用蔗糖密度梯度离心法纯化小球隐孢子虫卵囊试验

用蔗糖密度梯度离心法从接种犊牛粪便中纯化小球隐孢子虫卵囊 ,该方法操作简便、快速、经济、获得的卵囊纯度高 ,回收率达 92 .0 % ,适合于国内普通实验室使用。

一种改进的蔗糖线性密度梯度溶液制备法

[目的]制备具有良好线性的蔗糖密度梯度溶液。[方法]利用溶液梯度混合仪和蠕动泵组装成新型的蔗糖密度梯度溶液制备器,用该制备器制备50%~0%和50%~10%等不同蔗糖密度梯度溶液,然后利用电脑核酸蛋白检测仪检测所制备的蔗糖密度梯度溶液的光密度,并对蔗糖密度溶液的线性进行评估;比较自制的蔗糖密度梯度溶液制备器与经典的Biocomp全自动密度梯度制备仪制备的蔗糖密度梯度溶液的优劣。[结果]自制的蔗糖密度梯度溶液制备器制备的50%~0%和50%~10%蔗糖密度梯度溶液的光密度与蔗糖密度的决定系数(R^(2))都在0.98以上;Biocomp全自动密度梯度制备仪制备的50%~0%蔗糖密度梯度溶液的光密度与蔗糖密度的决定系数(R^(2))为0.95~0.97。[结论]自制的蔗糖密度梯度溶液制备器制备的蔗糖密度梯度溶液优于Biocomp全自动密度梯度制备仪制备的蔗糖密度梯度溶液。

不同离心力分离外周血单个核细胞的条件优化

目的观察不同离心力对人外周血单个核细胞(PBMC)分离的影响。方法采用聚蔗糖密度梯度离心法分离人外周血中PBMC,不同分离离心力及洗涤离心力获取细胞,利用流式细胞仪检测细胞得率和存活状况,并进行统计学分析。结果分离离心力结果:离心力600g时获取的细胞数最多;24h检测的凋亡细胞数在离心力300～900g分离时差异无统计学意义(P>0.05)且相对较少,增加离心力,凋亡细胞数增加;72h检测离心力大于1 200g或低至300g时,存活细胞数显著减少。洗涤离心力结果:离心力150g时细胞得率显著低于300～2 400g时;24h检测细胞凋亡显示离心力大于600g时,凋亡细胞数增加;72h检测显示洗涤离心力大于1 200g时,存活细胞数显著减少。结论分离离心力在600～900g及洗涤离心力在300～600g均可用于PBMC的分离。

从鼠粪中分离纯化微小隐孢子虫卵囊方法的研究

目的探索一种实用、纯度和回收率高且卵囊活力强的分离纯化微小隐孢子虫卵囊的方法。方法分别采用经典的不连续蔗糖密度梯度离心法、改良饱和盐水漂浮法、氯化铯(CsCl)密度梯度离心法和Percoll密度梯度离心法分离纯化C57BL/6小鼠粪中隐孢子虫卵囊。并将4种方法分离纯化获得的卵囊各105体外感染牛输卵管上皮细胞(BFTE),48h和72h后油镜下观察各分离法卵囊的发育情况,以比较卵囊的纯度和活性。结果经典的不连续蔗糖密度梯度离心法分离获得的卵囊数[(2.86±0.08)×107]与改良饱和盐水漂浮法[(2.88±0.15)×107]无明显差异(P>0.05),但高于Percoll密度梯度离心法[(1.52±0.08)×107](P<0.01)和CsCl密度梯度离心法[(2.46±0.13)×107](P<0.05)。4种方法分离纯化的卵囊体外感染BFTE48h和72h后隐孢子虫数无明显差异(P>0.05)。但CsCl密度梯度离心法纯化的隐孢子虫卵囊纯度明显高于不连续蔗糖密度梯度离心法。结论改良饱和盐水漂浮法较经典的不连续蔗糖密度梯度离心法操作简单、快速;CsCl密度梯度离心法分离的隐孢子虫卵囊纯度较高。

大鼠不饱和脂肪酸的代谢变化与衰老的关系

目的 探讨衰老与细胞内不饱和脂肪酸代谢变化的关系。方法 采用蔗糖密度梯度离心法分离大鼠肝脏线粒体和微粒体 ,用毛细管气相色谱法测定了青年和老年大鼠肝组织、肝线粒体和微粒体中的 1 4种脂肪酸 ,获取有统计意义的数据。结果 6种不饱和脂肪酸的总量占所测 1 4种脂肪酸总量的比例 ,老年组均小于青年组 (P<0 .0 5)。结论 随着增龄 ,自由基介导的脂质过氧化程度不断加强 。

从感染小鼠获得微小隐孢子虫卵囊方法的改进

目的 建立从感染C5 7BL/ 6N小鼠获得大量微小隐孢子虫卵囊的方法。方法 在饮水中添加不同浓度的地塞米松对人工感染小鼠进行免疫抑制 ,探讨获得最多卵囊数的药物添加量 ;比较不同纯化方法得到的卵囊回收率和纯度 ;探讨来自不同动物、不同纯化方法的卵囊在牛输卵管上皮细胞培养系统的感染情况。结果 地塞米松加入量为 2 0 μg/ml的第 3组获得的卵囊量高达 4 .16× 10 9/ 30个小鼠 ;用饱和盐水漂浮法与用蔗糖密度梯度离心法纯化得到的卵囊具有相同的回收率和纯度 ;从感染小鼠与犊牛中获得的卵囊在感染性上差异不显著。结论 成功地建立了从感染小鼠获得大量微小隐孢子虫卵囊的方法 ,具有简单、方便、快速等优点 ,并且不影响活力。

