蓖麻蛋白毒素的研究进展

目的:介绍蓖麻蛋白及其修饰方法的研究进展。方法:查阅国内外相关文献,并进行汇总,综述。结果:蓖麻蛋白具有极强的非特异性细胞毒性,通过物理包裹或化学修饰的方法,可以减小其在体内应用时的非特异性毒副作用,增强其对靶细胞的识别和杀伤作用。结论:各种修饰方法都能不同程度的降低蓖麻蛋白的非特异性细胞毒性。要达到临床应用的目的,尚有待进一步研究。

蓖麻蛋白碘化油乳化前后急性毒性的对比研究

目的:探讨植物毒素碘化油乳化的缓释作用,以及乳化前后对机体的急性毒性差别。材料与方法:将蓖麻蛋白水剂和碘化油蓖麻蛋白乳剂分别用不同剂量注入小鼠腹腔,观察即刻反应和死亡高峰期、以及大体尸检情况。结果:蓖麻蛋白水剂的 LD_(50)为12.78μg/kg,碘化油蓖麻蛋白乳剂的 LD_(50)为23.79μg/kg,两者 P<0.05,有明显差异。死亡高峰期后者比前者推迟2～3天。结论:蓖麻蛋白碘化油乳化后可以达到缓释,在不增加副作用的情况下,碘油乳化后用量可增加。

蓖麻蛋白的分离纯化及杀虫效果研究

本文研究了从蓖麻渣中分离、提纯蓖麻蛋白的有关实验方法及工艺,并进行了室内杀虫效果试验,试验结果表 明,经过提纯的蓖麻毒蛋白对菜粉蝶3龄幼虫和蚜虫的防治效果,当实验浓度为0.1％至0.5％时,防治效果为30％-50％。

超声波辅助提取蓖麻蛋白工艺条件优化

本文以蓖麻籽为原料,超声波辅助提取蓖麻蛋白。通过单因素试验和Box-Behnkens试验及响应面分析方法对提取工艺条件进行优化。结果表明;最优提取条件为:超声波时间22min、料液比1:67、pH值7.4和超声波功率160W,在此条件下蓖麻蛋白提取率84.06%。

脱脂蓖麻蛋白的营养与食品卫生学研究

本文用化学分析和动物实验的方法研究了内蒙产脱脂蓖麻蛋白的去毒及去毒后的营养与食品卫生质量。结果表明,脱脂去毒蓖麻蛋白的营养质量较好,食品安全性较为可靠,可以作为食物蛋白质的资源开发和利用。

裸小鼠原位接种肝癌经瘤体内蓖麻蛋白注射后疗效及其骨髓抑制的研究

目的 为了观察蓖麻蛋白在介入治疗肝癌中的疗效 ,比较蓖麻蛋白与丝裂霉素对骨髓抑制的差别。方法 用LC 412移植瘤瘤块 ,植入实验裸鼠肝内建立裸鼠原位肝癌模型 ,以瘤体内注入生理盐水和碘油水乳剂作对照 ,比较蓖麻蛋白、碘油乳化蓖麻蛋白、丝裂霉素、在肝癌瘤体内注射后的疗效 ,观察肿瘤生长抑制率、甲胎、血像及骨髓抑制。结果 蓖麻蛋白、碘油乳化蓖麻蛋白、丝裂霉素组肿瘤生长受到显著抑制 (P <0 0 5 ) ,肿瘤组织发生不同程度坏死 ,甲胎蛋白降低与对照组比较有显著差别 (P <0 0 5 ) ,但 3种剂型间无显著性差别。周围血像及骨髓抑制丝裂霉素比蓖麻蛋白明显 (P <0 0 1)。结论 蓖麻蛋白对肝癌的治疗作用明显 ,其乳剂抗癌作用不变 ,为蓖麻蛋白瘤内注射及乳化后肝动脉导向治疗肝癌提供了实验依据。蓖麻蛋白骨髓抑制毒性明显低于丝裂霉素 。

人ppGalNAc-T2的原核表达、纯化及其蓖麻蛋白样结构域的结构预测

多肽∶N乙酰氨基半乳糖转移酶(ppGalNAcT)是催化O糖基化的起始酶,在O聚糖的形成中起着关键的作用.为更好地研究该家族酶的结构与功能,采用PCR技术从pDONR201T2得到ppGalNAcT2全长编码序列,亚克隆至原核表达载体pGEX4T1,转化大肠杆菌BL21,获得相应表达产物,用谷胱甘肽S转移酶(GST)亲和层析柱进行纯化,并进行了Western印迹检测和初步的酶活测定.为进一步研究其功能还在结构研究上利用网络结构模拟SWISSMODEL服务器对ppGalNAcT2的蓖麻蛋白样结构域进行结构模拟.成功构建了原核表达载体pGEX4T1T2,获得有效表达和纯化,并初步鉴定了其活性,同时预测了其可能的三维结构和活性位点.

