响应面法优化蓝刺头多糖除蛋白工艺的研究

目的:筛选蓝刺头多糖的除蛋白工艺。方法:以蛋白清除率和多糖保留率为指标,比较了三氯乙酸法(TCA法)、Sevage法、木瓜蛋白酶法的除蛋白效果,并利用响应面法选取反应温度、时间、pH为因素优化了木瓜蛋白酶法除蛋白的最佳工艺。结果:TCA法和Sevage法的最佳蛋白清除率分别为45.13%和47.47%,其多糖保留率分别为61.05%、67.65%,优化的木瓜蛋白酶法除蛋白最佳工艺为酶解温度64℃,时间2.6h,pH6.0,在此条件下的蛋白清除率为56.57%,多糖保留率为98.12%。结论:综合考察各指标,说明木瓜蛋白酶法除蛋白方法效果较好,为蓝刺头多糖制备工艺的进一步研究提供了参考。

蓝刺头多糖提取工艺优化及其抗氧化活性

本试验用水提醇沉法提取蓝刺头多糖(Echinops latifolius tausch polysaccharide,ETP),通过单因素和响应面法对ETP提取工艺进行优化,并对蓝刺头提取物进行体外抗氧化活性的测定。结果表明,蓝刺头多糖的最佳提取条件为:料液比1∶20 g/mL、提取时间2 h、提取温度100℃。在最优条件下多糖的得率为1.191%。清除自由基结果显示,在一定浓度范围内,蓝刺头多糖对DPPH·清除率最高达93.69%,对·OH清除率最高达97.44%,对O2^-·清除率最高达67.96%。研究表明,响应面对ETP的提取优化条件合理,同时保留了该多糖良好的抗氧化活性,为其临床应用提供一定的理论依据。

蓝刺头多糖B对H_2O_2诱导INS-1细胞凋亡研究

探究蓝刺头多糖B(ETPB)对由H2O2造成INS-1细胞凋亡的影响。采用ETPB分别作用于INS-1细胞24h、48h后,使用H2O2作用24h,MTT检测细胞存活率,ETPB组与阳性对照组相比可显著提高细胞存活率(P<0.05)。使用ETPB与阳性药物VC进行AO/EB染色试验,ETPB、VC各组凋亡细胞少于阳性对照组,提示ETPB对H2O2引起的INS-1细胞凋亡有保护作用,效果与VC相近。检测凋亡相关基因Bcl-2和Bax mRNA表达量,ETPB各组与阳性对照组相比能显著提高Bcl-2表达量(P<0.05),显著降低Bax表达量(P<0.05);Western blot检查Bcl-2和Bax蛋白表达量,结果与mRNA检测结果一致。说明ETPB可显著改善由H2O2造成的细胞凋亡,这种作用可能与Bcl-2和Bax基因有关。

蓝刺头多糖B对INS-1细胞氧化损伤的保护作用

旨在探究蓝刺头多糖B(ETPB)对H_2O_2造成的INS-1细胞氧化损伤的保护作用。体外培养INS-1细胞,通过采用MTT法检测细胞存活率,筛选出50μmol/L H_2O_2作用24 h可建立氧化损伤模型,并确定ETPB的最大安全浓度为250μg/mL;ETPB(15.6、31.2、62.5μg/mL)作用48 h后加入H_2O_2作用24 h,可显著提高细胞存活率、SOD活性,降低MDA含量(P<0.05或P<0.01)。结果显示,ETPB对由H_2O_2引起的INS-1细胞氧化损伤具有保护作用。

蓝刺头多糖B通过miR-494-3p/FOXO1/PGC1α信号通路改善胰岛素抵抗HepG2细胞糖脂代谢紊乱

目的:探讨蓝刺头多糖B对棕榈酸诱导的HepG2胰岛素抵抗的抑制作用及可能机制。方法:MTT法检测蓝刺头多糖B对HepG2细胞增殖的影响;建立棕榈酸诱导HepG2胰岛素抵抗细胞模型;检测蓝刺头多糖对细胞葡萄糖的消耗量、糖原、游离脂肪酸、三酰甘油的含量;油红O染色观察细胞脂肪变性的程度;实时荧光定量PCR检测miR-494-3p、Foxo1、Pgc1a、Pck2、G6pase mRNA表达。结果:与正常对照组比较,模型对照组葡萄糖消耗量和糖原合成量显著降低(P<0.01),游离脂肪酸和三酰甘油的含量显著升高(P<0.01),Foxo1、Pgc1α、Pck2、G6pase mRNA的表达显著上调(P<0.05);与模型对照组相比,蓝刺头多糖B 0.5、1.5、3 mg/mL组均能明显增加葡萄糖消耗量和糖原合成量(P<0.05或P<0.01),同时能明显降低细胞内游离脂肪酸和三酰甘油含量(P<0.05或P<0.01),蓝刺头多糖B 1.5、3 mg/mL能够显著改善细胞的脂肪变性(P<0.01),蓝刺头多糖B 3 mg/mL能够明显上调miR-494-3p的表达、明显下调Foxo1、Pgc1a、Pck2、G6pase mRNA表达(P<0.05)。结论:蓝刺头多糖B对棕榈酸诱导的HepG2细胞的胰岛素抵抗有抑制作用,其机制可能与调控miR-494-3p/Foxo1/Pgc1a信号通路有关。

蓝刺头多糖B对胰岛素抵抗L6骨骼肌细胞耗糖量及AMPK表达的影响

为了探究蓝刺头多糖B(ETPB)对棕榈酸(PA)诱导的胰岛素抵抗L6骨骼肌细胞耗糖量及腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)表达的影响,体外培养大鼠L6成肌细胞,诱导分化为骨骼肌细胞并进行分化鉴定;采用CCK8法检测细胞存活率,筛选PA和ETPB的安全浓度;葡萄糖氧化酶法检测各组细胞耗糖量;实时荧光定量PCR法检测AMPK mRNA基因表达水平,Western blot法检测AMPK蛋白表达量。结果显示:PA诱导L6骨骼肌细胞发生胰岛素抵抗的最适造模浓度为0.4 mmol/L,ETPB的最大安全浓度为200 mg/mL;ETPB可显著提高胰岛素抵抗L6骨骼肌细胞耗糖量(P<0.05),上调AMPK mRNA表达水平,增加AMPK蛋白表达量。提示:ETPB可以通过提高AMPK基因及蛋白表达而促进胰岛素抵抗L6骨骼肌细胞耗糖,这可能是ETPB改善骨骼肌胰岛素抵抗的作用机制之一。