长期培养外周血单个核细胞的简易分离纯化方法

目的对长期培养的外周血单个核细胞(PBMC)进行纯化,为后续研究提供方便。方法用聚蔗糖-泛影葡胺密度梯度离心法对长期培养的PBMC进行再次分离和纯化。结果用聚蔗糖-泛影葡胺密度梯度离心法再次处理长期培养的PBMC,可以得到纯度较高的PBMC。结论聚蔗糖-泛影葡胺密度梯度离心法是纯化长期培养的PB-MC的一种简便、快捷、成本低的方法之一。

抗猪脂肪细胞膜蛋白抗体的制备与鉴定

以蔗糖密度梯度离心提取猪皮下脂肪细胞和其他组织细胞膜蛋白,经SDS-PAGE分析。

大鼠肝细胞过氧化物酶体的提取

:采用蔗糖密度梯度离心法 ( 950 0 0× g,2 h)提取大鼠肝细胞过氧化物酶体 ,所得过氧化物酶体形态完整 ,纯度与肝匀浆相比提高了 2 6倍 ,仅有少量 ( 0 .5%～ 0 .9%)的微粒体和线粒体污染 ,回收率为 1 2 %。为研究过氧化物酶体提供了有效的分离方法。此法还可将过氧化物酶体、微粒体、线粒体同时进行分离。

人脐带间充质干细胞来源外体提取方法的比较

目的比较蔗糖密度梯度离心法和差速离心法提取的脐带间充质干细胞来源外体（hucMSC-Ex）在高丰度蛋白质含量和纯度上的差异。方法分别用蔗糖密度梯度离心法和差速离心法提取hucMSC-Ex,透射电镜下观察两法提取的外体的形态结构,SDS-PAGE分析二者的蛋白质组分,western blot检测二者的表面标志蛋白CD9和CD81,免疫荧光法检测二者内化至靶细胞EA.hy926的数量。结果两种方法提取的hucMSC-Ex均为直径约30~100 nm的圆形或椭圆形膜性囊泡结构;在相同蛋白质总量下,差速离心法提取的hucMSC-Ex高丰度蛋白质含量明显低于蔗糖密度梯度离心法,但其表面标志蛋白CD9和CD81的表达量却明显高于蔗糖密度梯度离心法;在相同蛋白质浓度下,差速离心法提取的hucMSC-Ex被靶细胞EA.hy926细胞内化的数量更多。结论两种方法均能成功提取hucMSC-Ex,差速离心法提取的hucMSC-Ex纯度更高,而高丰度蛋白质含量明显降低。

荧光小分子氨氯吡咪识别ds—DNA中单链断裂损伤的研究

DNA的单链断裂损伤（single strand breaks,SSBs）是严重的DNA损伤之一。估计每个哺乳类细胞每天DNA单链断裂发生的频率约为5万次。因而发展灵敏、快速、简便的方法检测DNA骨架断裂损伤，对于疾病早期诊断、药物筛选等都具有重要的意义。传统的测定细胞DNA骨架断裂的方法包括：中性或碱性蔗糖密度梯度离心法、DNA碱解旋速率法、中性或碱性膜洗脱法、DNA粘度测量法等。

口蹄疫疫苗146S检测方法研究进展

完整的口蹄疫病毒粒子（146S）是口蹄疫疫苗的有效成分，146S抗原的含量直接决定了口蹄疫疫苗的质量，146S抗原的检测既可以指导疫苗的生产，又能评价疫苗的质量。目前对146S定量的方法主要是蔗糖密度梯度离心法、氯化铯密度梯度离心法、ELISA检测等，同时研究人员也在积极地探索其他更为简便、精确、成本低的检测方法。本文对146S含量检测方法的研究进行综述。

禽白血病:诊断技术出新

用差速离心机非线性蔗糖密度梯度离心法,提纯感染雏鸡血奖中的 AMV,用改良的 SDS—PACE 法,提取AMV 结构蛋白 P27,以纯化的 P27高免家兔。

人脐血血浆外泌体提取方法的比较

为探寻高效且稳定的提取人脐血血浆外泌体的方法,利用超高速离心法、蔗糖垫密度梯度离心法、改良超速离心法和聚乙二醇(polyethylene glycol, PEG)沉淀法提取人脐血血浆外泌体,并比较4种方法的优劣。利用透射电镜、动态光散射技术观察外泌体的形态、结构及大小;聚氰基丙烯酸正丁酯(bicinchoninic acid, BCA)法测定外泌体蛋白总量;Western blotting检测外泌体表面标志蛋白CD63、HSP70以及外泌体阴性蛋白GM130 (高尔基标志蛋白)的表达。结果表明,与提取外泌体的“金标准”,即超高速离心法相比,蔗糖垫密度梯度离心法稳定性好,获取的外泌体粒径较均一,但操作较复杂,耗时长;改良超速离心法操作较简单,纯度较高;PEG沉淀法提取的外泌体蛋白量最高,操作时间最短,但杂质较多。结果表明,4种方法均能从人脐血血浆中获取外泌体,但在操作时间、纯度、提取量等方面存在一定差异。因此,应根据实验目的和具体要求选择合适的提取人脐血血浆外泌体的方法。