血清S-100B蛋白、可溶性凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1、胶质纤维酸性蛋白检测在新生儿缺血缺氧性脑病病情严重程度中的诊断价值

目的:探讨血清S-100B蛋白、可溶性凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1(sLOX-1)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)与新生儿缺血缺氧性脑病(HIE)病情严重程度的关系。方法:选择80例HIE患儿作为观察组,另选择90例健康新生儿作为对照组,收集所有患儿一般资料,并检测两组患儿血清S-100B蛋白、sLOX-1、GFAP水平,分析HIE患儿血清S-100B蛋白、sLOX-1、GFAP与病情严重程度的相关性及预后不良的影响因素。结果:对照组血清S-100B蛋白、sLOX-1、GFAP水平低于观察组(均P<0.05)。重度组血清S-100B蛋白、sLOX-1、GFAP水平高于中度组、轻度组和对照组(均P<0.05)。Pearson相关分析显示,疾病严重程度与HIE患儿血清S-100B蛋白、sLOX-1、GFAP水平呈正相关(均P<0.001)。随访预后良好患儿59例,预后不良21例,经多因素Logistic回归分析显示,产程异常、病情重度、S-100B蛋白、sLOX-1、GFAP为影响HIE患儿预后的危险因素(均P<0.05)。结论:HIE患儿病情严重程度和预后与血清S-100B蛋白、sLOX-1、GFAP水平有关,监测其水平变化有利于临床早期完善干预方案改善预后。

BALB/c小鼠免疫重组蓖麻毒素B链蛋白的免疫机制研究

目的：探讨重组蓖麻毒素B链蛋白（rRTB）免疫雌性BALB/c小鼠的免疫机制。方法：雌性BALB/c小鼠分为rRTB组和PBS组,间隔14 d皮下多点注射,共4次。间接ELISA分析小鼠血清抗体效价和抗体分型,采用流式细胞仪检测脾细胞因子IFN-γ和IL-4。结果：血清IgG效价达到1∶10-7以上,且攻毒后产生二次免疫应答,与PBS对照组差别有统计学意义（P〈0.05）;IgG1达到1∶10-5以上,与PBS对照组差别有统计学意义（P〈0.05）;Ig G2a未发生明显变化。细胞因子检测结果表明IFN-γ的表达量与PBS组差异无统计学意义,而IL-4的表达量显著提高（P〈0.05）。结论：rRTB蛋白免疫可刺激小鼠产生高水平的特异性抗体和细胞因子,诱导以IgG1为主的抗体和Th2优势应答,为候选疫苗的研制奠定基础。

利用凝集素修饰的二氧化硅玻璃球去除胶原蛋白中的内毒素

利用凝集素分子对醣类有专一性吸附特性,对内毒素结构中的多醣类成分进行吸附,建立了凝集素去除胶原蛋白溶液中内毒素的吸附系统。二氧化硅玻璃经酸蚀,再以胺基硅烷进行胺化后,将凝集素嫁接其上。结果表明,1,2和5 g/L的凝集素对于胶原蛋白溶液中内毒素吸附率皆大于99%;30颗嫁接凝集素玻璃球可去除8.4 mL胶原蛋白溶液(浓度为2 g/L)中内毒素(去除率大于99%)。未来更可将嫁接凝集素玻璃球填充于管柱内部,利用管柱分离法去除胶原蛋白溶液中内毒素,建立有效、操作简单且成本低廉去胶原蛋白溶液内毒素装置。

