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用蔗糖密度梯度离心法纯化小球隐孢子虫卵囊试验 被引量:10
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作者 李建华 张西臣 +1 位作者 陈建宝 田宗成 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2001年第4期22-23,共2页
用蔗糖密度梯度离心法从接种犊牛粪便中纯化小球隐孢子虫卵囊 ,该方法操作简便、快速、经济、获得的卵囊纯度高 ,回收率达 92 .0 % ,适合于国内普通实验室使用。
关键词 卵囊 纯化 小球隐孢子虫 蔗糖密度梯度离心法
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饱和蔗糖漂浮离心法与水洗沉淀集卵法在食蟹猴鞭虫病感染调査中的应用效果比较 被引量:1
2
作者 谢永平 李军 +6 位作者 秦长串 庞彬辉 陈彦臣 韦志锋 陶立 秦若甫 禤雄标 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第4期191-192,241,共3页
为了解广西食蟹猴饲养场鞭虫病的感染情况,并比较饱和蔗糖漂浮离心法和水洗沉淀集卵法对虫卵检出率的影响,笔者采集广西3个饲养场食蟹猴新鲜粪便样品共计457份,采用饱和蔗糖漂浮离心法和水洗沉淀集卵法,取样涂于载玻片上,制片后于显微... 为了解广西食蟹猴饲养场鞭虫病的感染情况,并比较饱和蔗糖漂浮离心法和水洗沉淀集卵法对虫卵检出率的影响,笔者采集广西3个饲养场食蟹猴新鲜粪便样品共计457份,采用饱和蔗糖漂浮离心法和水洗沉淀集卵法,取样涂于载玻片上,制片后于显微镜下测量观察。结果:饱和蔗糖漂浮离心法检出鞭虫阳性数分别为10/62、2/80、9/315,阳性率分别为16.13%、2.50%、2.86%,平均为4.60%;水洗沉淀集卵法检出鞭虫阳性数分别为6/62、1/80、4/315,阳性率分别为9.68%、1.25%、1.27%,平均为2.41%。饱和蔗糖漂浮离心法显著提高了鞭虫检出率,并且有镜检视野杂质少,虫卵密集,节约时间等优点,适用于食蟹猴鞭虫病诊断、流行病学调查等检测项目。 展开更多
关键词 饱和蔗糖漂浮离心法 水洗沉淀集卵法 食蟹猴 鞭虫 鞭虫病
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不同离心力分离外周血单个核细胞的条件优化 被引量:3
3
作者 熊静 王思雨 +4 位作者 张云惠 吴利红 邓弘仙 刘阳 罗兴燕 《检验医学与临床》 CAS 2019年第3期289-291,共3页
目的观察不同离心力对人外周血单个核细胞(PBMC)分离的影响。方法采用聚蔗糖密度梯度离心法分离人外周血中PBMC,不同分离离心力及洗涤离心力获取细胞,利用流式细胞仪检测细胞得率和存活状况,并进行统计学分析。结果分离离心力结果:离心... 目的观察不同离心力对人外周血单个核细胞(PBMC)分离的影响。方法采用聚蔗糖密度梯度离心法分离人外周血中PBMC,不同分离离心力及洗涤离心力获取细胞,利用流式细胞仪检测细胞得率和存活状况,并进行统计学分析。结果分离离心力结果:离心力600g时获取的细胞数最多;24h检测的凋亡细胞数在离心力300~900g分离时差异无统计学意义(P>0.05)且相对较少,增加离心力,凋亡细胞数增加;72h检测离心力大于1 200g或低至300g时,存活细胞数显著减少。洗涤离心力结果:离心力150g时细胞得率显著低于300~2 400g时;24h检测细胞凋亡显示离心力大于600g时,凋亡细胞数增加;72h检测显示洗涤离心力大于1 200g时,存活细胞数显著减少。结论分离离心力在600~900g及洗涤离心力在300~600g均可用于PBMC的分离。 展开更多
关键词 外周血单个核细胞 蔗糖密度梯度离心法 离心
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肉苁蓉寄主梭梭根际土壤微生物种类及群落结构特征 被引量:6
4
作者 沈亮 徐荣 +4 位作者 刘赛 徐常青 贺宁 刘同宁 陈君 《生态学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第13期3933-3942,共10页
