shRNA干扰蓝斑核去甲肾上腺素转运体(NET)表达对大鼠抑郁样行为的改善作用

目的:探讨利用慢病毒在蓝斑核(locus coeruleus,LC)敲除去甲肾上腺素转运体(norepinephrine transporter,NET)对大鼠抑郁样行为的影响。方法:构建NET-shRNA慢病毒载体及阴性对照序列,感染PC12细胞后通过Q-PCR和Western Blot方法测定NET mRNA和蛋白水平;建立慢性不可预见性温和应激大鼠抑郁症模型,双侧蓝斑核注射NET-shRNA;3周后采用强迫游泳实验、糖水偏好实验、旷场实验检测大鼠抑郁样行为;Western Blot检测大鼠NET水平;高效液相色谱法(HPLC)检测大鼠去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)水平。结果:Q-PCR和Western Blot检测结果显示:shRNA-1146沉默效率最高(P<0.01);与抑郁症模型组相比,蓝斑核注射NET-shRNA组大鼠强迫游泳不动时间减少、糖水偏好率增加、旷场实验得分增加(P<0.01),蓝斑核NET表达下降(P<0.01)、NE水平升高(P<0.05)。结论:NET-shRNA慢病毒注射蓝斑核能下调NET的表达,改善大鼠抑郁样行为,为抑郁症的基因治疗提供了实验依据。

事件相关电位P300与蓝斑-去甲肾上腺素交感神经系统的研究与进展

目的:P300是事件相关电位中研究正常人、患者和哺乳类动物认知加工及其脑机制研究的重要而广泛应用的电生理指标。探明P300的神经基础,对于阐明P300在信息加工过程中的功能价值具有重要意义。方法:应用计算机检索1965/2004与在事件相关电位的研究中与P300相关的文献,检索词为“P300”,并限定语言种类为English;信息主要来源于PreQuest数据库、Elsevier SDOL数据库,同时检索CNKI学术期刊,检索词为“P300、蓝斑-去甲肾上腺素交感神经系统、信息加工、功能价值”,限定语言种类为中文。共收集到28篇关于P300的相关文献,进行归纳总结。结果:①影响P300振幅的一个重要因素是诱发刺激的主观概率。目前关于研究P300起源的方法主要有颅内微电极记录事件相关电位、脑磁图、正电子断层显像和功能性磁共振成像以及局部脑损害后记录听觉事件相关电位。②蓝斑核为前脑中去甲肾上腺素激活的神经分布提供了主要的源,蓝斑核通过大脑皮质、丘脑、中脑、小脑、脊髓投射,并且是去甲肾上腺素向海马和新皮质输入电流的惟一的源。③根据蓝斑核-P300假设,蓝斑核的相位活动导致了去甲肾上腺素在突触终端的释放,这一点在P300的产生中是至关重要的。蓝斑核活动和任务成绩的关系以及去甲肾上腺素在神经水平上的影响的研究,促进蓝斑-去甲肾上腺素交感神经系统的认知功能作用理论的发展。结论:P300表明了蓝斑-去甲肾上腺素交感神经系统对刺激评价和决策结果的反应;P300反映了蓝斑-去甲肾上腺素交感神经系统对重要信息的加工功能,强化了对重要事件的反应。

蓝斑核内微量注射去甲肾上腺素对颏舌肌功能的影响

实验取健康家兔２２只，用２０％乌拉坦静脉麻醉，断双侧迷走神经，观察蓝斑核（ＬＣ）内微量注射去甲肾上腺素（ＮＡ）对动物窒息引起的颏舌肌肌电积分活动增强效应（ＰＩＭＡ）的影响，结果表明：增强颏舌肌的ＮＭＡ，表现为增幅峰值加大，潜伏期缩短，恢复时间延长，且此效应可被妥拉苏林所阻断。结果提示蓝斑核内有肾上腺素受体存在，对颏舌肌有兴奋作用。