非染色体结构维护凝集素Ⅰ复合物亚基G通过Akt信号通路促进卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的探讨非染色体结构维护凝集素Ⅰ复合物亚基G(NCAPG)调控卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭的机制。方法生物信息学GEPIA数据库分析NCAPG在卵巢癌组织中的差异表达。Western blotting检测正常卵巢上皮细胞IOSE80、卵巢癌A2780和SKOV3细胞中NCAPG的蛋白表达。NCAPG siRNA沉默实验分为空白组、对照组、siNCAPG-1组和siNCAPG-2组。NCAPG过表达实验分为空白组、对照组、NCAPG组、NCAPG+MK2206组和MK2206组。MTT实验检测细胞增殖活性;细胞划痕实验和Transwell实验评估细胞的迁移和侵袭能力;Western blotting检测细胞的磷酸化Akt(p-Akt)、总Akt(t-Akt)、增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、波形蛋白(vimentin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达水平。结果NCAPG在卵巢癌组织和卵巢癌细胞中高表达。沉默NCAPG可明显抑制卵巢癌SKOV3细胞的增殖、迁移和侵袭,p-Akt、PCNA、MMP-9、vimentin和N-cadherin表达减少,E-cadherin表达增多。过表达NCAPG质粒可促进卵巢癌A2780细胞增殖、迁移和侵袭,p-Akt、PCNA、MMP-9、vimentin和N-cadherin表达增多,E-cadherin表达降低。Akt抑制剂MK2206可明显抑制NCAPG的上述作用。结论NCAPG激活Akt信号通路,调控PCNA、MMP-9和上皮细胞-间充质转化(EMT)相关蛋白的表达,促进卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

基于生物信息学筛查CLEC3B蛋白及其在脓毒症诊断中的作用

目的:研究正常人与脓毒症患者血清差异表达蛋白中C-型凝集素域家族3成员B(CLEC3B)蛋白,探讨目标CLEC3B蛋白作为脓毒症分子标志物的可能性。方法:收集10名健康志愿者(健康组)和18例脓毒症患者(脓毒症组)外周血,利用数据独立采集法对外周血清蛋白数据进行采集,数据上传至i DEP在线平台分析脓毒症患者外周血中差异表达蛋白。并对这些差异蛋白进行生物信息学分析,筛选出脓毒症关键蛋白。酶联免疫吸附法(ELISA)验证并绘制关键蛋白受试者工作特征(ROC)曲线。结果:蛋白质组学分析筛选出138个差异表达蛋白(DEPs),其中34个蛋白显著下调,104个蛋白显著上调。DEPs主要富集在细胞过程、生物调节、生物过程调节、参与绑定、催化活化、分子功能监管、免疫系统、信号转导等。DEPs构建蛋白-蛋白相互作用网络(PPI)筛选出感兴趣的关键蛋白CLEC3B。ELISA实验表明脓毒症组患者CLEC3B蛋白浓度(297.73±22.00)ng/ml显著低于健康组(452.42±191.72)ng/ml,差异具有统计学意义(t=13.13,P=0.000)。CLEC3B蛋白的ROC曲线下面积为0.998,灵敏度为97.73%,特异度为100.0%。结论:CLEC3B蛋白在脓毒症组中显著降低,其灵敏度高,特异度高,可以作为脓毒症潜在的生物学诊断标志物。临床试验注册号中国临床试验注册中心,ChiCTR1900021261。

可溶性生长刺激表达基因2蛋白、半乳糖凝集素-3、B型钠尿肽联合检测对预测慢性心力衰竭不良预后的临床价值

目的探讨可溶性生长刺激表达基因2蛋白(sST2)、半乳糖凝集素-3(Galectin-3)、B型钠尿肽(BNP)联合检测对慢性心力衰竭(CHF)不良预后的临床价值。方法选取2019年4月至11月于蚌埠医学院第一附属医院住院的CHF患者131例为CHF组,选择同期体检且年龄和性别相匹配的无心力衰竭者40例为对照组。收集两组研究对象的临床资料及血清样本,采用ELISA法检测血清sST2和Galectin-3的表达水平,化学发光法检测血清BNP的表达水平;比较分析sST2、Galectin-3和BNP与CHF患者心功能分级的关系;记录CHF患者出院后6个月内不良心血管事件(MACE)的发生情况,并评估三者联合检测对预测CHF不良预后的临床价值。结果 CHF组血清sST2、Galectin-3和BNP的表达水平明显高于对照组(t分别为16.74、10.88,8.72,P<0.01),并随心功能分级增加而升高(F分别为130.77、83.70、184.18,P<0.01),但LVEF随心功能分级增加而减少(F=17.25,P<0.01);CHF患者中MACE组sST2、Galectin-3和BNP的表达水平明显高于非MACE组(t分别为9.43、8.08,9.79,P<0.01);sST2、Galectin-3和BNP预测CHF发生MACE的ROC曲线下面积(AUCROC)分别为0.891、0.853和0.881(P<0.05),三指标联合(sST2+Galectin-3+BNP)的AUCROC为0.910,敏感性为86.2%,特异性为83.3%(P<0.05),其预测效能更高。结论 sST2、Galectin-3、BNP联合检测对评估CHF病情严重程度及预测MACE发生具有一定的临床参考价值。