为探索梭梭根际土壤微生物结构特征及其与肉苁蓉寄生的关系,应用磷脂脂肪酸(PLFA)法分析了5—8月份梭梭生长季节的根际土壤微生物种类及群落结构特征,采用湿筛倾注-蔗糖离心法对其根际土壤AM真菌进行了初步分离和鉴定,并分析了肉苁蓉寄... 为探索梭梭根际土壤微生物结构特征及其与肉苁蓉寄生的关系,应用磷脂脂肪酸(PLFA)法分析了5—8月份梭梭生长季节的根际土壤微生物种类及群落结构特征,采用湿筛倾注-蔗糖离心法对其根际土壤AM真菌进行了初步分离和鉴定,并分析了肉苁蓉寄生与梭梭根际微生物及环境因子间的相关性。结果表明,5—7月3个月份的梭梭根际土壤微生物磷脂脂肪酸种类及含量均显著高于8月份,总磷脂脂肪酸和AM真菌磷脂脂肪酸以6月份含量最高。梭梭根际土壤共鉴定出AM真菌4属35种,它们分别为球囊霉属(Glomus)22种、无梗囊霉属(Acaulospora)7种、多孢囊霉属(Diversispora)3种和巨孢囊霉属(Gigaspora)3种。其中以黑球囊霉(Glomus melanosporum)和双网无梗囊霉(Acaulospora bireticulata)为优势种群,并且发现了与寄生有关的巨孢囊霉属AM真菌。6月份和8月份的AM真菌孢子数量最多,而5月份的AM真菌孢子数量最低。6月份梭梭根际土壤提取液得到的肉苁蓉种子萌发率(65.94%)和田间接种寄生率(59.19%)均为最高值,而5月份土壤提取液测试得到的肉苁蓉种子萌发率最低。因此,推测梭梭根际AM真菌可能参与了肉苁蓉的寄生过程。相关分析表明梭梭根际土壤微生物种类和数量主要与土壤温湿度和土壤理化性质相关性较大,其中可能与寄生有关的真菌数量与土壤温度呈显著正相关;肉苁蓉寄生率与土壤温度及土壤养分呈显著负相关。研究为解析梭梭根际土壤微生物在肉苁蓉寄生过程中的作用以及指导肉苁蓉人工种植提供参考。 展开更多
关键词 梭梭 肉苁蓉 土壤微生物群落结构 磷脂脂肪酸 湿筛倾注-蔗糖离心法 环境因子
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菌根孢子分离技术的若干改进 被引量:1
5
作者 何光泽 金光 《福建果树》 1996年第4期49-49,4,共2页
菌根孢子分离技术的若干改进何光泽,金光(福建省农科院果树所350013)湿筛──倾析法和蔗糖离心法是从土壤中分离菌根孢子的最常用方法,对此巳有过许多报导(1、2)。但我们在工作中也经常发现,一些较轻的细小杂物,经过湿... 菌根孢子分离技术的若干改进何光泽,金光(福建省农科院果树所350013)湿筛──倾析法和蔗糖离心法是从土壤中分离菌根孢子的最常用方法,对此巳有过许多报导(1、2)。但我们在工作中也经常发现,一些较轻的细小杂物,经过湿筛后仍不易除去,当将留在筛网上的物... 展开更多
关键词 菌根孢子 分离 蔗糖离心法
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大鼠不饱和脂肪酸的代谢变化与衰老的关系 被引量:5
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作者 刘惠敏 骆子生 +1 位作者 李兴发 姜玲玲 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期42-43,共2页
目的 探讨衰老与细胞内不饱和脂肪酸代谢变化的关系。方法 采用蔗糖密度梯度离心法分离大鼠肝脏线粒体和微粒体 ,用毛细管气相色谱法测定了青年和老年大鼠肝组织、肝线粒体和微粒体中的 1 4种脂肪酸 ,获取有统计意义的数据。结果  6... 目的 探讨衰老与细胞内不饱和脂肪酸代谢变化的关系。方法 采用蔗糖密度梯度离心法分离大鼠肝脏线粒体和微粒体 ,用毛细管气相色谱法测定了青年和老年大鼠肝组织、肝线粒体和微粒体中的 1 4种脂肪酸 ,获取有统计意义的数据。结果  6种不饱和脂肪酸的总量占所测 1 4种脂肪酸总量的比例 ,老年组均小于青年组 (P<0 .0 5)。结论 随着增龄 ,自由基介导的脂质过氧化程度不断加强 。 展开更多
关键词 生物膜 毛细管气相色谱法 衰老 脂质过氧化 不饱和脂肪酸 蔗糖密度梯度离心法
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从感染小鼠获得微小隐孢子虫卵囊方法的改进 被引量:14
7
作者 黄克和 杨世广 唐建霞 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期360-362,共3页