蓝斑核-脊髓背角去甲肾上腺素能通路与神经病理性疼痛研究进展

神经病理性疼痛发病机制复杂,目前仍缺乏有效的治疗手段。蓝斑核-脊髓背角去甲肾上腺素(Norepinephrine,NE)能通路能缓解神经病理性疼痛,但蓝斑核释放的NE在脊髓背角的细胞和分子机制尚不清楚。本文对该通路在神经病理性疼痛中的作用及可能的机制进行了综述,展望以该通路及NE受体为靶点的镇痛策略的应用前景,为神经病理性疼痛治疗提供了新的研究思路。

针刺大白鼠对视上核、蓝斑内胆碱酯酶、去甲肾上腺素的变化及其与痛阈的关系

下丘脑是和调节内脏活动有密切相关的植物性高级中枢。视上核则是下丘脑中最大核团之一。一些工作表明视上核与针刺镇疼作用有关系。如电刺激视上核及附近部位可引起动物痛阈升高[1],损毁家兔下丘脑视上核后,电针引起的痛阈升高幅度较小[2],另外还有报道家兔在电针麻醉诱导期可见视上核内神经分泌发生变化[3],以上均说明视上核参与针刺作用。

扶正护脑胶囊对脑出血大鼠蓝斑和心肌组织去甲肾上腺素含量的影响

目的观察扶正护脑胶囊对脑出血大鼠蓝斑和心肌组织去甲肾上腺素含量的影响。方法动物随机分为假手术组、模型组、扶正护脑组和安宫牛黄组,分别于术后6、24、72h3个时相点取材,采用高效液相色谱-电化学检测法测定蓝斑和心肌组织去甲肾上腺素的含量。结果术后各时间点蓝斑和心肌组织去甲肾上腺素的含量均显著升高,扶正护脑组和安宫牛黄组均能降低其含量。结论扶正护脑胶囊通过抑制蓝斑-去甲肾上腺素系统的激活,减轻脑出血后心肌的损伤。

α_(1A)-肾上腺素能受体与增强型绿色荧光蛋白标记的活化T细胞核因子2稳定共表达细胞的构建

目的建立α_(1A)-肾上腺素能受体(α_(1A)-AR)与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)标记的活化T细胞核因子2(NFAT2)稳定共表达细胞。方法①将pcDNA3.1-α_(1A)-AR-3×FLAG重组质粒转染至U2OS-EGFPNFAT2细胞,经潮霉素B(Hygro-B)200 mg·L^(-1)压力筛选后加入α_(1A)-AR激动剂去甲肾上腺素(NE,10μmol·L^(-1))孵育30 min,通过高内涵筛选系统检测细胞核内绿色荧光强度,验证EGFP-NFAT2核转位,筛选得到稳定表达α_(1A)-AR的U2OS-EGFP-NFAT2-α_(1A)-AR细胞。②采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western印迹法检测该细胞和对照细胞U2OS-EGFP-NFAT2中α_(1A)-AR mRNA和蛋白的表达水平。③将U2OS-EGFP-NFAT2-α_(1A)-AR细胞接种于96孔板,分别加入NE(10^(-8)~10^(-5) mol·L^(-1))或α2-AR激动剂右美托咪定(DMED,10^^(-8.8)~10^(-5) mol·L^(-1))孵育30 min,通过高内涵筛选系统检测EGFP-NFAT2核转位。④将U2OS-EGFP-NFAT2-α_(1A)-AR细胞分为溶剂对照组、α1-AR拮抗剂萘派地尔(1μmol·L^(-1))组、NE(1μmol·L^(-1))组、萘派地尔+NE(各1μmol·L^(-1)共孵育)组、α2-AR拮抗剂阿替美唑(0.1μmol·L^(-1))组、DMED(0.1μmol·L^(-1))组、阿替美唑+DMED(各0.1μmol·L^(-1)共孵育)组和萘派地尔+DMED(萘派地尔1μmol·L^(-1)与DMED 0.1μmol·L^(-1)共孵育)组,药物孵育时间均为30 min,通过高内涵筛选系统检测EGFP-NFAT2核转位,验证该细胞α_(1A)-AR功能的特异性。结果①Hygro-B压力筛选得到58株U2OS-EGFP-NFAT2-α_(1A)-AR细胞,NE 10μmol·L^(-1)孵育后,其中50号细胞核内绿色荧光强度最强,故选定其为稳定共表达α_(1A)-AR和EGFPNFAT2的U2OS-EGFP-NFAT2-α_(1A)-AR细胞。②Western印迹法结果显示,U2OS-EGFP-NFAT2-α_(1A)-AR细胞可明显表达α_(1A)-AR蛋白,而对照细胞U2OS-EGFP-NFAT2中未见α_(1A)-AR蛋白表达。RT-qPCR结果显示,该细胞在传代5~20代内α_(1A)-AR mRNA均稳定表达,其表达水平为对照细胞的500~800倍。③NE或DMED使U2OS-EGFP-NFAT2-α_(1A)-AR细胞中EGFP-NFAT2核转位明显增加,半数有效浓度(EC50)分别为5.94×10^(-7)和6.15×10^(-8) mol·L^(-1)。④与溶剂对照组和萘派地尔组比较,NE组U2OS-EGFP-NFAT2-α_(1A)-AR细胞EGFP-NFAT2核转位明显增强(P<0.01),而萘派地尔+NE组EGFP-NFAT2核转位较NE组明显减弱(P<0.01)。与溶剂对照组和阿替美唑组比较,DMED组EGFP-NFAT2核转位明显增强(P<0.01),阿替美唑+DMED组EGFP-NFAT2核转位与DMED组比较无明显差别,而萘派地尔+DMED组EGFP-NFAT2核转位较DMED组明显减弱(P<0.01)。结论成功构建稳定共表达α_(1A)-AR和EGFP-NFAT2的U2OS-EGFPNFAT2-α_(1A)-AR细胞,可用于靶向α_(1A)-AR化合物筛选和受体分子机制研究。

