处理及硫磺熏蒸的方法分别处理当归药材,通过RP-HPLC测定当归中阿魏酸含量,流动相乙腈-0.085%磷酸水溶液（17∶83）,检测波长316 nm;采用水蒸气蒸馏法提取当归挥发油,通过GC-MS检测当归挥发油中化学成分;以微生物含量为指标,评价不同处理方式对当归储藏周期的影响。结果：臭氧处理及硫熏处理都会影响当归中阿魏酸的含量,较未处理当归样品中的质量分数分别降低了23.72%和34.43%;臭氧处理及硫熏处理当归后会导致挥发油颜色发生变化,且挥发油体积较未处理的样品分别降低了53.85%和76.92%,挥发油化学成分数量和种类均发生了较大的变化,主成分蒿本内酯分别降低了10.65%和9.32%;经储藏周期试验发现,臭氧处理后当归中的微生物含量较硫熏处理后的样品少。结论：当归经臭氧处理后化学成分变化程度较硫熏处理小,有望成为当归硫熏处理的替代技术。

骨刺消痛胶囊HPLC特征图谱及多成分含量测定研究

目的:建立骨刺消痛胶囊的HPLC特征图谱,并对其5个主要成分(龙胆苦苷、甘草苷、丹皮酚、欧前胡素、异欧前胡素)进行含量测定,通过对不同企业骨刺消痛胶囊的研究,建立全面而统一的质量控制方法。方法:采用C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈(A)-水(B)为流动相进行梯度洗脱,流速1.0 mL·min-1,柱温为25℃,检测波长为274 nm(1~40 min,龙胆苦苷、甘草苷、丹皮酚)和254 nm(40.01~70 min,欧前胡素、异欧前胡素)。建立骨刺消痛胶囊HPLC特征图谱,同时测定5个主要成分的含量。结果:通过对21个厂家骨刺消痛胶囊的HPLC特征图谱进行研究,确定了12个共有峰,经过归属验证,指认其中6个特征成分,分别为龙胆苦苷(4号峰)、甘草苷(5号峰)、丹皮酚(7号峰)、欧前胡素(8号峰)、蒿本内酯(9号峰)、异欧前胡素(12号峰)。利用相似度评价软件对各批次样品特征图谱进行分析,相似度均在0.90以上。在建立的色谱条件下对其中5个主要成分进行测定,各组分间分离度良好,方法精密度和重复性RSD均<2.0%,供试品溶液在24 h内稳定,龙胆苦苷、甘草苷、丹皮酚、欧前胡素、异欧前胡素进样量分别在0.110 1~1.101、0.007 2~0.071 8、0.074 9~0.748 7、0.007 7~0.076 6、0.003 0~0.030 1μg范围内线性关系良好,加样回收率分别为103.4%、87.6%、84.7%、94.6%和96.3%。20批骨刺消痛胶囊中上述5个成分的含量分别为1.322~2.453、0.032~0.222、1.208~1.572、0.052~0.313和0.028~0.109 mg·g-1。结论:所建立的骨刺消痛胶囊HPLC特征图谱和定量测定分析方法可全面有效地评价该制剂的质量。