目的 建立从感染C5 7BL/ 6N小鼠获得大量微小隐孢子虫卵囊的方法。方法 在饮水中添加不同浓度的地塞米松对人工感染小鼠进行免疫抑制 ,探讨获得最多卵囊数的药物添加量 ;比较不同纯化方法得到的卵囊回收率和纯度 ;探讨来自不同动物、... 目的 建立从感染C5 7BL/ 6N小鼠获得大量微小隐孢子虫卵囊的方法。方法 在饮水中添加不同浓度的地塞米松对人工感染小鼠进行免疫抑制 ,探讨获得最多卵囊数的药物添加量 ;比较不同纯化方法得到的卵囊回收率和纯度 ;探讨来自不同动物、不同纯化方法的卵囊在牛输卵管上皮细胞培养系统的感染情况。结果 地塞米松加入量为 2 0 μg/ml的第 3组获得的卵囊量高达 4 .16× 10 9/ 30个小鼠 ;用饱和盐水漂浮法与用蔗糖密度梯度离心法纯化得到的卵囊具有相同的回收率和纯度 ;从感染小鼠与犊牛中获得的卵囊在感染性上差异不显著。结论 成功地建立了从感染小鼠获得大量微小隐孢子虫卵囊的方法 ,具有简单、方便、快速等优点 ,并且不影响活力。 展开更多
关键词 微小隐孢子虫卵囊 饱和盐水漂浮法 蔗糖密度梯度离心法 细胞培养 隐孢子虫病
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从鼠粪中分离纯化微小隐孢子虫卵囊方法的研究 被引量:17
8
作者 陈甫 黄克和 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期219-222,共4页
目的探索一种实用、纯度和回收率高且卵囊活力强的分离纯化微小隐孢子虫卵囊的方法。方法分别采用经典的不连续蔗糖密度梯度离心法、改良饱和盐水漂浮法、氯化铯(CsCl)密度梯度离心法和Percoll密度梯度离心法分离纯化C57BL/6小鼠粪中隐... 目的探索一种实用、纯度和回收率高且卵囊活力强的分离纯化微小隐孢子虫卵囊的方法。方法分别采用经典的不连续蔗糖密度梯度离心法、改良饱和盐水漂浮法、氯化铯(CsCl)密度梯度离心法和Percoll密度梯度离心法分离纯化C57BL/6小鼠粪中隐孢子虫卵囊。并将4种方法分离纯化获得的卵囊各105体外感染牛输卵管上皮细胞(BFTE),48h和72h后油镜下观察各分离法卵囊的发育情况,以比较卵囊的纯度和活性。结果经典的不连续蔗糖密度梯度离心法分离获得的卵囊数[(2.86±0.08)×107]与改良饱和盐水漂浮法[(2.88±0.15)×107]无明显差异(P>0.05),但高于Percoll密度梯度离心法[(1.52±0.08)×107](P<0.01)和CsCl密度梯度离心法[(2.46±0.13)×107](P<0.05)。4种方法分离纯化的卵囊体外感染BFTE48h和72h后隐孢子虫数无明显差异(P>0.05)。但CsCl密度梯度离心法纯化的隐孢子虫卵囊纯度明显高于不连续蔗糖密度梯度离心法。结论改良饱和盐水漂浮法较经典的不连续蔗糖密度梯度离心法操作简单、快速;CsCl密度梯度离心法分离的隐孢子虫卵囊纯度较高。 展开更多
关键词 微小隐孢子虫 卵囊 改良饱和盐水漂浮法 Percoll密度梯度离心法 不连续蔗糖密度梯度离心法 氯化铯密度梯度离JD法 牛输卵管上皮细胞
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抗猪脂肪细胞膜蛋白抗体的制备与鉴定 被引量:1
9
作者 肖啸 张曦 +3 位作者 葛长荣 郝军元 汪磊 高士争 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2004年第6期9-11,共3页
以蔗糖密度梯度离心提取猪皮下脂肪细胞和其他组织细胞膜蛋白,经SDS-PAGE分析。
关键词 脂肪细胞膜蛋白 抗体 制备 鉴定 蔗糖密度梯度离心法 提取 体脂沉积 胴体品质
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大鼠肝细胞过氧化物酶体的提取 被引量:2
10
作者 骆子生 王敏彦 姜玲玲 《氨基酸和生物资源》 CAS 2000年第1期20-22,共3页
:采用蔗糖密度梯度离心法 ( 950 0 0× g,2 h)提取大鼠肝细胞过氧化物酶体 ,所得过氧化物酶体形态完整 ,纯度与肝匀浆相比提高了 2 6倍 ,仅有少量 ( 0 .5%~ 0 .9%)的微粒体和线粒体污染 ,回收率为 1 2 %。为研究过氧化物酶体提供... :采用蔗糖密度梯度离心法 ( 950 0 0× g,2 h)提取大鼠肝细胞过氧化物酶体 ,所得过氧化物酶体形态完整 ,纯度与肝匀浆相比提高了 2 6倍 ,仅有少量 ( 0 .5%~ 0 .9%)的微粒体和线粒体污染 ,回收率为 1 2 %。为研究过氧化物酶体提供了有效的分离方法。此法还可将过氧化物酶体、微粒体、线粒体同时进行分离。 展开更多
关键词 过氧化物酶体 提取 蔗糖密度梯度离心法
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长期培养外周血单个核细胞的简易分离纯化方法 被引量:3
11