蓖麻蛋白对裸鼠肝癌瘤体内注射的疗效及骨髓抑制的研究

目的:为了观察蓖麻蛋白介入治疗肝癌的疗效,比较蓖麻蛋白与丝裂霉素对骨髓抑制的差别。材料与方法:用入肝癌裸小鼠皮下移植瘤为组织来源,植入实验裸鼠肝内建立裸鼠肝癌模型,以瘤体内注入生理盐水作对照,比较蓖麻蛋白(4μg/kg)、碘油乳化蓖麻蛋白(8μg/kg)、丝裂霉素(500μg/kg)肝癌瘤体内注射后的疗效,观察肿瘤生长抑制率、甲胎蛋白、蛋白、血象及骨髓改变。结果:蓖麻蛋白、磺油乳化蓖麻蛋白、丝裂霉素组肿瘤生长受到显著抑制(P<0.05),肿瘤组织发生不同程度坏死,甲胎蛋白降低与对照组比较有显著差别(P<0.05),但三种剂型间无显著性差别。周围血象及骨髓抑制丝裂霉素比蓖麻蛋白明显(P<0.01),结论:蓖麻蛋白对肝癌的治疗作用明显,其乳剂抗癌作用不变,为蓖麻蛋白瘤内注射及乳化后肝动脉导向治疗提供了实验依据,蓖麻蛋白骨髓抑制毒性明显低于丝裂霉素,为反复给药提供了条件。

人类多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2蓖麻蛋白样结构域的折叠识别和结构模拟

目的 对人类多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2蓖麻蛋白样结构域进行三维结构预测。方法 利用网络结构模拟SWISS-MODEL服务器进行结构模拟。结果 发现其采用的是β-三叶草折叠方式,二级结构主要为β链,通过与模板蛋白的结构比较,对其可能的活性位点进行了预测。结论 该酶具有蓖麻蛋白样结构域。

蓖麻蛋白对人外周血B淋巴细胞的作用及相关基因表达的研究

试验旨在研究蓖麻蛋白对人外周血B淋巴细胞(IM-9)毒性作用及对相关基因表达的影响。将提取的蓖麻蛋白按不同浓度添加到培养基培养6、12h,研究剂量-时间效应,确定半数抑制浓度,然后以半数抑制浓度培养细胞2、6、10、12h,在每个时间段检测免疫相关基因CD40、IL-1β、TNF-α和凋亡相关基因Bcl-2、Bax、Caspase-3的表达情况。结果表明,蓖麻蛋白对IM-9细胞的毒性作用随浓度和时间的增加而增强。取接近半数抑制浓度20ng/mL作用IM-9细胞2、6、10、12h,免疫相关基因中,TNF-α和CD40基因在6h试验组表达量与对照组相比显著升高(P<0.05),10、12h达到极显著水平(P<0.01);IL-1β基因表达量试验组、对照组间差异不显著(P>0.05)。凋亡基因中,与对照比相比,试验组Bax基因表达量10h极显著降低(P<0.01),12h显著降低(P<0.05);Bcl-2基因表达量4个时间段均达到显著水平(P<0.05),2、12h达到极显著水平(P<0.01);Caspase-3基因除6h表达量降低外,其他时间段表达量均显著升高(P<0.05),2h为极显著水平(P<0.01)。表明蓖麻蛋白能显著影响IM-9细胞的基因表达,TNF-α和CD40基因是两个潜在用IM-9细胞评价蛋白毒性的检测基因。

