聚乙二醇修饰的蓖麻毒蛋白A链免疫原性与毒性的研究

目的研究单甲氧聚乙二醇(mPEG)与蓖麻毒蛋白A链(RA)偶联后RA的免疫原性和毒性的改变。方法从天然蓖麻籽中提取纯化的RA,经与具有活性马来酰亚胺基团的mPEG反应偶联,得到纯化的mPEG偶联的RA。用蛋白质印迹方法比较RA修饰前后的免疫原性,通过测定半数致死量(LD50)的方法比较RA修饰前后的毒性。结果mPEG偶联的RA的免疫原性和毒性均明显下降。偶联前蓖麻蛋白A链的LD50为2.45mg·kg-1,而mPEG修饰的RA的LD50为3.67mg·kg-1。结论聚乙二醇能遮蔽RA,使其免疫原性和毒性有很大的降低。

蓖麻毒蛋白的研究进展

蓖麻毒蛋白是从蓖麻籽中提取的一种强毒性毒素,其在医药、农业及军事领域有着重要作用,已成为当前抗癌药物研究的热点。主要对蓖麻毒蛋白的理化性质、致毒机理、提取纯化工艺及其在医药、生物农药领域的应用进行了综述,对蓖麻毒蛋白提取过程及其应用中存在的问题进行了讨论。由于蓖麻籽本身毒蛋白含量不高,油脂含量较高,对其进行毒蛋白的提取最终收率不高,影响蓖麻毒蛋白在医药、农业领域的推广应用。可利用生物工程技术对其基因进行改造,定向选育毒蛋白含量较高的蓖麻品种,促进蓖麻毒蛋白在生物农药和医药方面的应用。

蓖麻毒蛋白A链基因RNAi转化研究

通过基因沉默技术调控蓖麻毒蛋白A链基因的表达,以期获得低毒蓖麻新材料。利用基因克隆技术获得蓖麻毒蛋白A链基因762bp片段,命名为RTA基因。进一步利用该基因构建了植物RNAi表达载体pBI-RTA-S-AS,通过农杆菌介导法转化蓖麻子叶节,用卡那抗性筛选转化再生植株,PCR进一步鉴定转基因植株。结果表明:克隆得到目的基因长762bp,与预期结果一致;卡那抗性筛选和PCR鉴定结果显示,获得了3株转基因阳性植株。

蓖麻毒蛋白在蓖麻组培苗不同部位叶片中含量的测定

本研究优化了从蓖麻叶片中提取蛋白的过程,利用硫酸盐沉淀法、BCA试剂盒、UVwin5紫外软件V5.1.0、BandScan蛋白定量分析软件相结合的方法对蓖麻组培苗不同部位叶片中的毒蛋白的含量进行测定,结果表明,蓖麻叶片中毒蛋白的含量与叶位呈正比。

蓖麻毒蛋白A链基因克隆与重复表达载体构建

利用降落PCR的方法,从蓖麻基因组DNA中克隆毒蛋白A链基因的560bp片段;利用一步法将该基因的2个正义片段和2个反义片段分别与pB I-121质粒连接,构建含该基因的正义重复和反义重复表达载体,为利用共抑制技术抑制蓖麻毒蛋白A链基因表达的研究奠定基础。

从大容量抗体库中筛选抗蓖麻毒蛋白抗体

目的:从天然的单链大容量噬菌体抗体库中筛选特异性的抗蓖麻毒蛋白的人源抗体。方法:将蓖麻毒蛋白固定在抗原管上,通过5轮"吸附-洗脱-扩增"过程从大容量抗体库中筛选到特异性抗体,并转染到HB2151菌中,经IPTG诱导,制备抗蓖麻毒蛋白的可溶性单链抗体。结果:经过5轮筛选,获得40个与蓖麻毒蛋白结合的阳性克隆,其中12个特异性结合的克隆,指纹分析有7种不同的可变区片段;经过基因测序,分析了可变区基因的亚群。并将其制备成可溶性的抗体。结论:利用单链大容量抗体库获得抗蓖麻毒蛋白的噬菌体抗体并且成功制备成可溶性抗体,为今后的研究和应用奠定基础。

蓖麻毒蛋白的提取及应用研究

蓖麻毒蛋白是具有强烈细胞毒性的天然毒素之一,其毒性作用在生物农药、医学抗癌、细胞内转运机理研究、生物防恐等方面得到广泛的应用。简述了蓖麻毒蛋白的性质、结构及作用机理,并对蓖麻毒蛋白不同提取方法进行了比较,对其应用研究进行了介绍。