作者 罗利琼 陈诚华 张军 《新乡医学院学报》 CAS 2013年第4期249-250,共2页
目的对长期培养的外周血单个核细胞(PBMC)进行纯化,为后续研究提供方便。方法用聚蔗糖-泛影葡胺密度梯度离心法对长期培养的PBMC进行再次分离和纯化。结果用聚蔗糖-泛影葡胺密度梯度离心法再次处理长期培养的PBMC,可以得到纯度较高的PBM... 目的对长期培养的外周血单个核细胞(PBMC)进行纯化,为后续研究提供方便。方法用聚蔗糖-泛影葡胺密度梯度离心法对长期培养的PBMC进行再次分离和纯化。结果用聚蔗糖-泛影葡胺密度梯度离心法再次处理长期培养的PBMC,可以得到纯度较高的PBMC。结论聚蔗糖-泛影葡胺密度梯度离心法是纯化长期培养的PB-MC的一种简便、快捷、成本低的方法之一。 展开更多
关键词 外周血单个核细胞 蔗糖-泛影葡胺密度梯度离心法 细胞培养
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人脐带间充质干细胞来源外体提取方法的比较 被引量:1
12
作者 吴晓丹 张斌 +5 位作者 朱艳华 孙瑶湘 史惠 朱伟 钱晖 许文荣 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期350-353,共4页
目的比较蔗糖密度梯度离心法和差速离心法提取的脐带间充质干细胞来源外体(hucMSC-Ex)在高丰度蛋白质含量和纯度上的差异。方法分别用蔗糖密度梯度离心法和差速离心法提取hucMSC-Ex,透射电镜下观察两法提取的外体的形态结构,SDS-PAGE... 目的比较蔗糖密度梯度离心法和差速离心法提取的脐带间充质干细胞来源外体(hucMSC-Ex)在高丰度蛋白质含量和纯度上的差异。方法分别用蔗糖密度梯度离心法和差速离心法提取hucMSC-Ex,透射电镜下观察两法提取的外体的形态结构,SDS-PAGE分析二者的蛋白质组分,western blot检测二者的表面标志蛋白CD9和CD81,免疫荧光法检测二者内化至靶细胞EA.hy926的数量。结果两种方法提取的hucMSC-Ex均为直径约30~100 nm的圆形或椭圆形膜性囊泡结构;在相同蛋白质总量下,差速离心法提取的hucMSC-Ex高丰度蛋白质含量明显低于蔗糖密度梯度离心法,但其表面标志蛋白CD9和CD81的表达量却明显高于蔗糖密度梯度离心法;在相同蛋白质浓度下,差速离心法提取的hucMSC-Ex被靶细胞EA.hy926细胞内化的数量更多。结论两种方法均能成功提取hucMSC-Ex,差速离心法提取的hucMSC-Ex纯度更高,而高丰度蛋白质含量明显降低。 展开更多
关键词 脐带间充质干细胞 外体 差速离心法 蔗糖密度梯度离心法 比较
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荧光小分子氨氯吡咪识别ds—DNA中单链断裂损伤的研究
13
作者 张文艳 胡亮亮 +2 位作者 蔺凯 高强 张成孝 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2009年第A03期234-234,共1页
DNA的单链断裂损伤(single strand breaks,SSBs)是严重的DNA损伤之一。估计每个哺乳类细胞每天DNA单链断裂发生的频率约为5万次。因而发展灵敏、快速、简便的方法检测DNA骨架断裂损伤,对于疾病早期诊断、药物筛选等都具有重要的意义... DNA的单链断裂损伤(single strand breaks,SSBs)是严重的DNA损伤之一。估计每个哺乳类细胞每天DNA单链断裂发生的频率约为5万次。因而发展灵敏、快速、简便的方法检测DNA骨架断裂损伤,对于疾病早期诊断、药物筛选等都具有重要的意义。传统的测定细胞DNA骨架断裂的方法包括:中性或碱性蔗糖密度梯度离心法、DNA碱解旋速率法、中性或碱性膜洗脱法、DNA粘度测量法等。 展开更多
关键词 DNA单链断裂 DNA损伤 断裂损伤 分子氨 蔗糖密度梯度离心法 哺乳类细胞 DS 识别
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抗传染性法氏囊病病毒单克隆抗体的特性研究——传染性法氏囊病病毒抗原的培养与提纯
14
作者 张春艳 李艳飞 耿雪川 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2001年第4期25-26,共2页
关键词 抗传染性法氏囊病病毒 单克隆抗体 抗原培养 抗原提纯 蔗糖密度梯度离心法 超滤浓缩法
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口蹄疫疫苗146S检测方法研究进展 被引量:1