重建型蓖麻蛋白脂质体的制备、性质及对肝癌细胞的毒性

目的 :制备重建型蓖麻蛋白脂质体 (RRL) ,并探讨其毒性作用。方法 :通过正交法实验选择配方 ,并采用冷冻干燥脱水 再水化 囊泡化方法 (DRV法 )制备RRL ;用体外细胞毒性试验和小鼠半数致死量 (LD50 )试验测定RRL毒性。结果 :RRL的包封率可达 5 9.6 3% (含 5 0g/L的甘露醇 ) ,粒径为 0 .5 0～ 0 .79μm(占 90 %以上 ) ,经 4℃0 5a贮存 ,其粒径和粒度分布无明显变化。RRL对 772 1人肝癌细胞的半数细胞抑制浓度 (IC50 )与游离蓖麻蛋白的IC50 之比为 1∶2 .47;RRL的LD50 为 (5 5 .6 1± 19.71) μg/kg ,毒性下降 2 7.6 6 %。 结论 :本法所得RRL性质稳定 ,药物包封率较高 ,并提高了对肝癌细胞的毒性 ,降低了对小鼠的毒性 。

利用CD4和蓖麻蛋白结合物杀死癌细胞试验

研究人员将一种抗癌毒素缚在遗传工程制成的蛋白上,产生一种强效的抗艾滋病(AIDS)的新方法。当AIDS病毒[人免疫缺陷病毒(HIV)]固定在CD4(细胞受体蛋白)时,AIDS病毒能感染免疫细胞。利用HIV作为进入细胞的一个途径,它能复制许多自身拷贝,其中一些HIV蛋白最终留在细胞外面。得克萨斯大学西南医学中心的研究人员报道说(1988年11月25日Science杂志),实验表明,如果将一个高毒性的分子附于遗传工程制成的CD4蛋白上。

蓖麻毒素A链与绿色荧光蛋白基因的融合表达和活性测定

目的:表达蓖麻毒素A链(RTA)与绿色荧光蛋白(GFP)的融合蛋白(GFP-RTA),用于蓖麻毒素A链在细胞内的转运机理研究。方法:采用PCR法从重组质粒pKK233.2-RTA中扩增出蓖麻毒素A链基因,然而将其插入真核表达质粒pEGFPC1,构成GFP-RTA融合基因;GFP-RTA经PCR扩增,与T载体连接,用内切酶从T-GFP-RTA中切下GFP-RTA片段,插入原核表达质粒pET-28a(+);在BL21(DE3)中表达GFP-RTA融合蛋白,通过金属螯合和层析纯化,MTT法检测融合蛋白的细胞毒性。结果:测序发现插入的融合基因全长序列完全正确,SDS-PAGE鉴定表达产物分子量正确;经诱导表达后,菌体产生绿色荧光,MTT法表明该融合蛋白呈现与RTA相似的细胞毒性。结论:从大肠杆菌表达的蓖麻毒素A链与绿色荧光蛋白的融合蛋白,具有蓖麻毒素A链和绿色荧光蛋白的生物学活性,可用于蓖麻毒素A链在细胞内的转运途径研究。

蓖麻饼制取分离蛋白的研究

本文探讨用脱脂蓖麻饼制取分离蛋白的方法。实验表明,以弱硷性溶液提取蛋白的方法可以制取分离蓖麻蛋白。在所得成品中未检出蓖麻毒素,其蛋白质含量为80.20％,脂肪为1.89％,碳水化合物为4.87％。

单克隆抗体-蓖麻毒蛋白A链导向杀伤大肠癌细胞的研究

本研究从湘西野生蓖麻籽中提取了两种植物毒蛋白ricin Ⅰ、ricin Ⅱ,其分子量分别为65、67KD,LD_(50)分别为0.20、0.24ug/小鼠。用本室制备的抗大肠癌单克隆抗体Hb_3作为导向载体,与蓖麻毒蛋白A肽链交联,制备杂交分子Hb_3—RTA。SDS—PAGE分析表明,每个Hb_3上平均结合4.9个RTA。初步细胞毒试验显示,交联物Hb_3—RTA对大肠癌细胞HRT-18具有较强杀伤作用,而对正常人淋巴细胞杀伤作用较小。