血清B细胞激活因子、髓鞘碱性蛋白、半乳糖凝集素-9在病毒性脑炎患儿中诊断价值分析

目的探讨血清B细胞激活因子(BAFF)、髓鞘碱性蛋白(MBP)、半乳糖凝集素-9(Gal-9)在病毒性脑炎患儿中的诊断价值。方法选择自2016年5月至2018年5月收治的70例病毒性脑炎患儿为研究对象,设为观察组,选择同期于我院常规体检的50例儿童作为体检组,分析两组及观察组中不同程度病情患儿的BAFF、MBP、Gal-9水平变化情况,分析其诊断价值。结果观察组患儿血清BAFF、MBP、Gal-9水平显著高于体检组,差异有统计学意义(P<0.05)。重症组患儿血清BAFF、MBP、Gal-9水平均显著高于其他组,中症组患儿血清BAFF、MBP、Gal-9水平均显著高于轻症组患儿,差异均有统计学意义(P<0.05)。血清BAFF、MBP、Gal-9联合检测的曲线下面积均高于单独检测,差异有统计学意义(P<0.05)。联合检测的特异度、准确度显著高于各指标单独检测,差异有统计学意义(P<0.05)。结论血清BAFF、MBP、Gal-9在病毒性脑炎患儿中呈高表达,且随疾病严重程度而升高,3项指标联合检测诊断病毒性脑炎具有较高的特异度、准确度,可作为诊断病毒性脑炎的重要指标,为靶向药物治疗病毒性脑炎提供新思路。

射血分数保留心力衰竭患者血清N末端B型利钠肽前体、半乳糖凝集素-3及心型脂肪酸结合蛋白表达

目的探讨射血分数保留心力衰竭(heart failure with preserved ejection fraction,HFpEF)患者血清N末端B型利钠肽前体(N-terminal B-type natriuretic peptide precursor,NT-proBNP)、半乳糖凝集素-3(galectin-3,Gal-3)及心型脂肪酸结合蛋白(heart-type fatty acid binding protein,h-FABP)的早期诊断及病情评估价值。方法回顾性选取2018年1月至2020年1月河南科技大学第三附属医院就诊住院的HFpEF患者的临床资料,将87例HFpEF患者设为HFpEF组,另选取同期在健康中心体检的50例健康老人为对照组。检测两组血清NT-proBNP、Gal-3及h-FABP水平差异,分析NT-proBNP、Gal-3及h-FABP对HFpEF的诊断价值。结果HFpEF组血清NT-proBNP、Gal-3及h-FABP水平显著高于对照组(P<0.05)。logistic回归分析显示,血清NT-proBNP、Gal-3及h-FABP高表达与HFpEF的发生密切相关(P<0.05)。随着心功能分级的升高,HFpEF患者血清NT-proBNP、Gal-3、h-FABP水平呈明显升高趋势(P<0.05)。血清NT-proBNP、Gal-3和h-FABP联合检测对HFpEF诊断的受试者工作特征曲线下面积为0.928,诊断敏感度为93.1%,特异度为80.0%。结论HFpEF患者血清NT-proBNP、Gal-3、h-FABP水平明显升高,检测血清NTproBNP、Gal-3、h-FABP水平有助于对HFpEF的早期诊断和病情评估。