15
作者 赵颖慧 何召庆 《中国畜牧业》 2014年第24期55-56,共2页
完整的口蹄疫病毒粒子(146S)是口蹄疫疫苗的有效成分,146S抗原的含量直接决定了口蹄疫疫苗的质量,146S抗原的检测既可以指导疫苗的生产,又能评价疫苗的质量。目前对146S定量的方法主要是蔗糖密度梯度离心法、氯化铯密度梯度离心法... 完整的口蹄疫病毒粒子(146S)是口蹄疫疫苗的有效成分,146S抗原的含量直接决定了口蹄疫疫苗的质量,146S抗原的检测既可以指导疫苗的生产,又能评价疫苗的质量。目前对146S定量的方法主要是蔗糖密度梯度离心法、氯化铯密度梯度离心法、ELISA检测等,同时研究人员也在积极地探索其他更为简便、精确、成本低的检测方法。本文对146S含量检测方法的研究进行综述。 展开更多
关键词 ELISA检测 口蹄疫疫苗 蔗糖密度梯度离心法 有效成分 病毒粒子 研究人员 氯化铯 成本低
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禽白血病:诊断技术出新
16
《中国动物保健》 1999年第7期31-31,共1页
用差速离心机非线性蔗糖密度梯度离心法,提纯感染雏鸡血奖中的 AMV,用改良的 SDS—PACE 法,提取AMV 结构蛋白 P27,以纯化的 P27高免家兔。
关键词 诊断技术 禽白血病 蔗糖密度梯度离心法 结构蛋白 差速离心 非线性 雏鸡 家兔 提纯 纯化
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Establishment of a C57BL/6N mouse model of giardiasis
17
作者 卢思奇 王凤云 +1 位作者 罗晓冰 陈小宁 《Chinese Medical Journal》 SCIE CAS CSCD 2002年第10期1453-1456,共4页
OBJECTIVE: To establish a C57BL/6N mouse model infected with Giardia lamblia (G. lamblia) isolates from human origin. METHOD: Two groups of C57BL/6N mouse were inoculated with purified cysts of two G. lamblia isolates... OBJECTIVE: To establish a C57BL/6N mouse model infected with Giardia lamblia (G. lamblia) isolates from human origin. METHOD: Two groups of C57BL/6N mouse were inoculated with purified cysts of two G. lamblia isolates (CD and XZ) by gavage separately. Patterns and curves of cyst excretion of the infected mice were observed and summarized. Histopathological changes of the small intestines of the infected mice were observed. RESULTS: Thirty-six mice receiving 1 x 10(4) cysts each were all infected. The C57BL/6N mouse showed high susceptibility to G. lamblia infection. There was no notable distinction between the two groups of the mice infected by the cysts of CD and XZ isolates. Cyst excretion occurred with intermittence. Of 36 infected mice, 32 (89%) passed cysts intermittently and 4 (11%) others persistently. The latent period of cyst excretion was 0 - 3 days p.i. (post-inoculation). The interruption of cyst excretion ranged from 12 to 20 days