蓖麻毒蛋白碘油乳剂介入治疗裸鼠肝癌的实验研究

目的观察蓖麻蛋白碘化乳剂介入治疗肝癌的疗效，比较蓖麻蛋白碘化乳剂与丝裂霉素对骨髓抑制的差别。方法用人肝癌裸小鼠皮下移植瘤为组织来源，植入实验裸鼠肝内建立裸鼠肝癌模型，以瘤体内注入生理盐水作对照，比较蓖麻蛋白（４μｇ／ｋｇ）碘油乳化蓖麻蛋白（８μｇ／ｋｇ）丝裂霉素（５００μｇ／ｋｇ）（３种剂型用量均为半数致死量的三分之一）肝癌瘤体内注射后的疗效，观察肿瘤生长抑制率、甲胎、血像及骨髓改变。结果蓖麻蛋白、碘油乳化蓖麻蛋白、丝裂霉素组肿瘤生长受到显著抑制（Ｐ＜０．０５），肿瘤组织发生不同程度坏死，甲胎蛋白降低与对照组比较有显著差别（Ｐ＜０．０５），但３种剂型间无显著性差别。周围血像及骨髓抑制丝裂霉素比蓖麻蛋白明显（Ｐ＜０．０１）。结论蓖麻蛋白对肝癌的治疗作用明显，其乳剂抗癌作用不变，为蓖麻蛋白瘤内注射及乳化后肝动脉导向治疗提供了实验依据，蓖麻蛋白骨髓抑制毒性明显低于丝裂霉素，为反复给药提了条件。

聚乙二醇修饰的蓖麻毒蛋白A链免疫原性与毒性的研究

目的研究单甲氧聚乙二醇(mPEG)与蓖麻毒蛋白A链(RA)偶联后RA的免疫原性和毒性的改变。方法从天然蓖麻籽中提取纯化的RA,经与具有活性马来酰亚胺基团的mPEG反应偶联,得到纯化的mPEG偶联的RA。用蛋白质印迹方法比较RA修饰前后的免疫原性,通过测定半数致死量(LD50)的方法比较RA修饰前后的毒性。结果mPEG偶联的RA的免疫原性和毒性均明显下降。偶联前蓖麻蛋白A链的LD50为2.45mg·kg-1,而mPEG修饰的RA的LD50为3.67mg·kg-1。结论聚乙二醇能遮蔽RA,使其免疫原性和毒性有很大的降低。

蓖麻粗毒蛋白的提取及其杀鼠活性初步研究

[目的]探讨蓖麻粗毒蛋白作为灭鼠药的可行性以及不同溶剂脱脂对蓖麻粗毒蛋白的生物活性的影响。[方法]用石油醚、乙醚、二氯甲烷3种溶剂分别对蓖麻粗籽进行脱脂后,用醋酸水溶液从脱脂的蓖麻饼中提取蓖麻毒蛋白,通过杀鼠活性试验比较3种蓖麻粗毒蛋白的杀鼠活性。[结果]3种蓖麻粗毒蛋白均有明显的杀鼠活性,小鼠死亡率均达100%。采用不同溶剂脱脂对蓖麻毒蛋白的活性没有影响,但二氯甲烷脱脂的蓖麻粗毒蛋白平均致死速度相对较慢。[结论]该研究为进一步分离和提纯杀鼠活性成分提供了线索,也为开发蓖麻作为植物源灭鼠剂提供了依据。

蓖麻毒蛋白的研究进展

蓖麻毒蛋白是从蓖麻籽中提取的一种强毒性毒素,其在医药、农业及军事领域有着重要作用,已成为当前抗癌药物研究的热点。主要对蓖麻毒蛋白的理化性质、致毒机理、提取纯化工艺及其在医药、生物农药领域的应用进行了综述,对蓖麻毒蛋白提取过程及其应用中存在的问题进行了讨论。由于蓖麻籽本身毒蛋白含量不高,油脂含量较高,对其进行毒蛋白的提取最终收率不高,影响蓖麻毒蛋白在医药、农业领域的推广应用。可利用生物工程技术对其基因进行改造,定向选育毒蛋白含量较高的蓖麻品种,促进蓖麻毒蛋白在生物农药和医药方面的应用。

蓖麻毒蛋白A链基因RNAi转化研究

通过基因沉默技术调控蓖麻毒蛋白A链基因的表达,以期获得低毒蓖麻新材料。利用基因克隆技术获得蓖麻毒蛋白A链基因762bp片段,命名为RTA基因。进一步利用该基因构建了植物RNAi表达载体pBI-RTA-S-AS,通过农杆菌介导法转化蓖麻子叶节,用卡那抗性筛选转化再生植株,PCR进一步鉴定转基因植株。结果表明:克隆得到目的基因长762bp,与预期结果一致;卡那抗性筛选和PCR鉴定结果显示,获得了3株转基因阳性植株。