蓖麻毒蛋白的研究与应用

蓖麻毒蛋白(Ricin)是一种核糖体失活蛋白,由A、B两个肽链以二硫键共价相连接,其A链在B链的协助下,容易穿过细胞膜,破坏核蛋白体60S亚单位,抑制蛋白质的合成,导致细胞死亡。Ricin几乎对所有真核细胞具有很强的毒害作用,被认为是一种新型的很有希望的抗癌药物以及具有极大潜力的生物农药。Ricin能抑制昆虫的蛋白质合成,而植物自身能免受毒害,因此利用Ricin开发生物农药具有广阔前景。文章简述了Ricin的分离纯化方法、结构及性质,毒性作用机理,及其在医学,生物农药,军事等方面的应用。

聚乙二醇修饰的蓖麻毒蛋白A链的特性研究

目的:研究两种不同相对分子质量(Mr)的单甲氧聚乙二醇(Monomethoxy polyethylene glycol,mPEG)与蓖麻毒蛋白A链(ricin A-chain,RTA)偶联后三者的免疫原性和毒性的不同。方法:从天然蓖麻籽中提取纯化的RTA,并分别与相对分子质量为5KD和10KD的mPEG反应偶联,得到两种不同的RTA-mPEG偶联物。用蛋白质印迹方法比较RTA和不同的RTA-mPEG偶联物之间的免疫原性的变化,此外通过用噻唑蓝比色法(MTT)对RTA及不同偶联物的体外细胞毒性进行评价,并通过测定半数致死量(LD50)的方法比较它们的体内毒性。结果:经聚乙二醇修饰后的RTA,其毒性有明显的下降。此外,对其免疫原性的研究表明,RTA的PEG化也能降低RTA的免疫原性。结论:聚乙二醇能遮蔽RTA,使其免疫原性和毒性有很大的降低。且下降的程度同与RTA偶联的聚乙二醇的相对分子量成正相关。

蓖麻毒蛋白的研究与应用进展

对蓖麻毒蛋白的结构、毒性作用机理、纯化方法及其在肿瘤导向治疗和生物杀虫方面的研究进展进行了简述,并提出了问题和展望。

蓖麻毒蛋白A链与抗表皮生长因子受体单克隆抗体偶联物的抗肿瘤效应

目的:将蓖麻毒蛋白(ricin)A链(RTA)与表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)mab偶联形成免疫毒素(immunotoxin,IT),并评价该偶联物的体外抗肿瘤作用。方法:从蓖麻籽中提纯RTA,采用N-琥珀酰胺-3-(2-吡啶二硫)丙酸酯[N-succinimidyl-3-(2-pyridyldithio)-pro-pionate,SPDP]为偶联剂制备ITEGFR mab-RTA,以SDS-PAGE检测RTA的提取及IT的偶联,以DAB显色法检测IT对人肝癌HepG2细胞的结合能力,以间接ELISA方法测定IT的免疫反应性,以CCK-8法测定IT的体外抗肿瘤作用。结果:RTA从蓖麻籽中提取后,与EGFR mab成功偶联。IT基本保留了EGFR mab对HepG2细胞的结合能力和免疫反应性,及对HepG2细胞和LO2细胞表现了不同的体外细胞毒作用。结论:EGFR mab-RTA具有特异性抑制肝癌细胞增殖的作用,有望成为新型的抗肝癌药物。

具有灭鼠活性的蓖麻毒蛋白提取工艺的优化

以脱壳蓖麻籽为原料,在单因素实验的基础上,采用响应面法优化蓖麻粗毒蛋白的提取工艺。选取液料比、pH、浸提时间和硫酸铵饱和度4因素3水平进行中心组合实验。结果表明,蓖麻粗毒蛋白的最佳提取工艺条件为:液料比4.5 mL/g,pH 6.9,浸提时间38 h,硫酸铵饱和度65%。优化后蛋白提取率从2.82%提高到3.69%,SDS-PAGE凝胶电泳显示32 kD和34 kD两条蛋白带。

蓖麻毒蛋白的提取及分析

本文报道了蓖麻毒蛋白的提取和分析 ,采用琼脂糖 (Sepharose4 B)分离和纯化 ,研究了高效液相色谱法同时测定蓖麻毒蛋白和蓖麻碱 。

蓖麻毒蛋白研究及应用进展(综述)