p.i. The fastigium of the cyst excretion was on day 6 p.i. The peak count of the cysts passed during a 2 h collection period was 2.3 x 10(7)/g fecal specimen. Edema, inflammation, cell infiltration, small blood vessels congestion, mitotic figures and mucosa necrosis appeared in sections of intestines. CONCLUSION: C57Bl/6N mouse is a suitable animal model of G. lamblia. 展开更多
关键词 Disease Models Animal Animals GIARDIASIS Humans MICE Mice Inbred C57BL Research Support Non-U.S. Gov't
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人脐血血浆外泌体提取方法的比较 被引量:2
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作者 叶俊杰 孙晓东 +5 位作者 袁乐永 冯胜蓝 覃冰清 许倩倩 谢丽霞 桑明 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期2342-2351,共10页
为探寻高效且稳定的提取人脐血血浆外泌体的方法,利用超高速离心法、蔗糖垫密度梯度离心法、改良超速离心法和聚乙二醇(polyethylene glycol, PEG)沉淀法提取人脐血血浆外泌体,并比较4种方法的优劣。利用透射电镜、动态光散射技术观察... 为探寻高效且稳定的提取人脐血血浆外泌体的方法,利用超高速离心法、蔗糖垫密度梯度离心法、改良超速离心法和聚乙二醇(polyethylene glycol, PEG)沉淀法提取人脐血血浆外泌体,并比较4种方法的优劣。利用透射电镜、动态光散射技术观察外泌体的形态、结构及大小;聚氰基丙烯酸正丁酯(bicinchoninic acid, BCA)法测定外泌体蛋白总量;Western blotting检测外泌体表面标志蛋白CD63、HSP70以及外泌体阴性蛋白GM130 (高尔基标志蛋白)的表达。结果表明,与提取外泌体的“金标准”,即超高速离心法相比,蔗糖垫密度梯度离心法稳定性好,获取的外泌体粒径较均一,但操作较复杂,耗时长;改良超速离心法操作较简单,纯度较高;PEG沉淀法提取的外泌体蛋白量最高,操作时间最短,但杂质较多。结果表明,4种方法均能从人脐血血浆中获取外泌体,但在操作时间、纯度、提取量等方面存在一定差异。因此,应根据实验目的和具体要求选择合适的提取人脐血血浆外泌体的方法。 展开更多
关键词 外泌体 超高速离心法 蔗糖垫密度梯度离心法 改良超速离心法 聚乙二醇沉淀法 脐血血浆
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脑组织外泌体提取、鉴定及脑室注射活体示踪方法建立
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作者 王晋晨 叶樱泽 +2 位作者 钟懿 古丽娟 熊晓星 《卒中与神经疾病》 2020年第1期9-13,共5页
目的探讨脑组织外泌体提取、鉴定及脑室注射活体示踪方法。方法采用蔗糖梯度离心法,多次离心去除杂质,最终得到纯度较高的脑组织外泌体,采用电镜及western-blot技术对不同密度蔗糖溶液内的外泌体进行鉴定,DiR (1,1’-dioctadecyltetrame... 目的探讨脑组织外泌体提取、鉴定及脑室注射活体示踪方法。方法采用蔗糖梯度离心法,多次离心去除杂质,最终得到纯度较高的脑组织外泌体,采用电镜及western-blot技术对不同密度蔗糖溶液内的外泌体进行鉴定,DiR (1,1’-dioctadecyltetramethyl indotricarbocyanine Iodide)染料标记后在近红外二区仪器下观察脑室注射外泌体后在体内的远程转移情况。结果应用蔗糖梯度离心法进行超高速离心可得到背景较为干净的脑组织外泌体,DiR染料可对外泌体进行标记并显示外泌体在体内转移途径。结论应用蔗糖梯度离心法可成功提取脑组织中外泌体,DiR染料可对外泌体标记并进行活体示踪。 展开更多
关键词 外泌体 蔗糖梯度离心法 脑室注射活体示踪
