高效阴离子交换色谱-脉冲安培法测定蔬菜及食品中的1-蔗果三糖和蔗果四糖

目的应用高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测器联用（HPAEC-PAD）技术，建立蔬菜、食品中低聚果糖（蔗果三糖和蔗果四糖）检测方法。方法以NaOH和乙酸钠为淋洗液梯度淋洗，在CarboPac PAl色谱柱上阴离子交换分离了蔗果三糖和蔗果四糖，用脉冲安培检测器（金电极）进行了检测。结果二者的线性范围分别为1．22～15．20μg／g和1．64～18．30μg／g，检出限分别为0．085μg／g和0．089μg／g。对浓度为6．08和7．32μg／g的蔗果三糖和蔗果四糖混合标准连续进样，其相对标准偏差（RSD）分别为2.80％和1．28％（n=6）。应用本方法分析了菊苣、朝鲜蓟和通力爽口服液等蔬菜和食品中蔗果三糖和蔗果四糖的含量。蔗果三糖和蔗果四糖含量最高的蔬菜组织为菊苣根，分别为6．61g／100g干重和6．51g／100g干重。低聚果糖粉中蔗果三糖和蔗果四糖含量最高，分别为34．13g／100g和32．12g／100g。样品加标回收率蔗果三糖和蔗果四糖分别为93．97％和97．14％。结论该方法简单、方便、灵敏度高，适于蔬菜及食品中蔗果三糖和蔗果四糖的测定。

HPLC法测定奶粉中蔗果三糖、蔗果四糖和蔗果五糖的含量

目的 采用HPLC法建立同时测定奶粉中蔗果三糖、蔗果四糖和蔗果五糖的方法.方法 色谱柱Aglient NH2柱（250mm×4.6mm,5μm）,流动相为乙腈-水（70：30）,示差折光检测器.结果 蔗果三糖浓度在0.3050～6.100mg·mL-1范围内与峰面积呈良好的线性关系,r为0.9999;蔗果四糖浓度在0.4054～8.108mg·mL-1范围内与峰面积呈良好的线性关系,r为0.9999;蔗果五糖浓度在0.2457～4.914mg·mL-1范围内与峰面积呈良好的线性关系,r为0.9996;蔗果三糖加样回收率的平均值为96.1%,RSD=1.5%;蔗果四糖加样回收率的平均值为100.3%,RSD=2.9%;蔗果五糖加样回收率的平均值为100.0%,RSD=3.3%.结论 本方法简便、准确可靠,适用于奶粉中蔗果三糖、蔗果四糖和蔗果五糖三个主要有效成分的测定.

聚丙烯酰胺凝胶柱分离制备低聚果糖单组分

利用聚丙烯酰胺凝胶(Bio-Gel P-2)柱分离高纯度低聚果糖制备单一组分,结果表明,在1.6 cm×100 cm的玻璃柱上最佳的层析条件是洗脱速度0.2 mL/min、上样量0.5 mL(样液质量浓度0.4 g/mL)、柱温40℃。以Megazlaae公司的标准品为对照,经HPLC和MS分析,证明层析分离所得组分峰4、峰3和峰2分别是蔗果三糖、蔗果四糖和蔗果五糖。而且经HPLC面积归一化法定量分析,证明分离产品蔗果三糖、蔗果四糖、蔗果五糖蔗和果六糖的含量分别为99.91%、99.94%、99.33%和97.89%,表明其纯度很高,可以作为低聚果糖定量分析的标准品使用。

黄精炮制品多糖多元指纹图谱的建立及化学模式识别

目的构建黄精炮制品多糖的酶水解产物指纹图谱,结合化学计量学方法评价不同蒸晒次数黄精炮制品多糖的差异。方法采用糖苷酶水解,结合高效薄层色谱(high thin-layer chromatography,HPTLC)、亲水作用色谱-高效液相色谱-蒸发光检测器(hydrophilic interaction liquid chromatography-high performance liquid chromatography-evaporative light scattering detector,HILIC-HPLC-ELSD)和超高效液相色谱-四级杆飞行时间串联质谱(ultra high pressure liquid chromatographyquadrupole time of flight tandem mass spectrometry,UHPLC-QTOF/MS)对相应的酶解产物进行高效分离和检测。由此产生的自下而上的指纹图谱反映了黄精炮制品多糖的变化,通过相似度和偏最小二乘-判别分析(partial least squares-discriminant analysis,PLS-DA)对指纹图谱进行综合评价。结果HPTLC分析发现,果糖随着蒸晒次数的增加逐渐降低,结合色谱分析发现,六蒸六晒和十二蒸十二晒为黄精炮制过程中的转折点。同时根据酶水解中寡糖的变化,利用相似度和PLS-DA对不同蒸晒次数的黄精炮制品进行了清晰的聚类。结合UHPLC-QTOF/MS分析表明,不同蒸晒次数黄精炮制品中含有蔗糖、蔗果三糖、蔗果四糖、蔗果五糖、蔗果六糖、蔗果七糖及蔗果八糖。结论基于酶解法分析不同蒸晒次数样品的质量动态变化,结合所建立的多元指纹图谱,进一步阐释了不同蒸晒次数黄精炮制品的科学内涵。

牛蒡根中有效成分的含量测定

目的:测定牛蒡根中有效成分绿原酸、牛蒡苷及苷元、总糖、还原糖、菊糖、蔗果四糖、果糖及葡萄糖等成分的含量。方法:采用高效液相色谱法检测牛蒡根中绿原酸,色谱条件:色谱柱为Phenomenex C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.4%磷酸溶液(8∶92)为流动相,检测波长327 nm,流速1.0 mL/min,柱温35℃。采用薄层色谱和高效液相色谱法检测牛蒡根中牛蒡苷及苷元,色谱条件为:色谱柱为Phenomenex C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以甲醇-水(1∶1.1)为流动相,检测波长为280 nm,柱温30℃,流速1 mL/min。采用总糖含量减去还原糖含量的方法测定牛蒡根中菊糖含量,其中还原糖含量和总糖含量采用3,5—二硝基水杨酸法和苯酚一硫酸法测定。采用高效液相色谱法检测牛蒡根中蔗果四糖、果糖及葡萄糖,色谱条件:色谱柱为Agilent ZORBAX NH_2柱(5μm,4.6 mm×150 mm);以乙腈-水(70∶30)为流动相;流速1 mL/min;柱温30℃。检测器为蒸发光散射检测器(ELSD),漂移管温度80℃,氮气体积流量3.5 L/min。压力3.5 bar,gain值为5。结果:牛蒡根中绿原酸含量(1.40±0.36)mg/g;牛蒡根中不含有牛蒡苷和牛蒡苷元;总糖含量(0.93±0.05)g/g;还原糖含量(0.73±0.07)g/g;菊糖含量(199±21.40)mg/g;蔗果四糖含量(2.87±0.10)%;果糖含量(8.68±0.23)%;葡萄糖含量(3.56±0.20)%。结论:牛蒡根中含有较高含量绿原酸、总糖、还原糖、菊糖、蔗果四糖、果糖及葡萄糖等有效成分,具有较高营养和开发价值。