小鼠蓝斑内投射至脊髓背角的去甲肾上腺素能神经元的突触前神经元在全脑的分布情况

目的利用逆行跨单突触狂犬病毒(RV)系统,研究投射到脊髓背角(SDH)的蓝斑(LC)内去甲肾上腺素能神经元的突触前神经元在全脑的分布情况。方法第一步将二联辅助病毒注入到TH-Cre小鼠的LC中,两周后将重组RV注入到SDH中。小鼠存活一周后将其灌注取材,然后在激光共聚焦显微镜下观察LC-SDH通路的上游核团在全脑的分布情况。结果利用逆行跨单突触RV系统,可以在脑内的次级运动皮层(M2)、杏仁中央核(CeA)、中脑导水管周围灰质外侧区(lPAG)、中脑导水管腹外侧区(vlPAG)、中缝背核(DR)和巨细胞网状核(Gi)等核团内观察到RV阳性神经元,说明这些核团与LC-SDH通路构成了三级通路。结论脑内M2、CeA、lPAG、vlPAG、DR和Gi等核团与LC-SDH通路形成了三级通路。

下丘脑微量注射去甲肾上腺素增强电针镇痛作用的机理探讨

1，HVM微注NE(3μg／3μl)能产生强而持久的针刺镇痛效应，并以腹内侧核为最强，NE的增强效应主要通过α1，受体与β受体无关。2，HVM微注DA的协同作用不及NE强而持久，5-HT则无协同作用。表明具有递质的专一性。3，HVM微注NE增强电针镇痛作用与脑内阿片系统有关，其作用途径是通过AR阿片肽神经元和PAG腹侧部的阿片受体而发挥作用的，当MSG损毁AR的阿片神经元后，有关内源性阿片阿含量下降；这些脑区的阿片功能破坏，故在HVM微注NE的增强电针镇痛效应亦因此消失。