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Growth phase dependent changes in the structure and protein composition of nucleoid in Escherichia coli
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作者 TALUKDER AliAzam ISHIHAMA Akira 《Science China(Life Sciences)》 SCIE CAS CSCD 2015年第9期902-911,共10页
The genomic DNA of bacteria is highly compacted in a single or a few bodies known as nucleoids. Here, we have isolated Escherichia coli nucleoid by sucrose density gradient centrifugation. The sedimentation rates, str... The genomic DNA of bacteria is highly compacted in a single or a few bodies known as nucleoids. Here, we have isolated Escherichia coli nucleoid by sucrose density gradient centrifugation. The sedimentation rates, structures as well as pro- tein/DNA composition of isolated nucleoids were then compared under various growth phases. The nucleoid structures were found to undergo changes during the cell growth; i. e., the nucleoid structure in the stationary phase was more tightly com- pacted than that in the exponential phase. In addition to factor for inversion stimulation (Fis), histone-like nucleoid structuring protein (H-NS), heat-unstable nucleoid protein (HU) and integration host factor (IHF) here we have identified, three new can- didates of E. coli nucleoid, namely DNA-binding protein from starved cells (Dps), host factor for phage QJ3 (Hfq) and sup- pressor of taC phenotype A (StpA). Our results reveal that the major components of exponential phase nucleoid are Fis, HU, H-NS, StpA and Hfq, while Dps occupies more than half of the stationary phase nucleoid. It has been known for a while that Dps is the main nucleoid-associated protein at stationary phase. From these results and the prevailing information, we propose a model for growth phase dependent changes in the structure and protein composition of nucleoid in E. coli. 展开更多
关键词 growth phase sucrose gradient bacterial nucleoid DNA binding protein DNA compaction
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