家蚕微孢子虫蓖麻毒蛋白B链基因RBL463-4的克隆及在毕赤酵母中的表达

基于家蚕微孢子虫(Nosema bombycis,Nb)基因组中发现的蓖麻毒素B链(ricin B chain)序列数据设计引物,提取感染Nb第8天的家蚕幼虫中肠组织总RNA,利用RT-PCR方法扩增出RBL463-4基因,并将其克隆进毕赤酵母表达载体pPICZα-A中,构建重组酵母表达载体pPIC-R4。重组质粒pPIC-R4经SacⅠ线性化后,电击导入毕赤酵母X33中,利用博莱霉素(zeocin)筛选获得重组酵母X33/RBL463-4。以2%甲醇诱导表达后,经SDS-PAGE、Western blot检测表达产物,结果出现25kD和20kD2种蛋白,其中25kD蛋白与预测融合蛋白大小一致,表明获得了RBL463-4的融合蛋白。研究结果为进一步探究RBL463-4蛋白在家蚕微孢子虫侵染宿主过程中的功能作用奠定了基础。

脑缺血时半乳糖凝集素-3对大鼠脑皮质中bcl-2、BAX及caspase-3表达的影响

目的通过脑缺血/再灌注损伤模型,测定脑缺血时半乳糖凝集素-3(Gal-3)对B淋巴细胞瘤-2(bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(BAX)及含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(caspase-3)表达的影响,从而为脑缺血的发病机制提供一定的实验依据。方法雄性SD大鼠18只,建立大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)模型,缺血1.5 h,再灌注至24 h。采用随机分组法分为假手术组(sham)、缺血/再灌注组(I/R)和Gal-3 RNA干扰组(siRNA)。采用real-time PCR及western blot检测大鼠脑皮质中Gal-3、bcl-2、BAX及caspase-3 mRNA及蛋白表达变化。结果大鼠脑缺血/再灌注损伤后,脑皮质中Gal-3及bcl-2 mRNA及蛋白表达明显下调,分别为0.38、0.47和1.310、1.299;BAX及caspase-3 mRNA及蛋白表达明显上调,分别为1.41、1.55及1.076、1.155。而Gal-3 RNA干扰后,Gal-3及bcl-2 mRNA及蛋白表达明显下调,分别为0.24、0.14及1.014、1.058;BAX及caspase-3 mRNA及蛋白表达明显上调,分别为1.76、1.88及1.480、1.515。结论 Gal-3可能通过上调bcl-2、下调caspase-3及BAX mRNA及蛋白的表达,参与脑缺血/再灌注损伤的病理过程。

五步蛇毒毒中蛋白凝集素的发现及其凝集特性的研究

发现尖吻蝮蛇(Agkistrodon acutus)粗毒对动物细胞有凝集作用。顺序用DEAE—Sephadlex A-50,CM Sephadex C25柱层析,从尖吻蝮蛇毒中分离纯化出一种毒蛋白凝集素。经分子量,等电点和出血活性等实验测定确定该凝集素就是徐询等人早期分离、纯化的出血毒素Ⅲ(AaHⅢ)。这种凝集素对许多动物细胞都有凝集作用,例如脾淋巴细胞、HeLa细胞、人肾成纤维细胞和草鱼(Ctenoph argngodon idellus)。但对组细胞和血小板无作用。和植物凝集素PHA相比AaHⅢ产生细胞的凝集块体积要大些。对淋巴细胞起凝集作用的最低浓度为2.5ug/ml。能使HeLa细胞和淋巴细胞凝集在一起。如预先加肝素和溶菌酶可以抑制对淋巴细胞的凝集怍用。用溶菌酶(2mg/ml)和AaHⅢ(1mg/ml)在37℃′下保温2小时AaHⅢ的出血活性仍然存在。