大白鼠隔区去甲肾上腺素能纤维的起源——逆行荧光标记和荧光组织化学结合法研究

本文报道用逆行荧光标记结合Faglu荧光组化法,对21只大白鼠隔区去甲肾上腺素(NA)能纤维的起源进行了研究。结果表明:向隔区投射的NA神经元位于A_(1)、A_(2)和A_(6)群。A_(1)群向隔区的投射呈双侧性;A_(2)和A_(6)的投射则以同侧隔区为主,少数投射到对侧。逆行标记的NA细胞在A_(6)位于其头侧半的背侧部,在A_(1,2)则散在于其全长。A_(4)和A_(7)群内未见标记。有5例在A_(6)群内观察到个别NA细胞被逆行标记。此外在延髓头侧部中缝及腹外网状结构中可见散在的非NA能标记细胞。

蓝斑参与刺激下丘脑视上核引起的加强电针镇痛

本工作应用核团灌流液的放射免疫测定（ＲＩＡ），高压液相（ＨＰＬＣ）以及核团内注射拮抗剂，观察了蓝斑（ＬＣ）在刺激下丘脑视上核（ＳＯＮ）引起的加强电针（ＥＡ）镇痛效应中的作用。结果表明：化学刺激ＳＯＮ后电针期间和停针后３０、６０ｍｉｎ，蓝斑灌流液内ＯＴ的含量明显升高，刺激ＳＯＮ后电针期间灌流液内精氨酸加压素（ＡＶＰ）含量明显升高，停针后ＡＶＰ的含量虽高于对照组及注射前的水平，但无统计学意义。ＬＣ灌流液内去甲肾上腺素（ＮＥ）的含量在刺激ＳＯＮ后ＥＡ和停针后均明显低于人工脑脊液（ＡＣＳＦ）对照组和注射前的ＮＥ含量，但与对照组相比无差异，ＬＣ灌洗液内５－羟色胺（５—ＨＴ）的含量仅在刺激ＳＯＮ后ＥＡ期间，高于注射前各组及ＡＣＳＦ组和ＡＣＳＦ＋ＥＡ对照组，停针后则恢复到对照水平：ＬＣ内注射加压素Ｖ２受体拮抗剂对刺激ＳＯＮ引起的加强电针镇痛效应有轻度抑制作用，Ｖ１拮抗剂无明显影响，催产素拮抗剂可完全阻断这种作用，根据以上结果进行了讨论。

蓝斑核损伤对迷走神经刺激抗癫癎效应的影响

目的：探讨刺激迷走神经（ＶＮＳ）的抗癫癎作用与蓝斑核（ＬＣ）的相互关系。 方法：立体定向下注射６－羟多巴胺（６－ＯＨＤＡ）毁损大鼠双侧ＬＣ，２ 周后腹腔注射戊四氮（ＰＴＺ），８０ ｍ ｇ／ｋｇ 体重致癎，然后观察刺激迷走神经的抗癫癎效应，同时测定大鼠大脑皮质及海马中去甲肾上腺素（ＮＡ）水平。 结果：ＶＮＳ明显减轻ＰＴＺ致癎大鼠癫癎发作的严重程度，但对蓝斑核毁损的大鼠抗癫癎作用明显减弱，同时蓝斑核毁损后皮质及海马内ＮＡ含量较对照组明显下降。 结论：实验证明蓝斑核参与ＶＮＳ的抗癫癎作用，ＶＮＳ可能通过增加脑内ＮＡ 的释放而发挥抗癫癎效应。这一结论提示，拟去甲肾上腺素类药物可能有增强ＶＮＳ的抗癫癎作用。

电针“足三里”穴对家兔胃运动、胃电的影响及与蓝斑核关系的研究

目的 目的 探讨电针对胃运动、胃电活动的影响及与监斑核的关系。方法 采用霍尔效应同时描记胃运动与胃电慢波的方法 ,观察电针对安静清醒状态下家兔胃运动、胃电活动的影响 ,以及损毁蓝斑核、蓝斑核注入生理盐水、微量去甲肾上腺素 (NA)、哌唑嗪 (PA)、育亨宾 (YOH)后电针对胃运动、胃电的影响。结果 ①电针“足三里”穴对胃运动、胃电慢波呈抑制效应 ;②损毁蓝斑核后电针抑制效应部分减弱 ;③蓝斑核注入NA后 ,电针对胃运动、胃电的抑制效应增强 ;④蓝斑核注入PA后 ,电针对胃运动、胃电的抑制作用被部分阻断 ;⑤蓝斑核注入YOH后 ,电针对胃运动、胃电的抑制效应影响不大。结论 电针家兔“足三里”穴对胃运动、胃电的抑制效应与蓝斑核有关 ,此抑制效应是通过NA和肾上腺素能α1受体发挥作用 ,与α2