蓖麻毒蛋白(ricin)是一种核糖体失活蛋白,它由分子量分别为32KD和34KD的A、B两条链组成,具有很强的细胞毒性。本文综述蓖麻毒蛋白的结构和物理性质、毒性作用机理、制备及在医疗和生物农药方面的应用前景。

导入蓖麻毒蛋白的供体淋巴细胞在小鼠皮肤移植中产生的特异免疫耐受

以小鼠为研究对象进行皮肤移植，受体为ＢＡＬＢ／Ｃ鼠，供体为Ｃ５７ＢＬ／６鼠。用氯化钙介导蓖麻毒蛋白（ｒｉｃｉｎ）进入供体鼠的脾细胞制成毒细胞，适时地注入受体体内。带有蓖麻毒蛋白的供体脾细胞，一方面可提供特异移植抗原（主要组织相容性抗原）使特异的Ｔ，Ｂ淋巴细胞识别；另一方面，它被识别裂解后，释放蓖麻毒蛋白，又可杀伤与其识别的Ｔ，Ｂ淋巴细胞，使受体对供体移植物产生耐受。实验共设两组，在皮肤移植前后分别用包埋蓖麻毒蛋白的供体脾细胞处理，两组移植皮片存活时间均比相应对照组有显著延长（ｔ＞ｔ０．０１）。混合淋巴细胞培养实验和淋巴细胞转化实验证明了实验组对供体细胞的免疫应答及免疫细胞的分化能力均受到抑制。对这一新设想进行了初步的研究。

蓖麻毒蛋白研究进展

蓖麻毒蛋白是在蓖麻中发现的,有很强的毒性,可抑制蛋白合成的蛋白质.作为一种重要的抗肿瘤药物及生物杀虫剂具有广阔的应用前景.对蓖麻毒蛋白的结构、毒性作用机理、纯化方法及其在肿瘤导向治疗和生物杀虫方面的研究进展进行了简述.

蓖麻毒蛋白的研究进展

蓖麻毒蛋白是从蓖麻的种子中提取的一种植物糖蛋白,是迄今为止所知天然毒素中最毒的一种.对蓖麻毒蛋白的结构、氨基酸组成、作用机理以及抗肿瘤、生物农药等多个方面的研究进展进行简述.

蓖麻毒蛋白提取过程条件优化

以蓖麻毒蛋白为研究对象,对其提取过程进行优化.采用硫酸铵沉淀,聚乙二醇包埋透析,分子筛层析和亲和层析等处理,从去壳蓖麻籽中分离纯化得到蓖麻毒蛋白,结果得到最优的体系为,高速冰冻离心过滤,聚乙二醇包埋透析,100ml缓冲液A冰浴匀浆,并在SDS--聚丙烯酰胺凝胶电泳中呈32kDa和34kDa两条蛋白带,证明蓖麻毒蛋白已被纯化均一.

抗CD71单抗与蓖麻毒蛋白A链免疫毒素的制备及其体外抗肝癌细胞效应的研究

目的因抗CD71单抗具有靶向定位特性,及利用蓖麻毒蛋白A链(RTA)的细胞毒性,将两者进行偶联,构建免疫毒素CD71 Mab-RTA,并研究其体外抗肝癌细胞效应。方法从蓖麻籽中提纯RTA,以N-琥珀酰胺-3-(2-吡啶二硫)丙酸酯[N-succinimidyl-3-(2-pyridyldithio)-propionate,SPDP]作为偶联剂,偶联抗CD71单抗,构建免疫毒素(IT),以SDS-PAGE检测IT,以间接ELISA方法测定IT的免疫反应性,以WST-1法测定IT的体外抗肝癌细胞效应。结果蓖麻籽经过研磨、过滤、亲和层析、凝胶层析、离子交换层析等步骤成功提纯RTA。提纯的RTA与CD71 mab进行偶联成功构建免疫毒素CD71 Mab-RTA,SDS-PAGE结果显示,在非还原状态下,为一条分子量>116kD的单一电泳条带,在还原状态下,为三条电泳条带,分别位于约55 kD处、约32 kD处及约28 kD处。间接ELISA结果显示,免疫毒素与单抗的曲线走势一致,但各浓度下OD值均较单抗组略低。WST-1结果显示,IT在各浓度梯度下均表现出对HepG_2细胞和LO_2细胞不同的杀伤作用(P<0.05)。结论 CD71 mab-RTA基本保留了免疫反应性,及表现出对HepG_2细胞和LO_2细胞的不同体外细胞毒效应,提示对肝癌细胞具有较好的靶向细胞毒作用,有望成为新型的抗肝癌药物。