血清AIF-1、Bmi-1、MAP19联合诊断宫颈癌的价值分析

目的探究宫颈癌患者血清中同种异体移植物炎性因子1(AIF-1)、B细胞特异性莫洛尼白血病毒插入位点1(Bmi-1)、甘露聚糖结合凝集素相关蛋白19(MAP19)水平变化及对宫颈癌患者的诊断价值。方法选取2023年1—12月武汉大学中南医院妇产科收治宫颈癌患者180例为观察组,另选取同期健康体检者180例为健康对照组。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测2组研究对象血清AIF-1、Bmi-1、MAP19水平;比较宫颈癌不同分期患者血清中AIF-1、Bmi-1、MAP19水平;绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清AIF-1、Bmi-1、MAP19水平对宫颈癌的诊断价值。结果与健康对照组比较,观察组患者血清AIF-1、Bmi-1、MAP19水平上升(t=13.054、13.598、10.601,P均<0.001);不同分期宫颈癌患者血清中AIF-1、Bmi-1、MAP19水平随分期升高而升高(F=32.001、8.232、10.602,P均<0.001);宫颈癌患者血清AIF-1、Bmi-1、MAP19高水平在病理低分化、HPV阳性、FIGOⅢ~Ⅳ期和淋巴结转移中比例升高(AIF-1:χ^(2)=41.162、27.607、13.718、23.824,P均<0.001;Bmi-1:χ^(2)=33.563、22.060、22.599、18.451,P均<0.001;MAP19:χ^(2)=49.585、14.913、25.545、13.605,P均<0.001);血清AIF-1、Bmi-1、MAP19水平及三者联合预测宫颈癌病变的AUC分别为0.759、0.726、0.751、0.839,三者联合优于各自单独预测价值(Z=2.499、3.363、2.749,P=0.012、<0.001、0.016)。结论宫颈癌患者血清AIF-1、Bmi-1、MAP19水平显著上升,且随宫颈癌分期升高而升高,三者联合对宫颈癌具有较高的诊断效能。

CLEC1B、DKK1、DRD4在原发性肝癌病变组织中的表达及临床意义探究

目的分析C型凝集素结构域家族1成员B(C-type lectin domain family 1 member B,CLEC1B)、分泌型蛋白Dickkopf 1(DKK1)、多巴胺受体D4(dopamine receptor D4,DRD4)在原发性肝癌(primary hepatic cancer,PHC)患者病变组织中的表达及临床意义。方法回顾性选取2022年1月~2023年1月在四川大学华西医院接受肝癌切除术且经术后病理证实为PHC的138例患者,取其癌组织与癌旁组织石蜡病理标本,分析其CLEC1B、DKK1、DRD4表达情况及和临床病理特征关联性,Pearson法分析CLEC1B、DKK1、DRD4的相关性。结果肝癌组织中CLEC1B、DRD4表达水平均低于癌旁肝组织,肝癌组织中的DKK1蛋白表达较癌旁肝组织更高(P<0.05),且3者均主要分布于细胞浆;CLEC1B低表达、DKK1高表达、DRD4低表达分别97例(70.29%)、91例(65.94%)、78例(56.52%),PHC患者的CLEC1B低表达与术前AFP水平、血管侵犯、远处转移、肿瘤出血等密切相关(P<0.05),DKK1高表达与术前AFP水平、BCLC Kinki分期、肿瘤数目、肿瘤大小密切相关(P<0.05),DRD4低表达与术前AFP水平、肿瘤数目、肿瘤大小、卫星结节、血管侵犯密切相关(P<0.05);Pearson相关分析显示,PHC患者CLEC1B、DRD4与DKK1表达水平呈负相关(r=-0.809、r=-0.774,P<0.001),CLEC1B与DRD4表达水平呈正相关(r=0.748,P<0.001)。结论CLEC1B、DRD4在PHC患者癌变组织中呈低表达,而DKK1呈高表达,且与临床病理参数有关,CLEC1B、DKK1、DRD4可能参与PHC发生发展,有一定检测意义。