血流动力学改变对猫蓝斑核儿茶酚胺类神经递质释放的影响

应用推－挽灌流方法，研究麻醉猫蓝斑核儿茶酚胺类神经递质去甲肾上腺素（ＮＡ）和多巴胺的释放，观察实验性地改变猫血流动力学时对以上递质释放的影响。结果发现，血容量增加３０％、血压上升２．４ｋＰａ时，或静脉注射ＮＡ、血压上升８ｋＰａ时，蓝斑核内源性ＮＡ释放明显减少；另一方面，血容量减少１５％、血压下降５．６ｋＰａ时，ＮＡ的释放增加１倍，而静脉注射硝普纳、血压下降８．７ｋＰａ时，ＮＡ的释放无明显改变。在以上各实验条件下引起的血流动力学改变，对猫蓝斑核内源性多巴胺的释放均无明显影响。

下丘脑弓状核、中缝背核和蓝斑在针刺镇痛中的作用及其相互关系

已知下丘脑弓状棱(ARC)的β-内啡肽能(β-END)系统中缝背棱(DR)的5-羟色胺能(5-HT)系统和蓝斑(LC)的去甲肾上腺素能(NE)系统在各种镇痛中起着重要作用。形态学资料也表明，在这三个核团之阀存在着相互的神经支配。本研究室近10年来，以大鼠为实验动物，主要应用行为测痛的方法和电生理学技术，结合采用神经生化、荧光组他、免疫组化和神经药理学等手段，着重研究这三个核团在针刺“人中”，“承浆”，或“足三里”、“三阴交”镇痛中的作用以及它们之间的相互关系。

蓝斑核在帕金森病发病中的病理改变及其作用

目的帕金森病是一种常见的神经变性性疾病,其病理特征为中脑黑质多巴胺能神经元的选择性和进行性变性。而近来的临床资料提示,在帕金森病早期,脑桥蓝斑核的去甲肾上腺素能神经元先于黑质发生病变。实验室研究也发现,蓝斑变性后,黑质多巴胺能神经元的电生理状态、神经递质代谢活动会发生改变,对损伤因素的易感性增高,促进了帕金森病的发病。其原因可能为蓝斑通过调节递质释放、摄取毒物、分泌营养物质等方式影响黑质多巴胺能神经元以及该区域的神经胶质细胞,对多巴胺系统起到保护作用。本文综述了帕金森病临床资料中蓝斑的病理表现、以及基础研究中蓝斑与黑质的关系以及蓝斑对黑质起保护作用的可能机制。本综述应能为深入研究帕金森病的发病机制提供参考。

快速眼动睡眠产生的神经机制:蓝斑核神经元停止发放是一个必要的条件(英文)

两种类型的神经元参与了快速眼动(rapideyemovement,REM)睡眠的调节:快速眼动-发放(REM-ON)神经元和快速眼动-沉寂神经元(REM-OFF)。快速眼动-沉寂神经元属去甲肾上腺素能神经元,正如名字表示的那样——在快速眼动睡眠期间停止发放。已有研究表明,这些神经元放电活动的停止是导致快速眼动睡眠的前提条件,γ-氨基丁酸(γ-aminobutyricacid,GABA)可使它们停止发放。如果这些神经元不停止发放,脑中的去甲肾上腺素水平将升高,不出现快速眼动睡眠。剥夺快速眼动睡眠所引起的去甲肾上腺素增加,至少是快速眼动睡眠丧失引起Na+-K+ATP酶活性增加的原因,而这可能是导致快速眼动睡眠剥夺所引发的各种效应的主要因素。