半乳糖凝集素-3抑制剂柑橘果胶对心力衰竭大鼠血浆N端B型利钠肽原及心肌纤维化的影响

目的:探讨半乳糖凝集素-3抑制剂柑橘果胶对心力衰竭大鼠血浆N端B型利钠肽原(NT-proBNP)及心肌纤维化的影响。方法:将心力衰竭大鼠(42只)随机平分为模型组、柑橘果胶A组和柑橘果胶B组。模型组给予10 mg/(kg·d)的0.9%氯化钠溶液灌胃。柑橘果胶A组、B组分别给予0.10、0.20 mg/(kg·d)的柑橘果胶加入0.9%氯化钠溶液灌胃,连续治疗并观察4周。检测三组大鼠血浆NT-proBNP表达及心肌纤维化的变化情况。结果:在治疗第2、4周,柑橘果胶A组、B组室间隔厚度(IVS)高于模型组,左心室舒张末期内径(LVDD)低于模型组,且柑橘果胶B组与柑橘果胶A组比较差异有统计学意义(均P<0.05)。在治疗第4、8周,柑橘果胶A组和B组NT-proBNP、心脏指数、心肌胶原容积分数以及Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白相对表达水平低于模型组,且柑橘果胶B组上述指标低于柑橘果胶A组(均P<0.05)。结论:半乳糖凝集素-3抑制剂柑橘果胶能够抑制心力衰竭大鼠血浆NT-proBNP的表达,改善心肌纤维化,进而改善心脏指数、心肌胶原容积分数以及心脏结构形态。

抗人B细胞MAb—737与蓖麻毒蛋白偶联物对肿瘤细胞选择性杀伤

具有针对B细胞类la抗原特异反应性MAb—737与蓖麻毒蛋白通过二硫键连接成免疫毒素ricin—737体外0.1M乳糖存在时,此免疫毒素对含B细胞抗原的Burkitt＇s淋巴瘤细胞系Raji细胞表现出选择性地强力杀伤,半数杀伤浓度(IC50)为5×10-~11M。同样条件,对不含靶抗原的对照细胞K562没有显著杀伤,lC50为10-(~8)M,毒性比前者低500倍。游离毒蛋白IC50为5×10-~8M,比免疫毒素毒性低1000倍,动力学研究表明,免疫毒素作用1小时就可抑制靶细胞的增殖,并随处理时间延长,杀伤更趋显著。结果提示。

瑞舒伐他汀对载脂蛋白E基因缺陷小鼠动脉粥样硬化及LOX-1、NF-κBp65表达的影响

目的探讨3-羟-3-甲基戊二酰辅酶A(HMG-Co A)还原酶抑制剂瑞舒伐他汀对载脂蛋白E(Apo E)基因缺陷小鼠动脉粥样硬化及主动脉凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)、核因子-κB p65(NF-κB p65)表达的影响。方法 20只6周龄雄性Apo E基因缺陷小鼠随机分为高脂模型组(n=10)、瑞舒伐他汀药物干预组(n=10),高脂饮食喂养13周;10只6周龄C57BL/6J(野生型,W T)雄性小鼠作为正常对照组,正常饮食喂养13周。13周后,摘眼球取血测定血浆总胆固醇(TCH)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)的水平。处死小鼠取主动脉,行HE染色;采用Western blotting和RT-PCR检测定量分析主动脉组织LOX-1、NF-κB p65表达变化。结果与高脂模型组比较,瑞舒伐他汀药物干预组血清中TCH、TG、LDL-C水平明显降低(P<0.05)。HE染色结果显示,与正常对照组相比,高脂模型组主动脉粥样硬化病变程度明显加重,瑞舒伐他汀药物干预组主动脉粥样硬化病变程度减轻。与正常对照组相比,高脂模型组主动脉LOX-1、NF-κB p65蛋白和m RNA的表达均明显增加(P<0.05),瑞舒伐他汀药物干预组LOX-1、NF-κB p65蛋白和m RNA的表达均减少(P<0.05)。结论瑞舒伐他汀可明显降低血脂,减轻Apo E基因缺陷小鼠主动脉组织粥样硬化病变程度,其抗动脉粥样硬化作用可能与下调LOX-1、NF-κB p65的表达有关。