蓝斑核的线粒体氧化应激受活性一氧化氮合成酶的调控

去甲肾上腺素能（noradrenergic,NA）蓝斑核（locus coeruleus,LC）神经元支配大脑的大多数部位,保持大脑的醒觉状态,并在兴奋和紧张时期调节神经元的活动和可塑性。LC的缺失是老龄化相关的神经退行性疾病如帕金森病（Parkinson＇s disease,PD）和阿尔兹海默病（Alzheimer＇s disease,AD）的主要特征。

NE系统在冷应激诱导NK细胞活性下降中的作用

目的 用 6 OHDA分别选择性地损毁外周和中枢的去甲肾上腺素 (NE)能系统 ,探讨去甲肾上腺素能系统在冷应激诱导大鼠NK细胞活性下降中的作用。方法 大鼠置于4℃的冷室 4h。腹腔和侧脑室分别注射 6 OHDA。采用YAC 1细胞51Cr释放法测定脾脏NK细胞的活性。用免疫细胞化学法观察下丘脑室旁核 (PVN)和脑干蓝斑 (LC)中的Fos表达 ,以及Fos表达阳性的神经元的性质。用放射免疫法测定血浆CORT的浓度。结果 脑室注射 6 OHDA能部分翻转冷应激诱导的血浆CORT浓度的升高 ,减少PVN和LC中Fos的表达 ,同时使脾脏NK细胞活性不再下降。同样 ,腹腔注射 6 OHDA也能翻转冷应激诱导NK细胞活性的下降 ,但对脑内Fos表达没有明显影响。另外 ,双染实验表明 ,PVN中有少量的Fos阳性的神经元同时表达精氨酸加压素 (AVP)或催产素 (OT) ,而LC中大多数Fos阳性的神经元同时表达酪氨酸羟化酶 (TH)。结论 冷应激诱导大鼠NK细胞活性下降的可能机制是 :一方面通过中枢去甲肾上腺素能系统去激活HPA轴 ;另一方面介导外周交感神经系统。最后两者共同作用于脾脏NK细胞 ,导致其活性下降。

针刺对卒中后抑郁大鼠脑组织神经递质及5-羟色胺转运体、5-羟色胺1A受体、去甲肾上腺素α2受体的影响

目的:观察解郁安神针法对卒中后抑郁(PSD)大鼠脑组织5-羟色胺(5-HT)转运体(5-HTT)、5-HT 1A受体(5-HT_(1A)R)、去甲肾上腺素α2受体(NEα_2R)蛋白的影响。方法:将SD大鼠随机分为正常组、模型组、药物组、针刺组,每组各10只。采用大脑中动脉闭塞和慢性不可预见性温和性应激法复合制备卒中后抑郁模型。药物组予以氟西汀(2mg/kg)灌胃,针刺组选取"百会""风府"及双侧"神门""太冲"穴针刺20min,每日1次,7d为1个疗程,共3个疗程,疗程之间休息1d。观察大鼠行为学并采用高效液相色谱法检测大脑皮质5-HT、去甲肾上腺素(NE)、乙酰胆碱(Ach)、γ-氨基丁酸(γ-GABA)、谷氨酸(Glu)变化,采用免疫印迹法检测海马、中缝核、蓝斑核5-HTT、5-HT_(1A)R、NEα_2R蛋白变化。结果:与正常组大鼠比较,PSD模型大鼠大脑皮质5-HT、NE及海马、中缝核、蓝斑核中5-HTT蛋白表达降低,大脑皮质Ach、γ-GABA、Glu及海马、中缝核、蓝斑核中NEα_2R、5-HT_(1A)R蛋白表达升高(P<0.01);与模型组大鼠比较,针刺组脑皮质5-HT、NE、5-HTT蛋白表达升高(P<0.01),Ach、γ-GABA、Glu、NEα_2R、5-HT_(1A)R蛋白表达降低(P<0.01,P<0.05)。结论:解郁安神针法能明显改善PSD大鼠行为学变化,其机制可能是上调大脑皮质5-HT、NE,下调Ach、γ-GABA、Glu表达,促进海马、中缝核、蓝斑核5-HTT敏感性,抑制NEα_2R、5-HT_(1A)R表达。