幽门螺杆菌HpaA-CtxB融合蛋白的表达及其免疫原性研究

目的 :探讨幽门螺杆菌融合蛋白粘附素 霍乱毒素B亚单位 (HpaA CtxB ,HCTB)经口服免疫小鼠后 ,机体产生的免疫应答。方法 :用PCR方法扩增HpaA和CtxB两个目的基因片段 ,将它们分别克隆至pET 32a( + )和pQE 30质粒上 ,然后同时插入pQE 30表达载体中 ,构建含双基因的的表达质粒pQE HCTB ,转化E .coliDH5α,经IPTG诱导表达融合蛋白HCTB ;West ernblot分析其免疫反应性。融合蛋白经镍离子柱纯化后 ,HCTB和HpaA分别给小鼠灌胃进行免疫 ,ELISPOT和ELISA分别检测小鼠胃粘膜、派伊尔小结 (Peyer′spatches ,PP)抗原特异性抗体分泌细胞 (ASC) ,和血清IgG、IgA、小肠粘液sIgA和粪便sIgA。结果 :经测序HCTB融合基因片段由 116 1bp组成 ,为编码 387个氨基酸残基的多肽。经SDS PAGE分析相对分子量 (Mr)约为4 0 0 0 0。可溶性表达占全菌的 2 5 %以上 ,经亲和层析后可获得纯度为 92 %以上的重组蛋白。Westernblot分析其能分别与HpaA抗血清和CT抗血清特异性反应。灌胃免疫小鼠后ELISPOT和ELISA检测结果 ,胃和PPsIgA ASC、IgG ASC数量明显增加 ,尤以sIgA ASC为甚 ,同时血清IgA、IgG ,粪sIgA ,肠粘液sIgA也明显高于HpaA组和对照组 (P <0 0 5和P <0 0 1)。结论 :融合蛋白HCTB经口服免疫可有效诱导粘膜免疫应答 。

蛇毒C型凝集素家族结构及抗原表位预测

目的:预测和设计蛇毒C型凝集素家族蛋白(CLPs)共同B细胞抗原表位肽。方法:利用expasy蛋白质数据库在线软件Align对CLPs进行序列比对。运用DNAstar和Antheprot软件对蛇毒CLP家族的二级结构和表面特性,如亲水性、表面可及性、免疫原性、柔韧性等,综合各结果预测其抗原表位。采用Swiss-model和SEPPA在线工具进行三维结构和空间表位预测。结果:蛇毒CLP家族存在多个潜在的抗原表位位点,其中46～58区和98～110区肽段为可能的B细胞表位区。结论:综合考虑以上2个肽段家族同源性和表面特征,确定N端附近的46KTWADAEKFCTEQ58为蛇毒CLP可能的共同抗原区。

黄芩素对内毒素诱导的内皮细胞细胞间黏附分子-1表达的影响

目的研究黄连解毒汤有效成分黄芩素对细菌脂多糖(LPS)诱导的人血管内皮细胞细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和抑制蛋白κB(I-κB)表达的影响。方法分别用LPS(终浓度1μg/mL)或LPS+黄芩素(终浓度1μmol/L、10μmol/L、50μmol/L)处理生长良好的ECV-304细胞,用RT-PCR和WesternBlot法检测ICAM-1表达情况和I-κB含量变化。结果LPS刺激ECV-304细胞可促进I-κB降解,上调ICAM-1表达水平,与空白对照组比较有统计学意义(P<0.01);黄芩素预处理能抑制LPS诱导的I-κB降解,降低ICAM-1表达水平,与LPS组比较有统计学意义(P<0.05)。结论黄芩素可通过抑制I-κB降解,影响NF-κB炎症信号途径,下调ICAM-1的表达,这可能是黄连解毒汤抗动脉粥样硬化的作用机制之一。