薄层色谱自显影法分离检测海洋放线菌T-2-3中抑菌成分

目的:采用薄层色谱生物自显影方法对北极海洋放线菌T-2-3提取物的抑菌成分进行研究。方法采用大孔树脂对该放线菌活性成分进行富集,并针对活性成分进行薄层生物自显影检测。结果经检测,Rf 0.40的点为活性化合物。结论薄层色谱生物自显影法是一种快速分离检测抑菌成分的实验手段。

应用薄层色谱-生物自显影技术评价乌药等三种中药的抗氧化活性

目的采用薄层色谱-生物自显影法研究与评价中药的抗氧化活性。方法用1，1-二苯基-2-苦肼基自由基乙醇溶液（1，1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH）和传统显色剂显色，拍摄图像，采用模拟扫描，获得各抗氧化成分的峰面积。结果以总峰面积大小为指标判定不同来源中药的抗氧化能力，结果表明浙江天台产乌药（94340）、四川凉山产厚朴（175647）和收集于上海的紫苏子（153206）清除DPPH自由基能力最强。以化学对照品峰面积与总峰面积的百分比来判定化合物抗氧化活性，表明去甲异波尔定（43．8％～66．0％）、厚朴酚与和厚朴酚（73．2％～93．2％）、木犀草素与芹菜素及成分“U”（47．6％～68．0％）分别是乌药、厚朴和紫苏子的主要抗氧化活性成分。结论本方法在中药抗氧化活性成分筛选及质量评价方面具有操作简便、选择性高、重现性好等优点。

薄层色谱-生物自显影观察新疆两色金鸡菊中清除自由基和抑制α-葡萄糖苷酶活性成分

目的:采用薄层色谱-生物自显影技术(TLC-bioautography),观察新疆两色金鸡菊提取物中具有清除自由基和抑制α-葡萄糖苷酶活性成分.方法:以1,1'-二苯基苦基苯肼(DPPH)和2,2'-氨基-二(3-乙基-苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐(ABTS)为显色剂,观察新疆两色金鸡菊水提物和醇提物中清除自由基的有效成分;以对硝基苯-β-D-葡萄糖苷(p-Nitrophanyl-β-D-Gluopyranoside,p NPG)为底物,观察水提物和醇提物中具有抑制α-葡萄糖苷酶(来源于啤酒酵母菌)的活性成分.采用混合标准物质TLC色谱进行活性成分定性分析.结果:新疆两色金鸡菊水提物和醇提物中均含有马里苷、奥卡宁、栎草亭-7-O-β-D-葡萄糖苷、黄酮奥卡宁(flavanokanin)、绿原酸、芦丁和槲皮素等化学成分.经薄层色谱-生物自显影实验,两色金鸡菊水提物和醇提物中的黄酮奥卡宁、马里苷、芦丁和绿原酸均有较强清除DPPH和ABTS自由基的能力;水提物和醇提物中黄酮奥卡宁、奥卡宁和马里苷能有效抑制α-葡萄糖苷酶的活性.结论:经薄层色谱-生物自显影技术可快速发现两色金鸡菊中具有清除自由基和抑制α-葡萄糖苷酶活性成分,为进一步研究提供了指引.

薄层色谱-自显影技术分离检测石榴皮清除自由基活性成分

目的:采用薄层色谱分离和生物活性检测相结合的薄层色谱-自显影技术,对石榴皮提取物清除自由基活性成分进行研究。方法:以三元溶剂二甲苯∶乙酸乙酯∶乙酸=3∶5.5∶1.5为展开剂对石榴皮提取物进行展开分离,以二苯代苦味肼自由基(DPPH)为显色剂,喷洒于经展开后的TLC进行显色拍照。结果:石榴皮提取物在传统显色剂下分离到6个化合物,利用DPPH自由基显色,表明其中4个化合物具有较强的清除作用,且活性成分主要为鞣质类化合物。结论:薄层色谱-自显影技术是一种快速分离鉴定天然产物中清除自由基活性成分的实验方法。

基于薄层色谱-生物自显影-MSn法表征枸骨叶中的脂肪酶抑制活性成分

为寻找枸骨叶的降脂减肥活性成分,本文采用薄层色谱-生物自显影法,筛选其具有脂肪酶抑制活性的成分,再通过原位TLC-EFISI-MSn技术,对具有脂肪酶抑制活性的成分进行快速结构解析。通过对10个具有脂肪酶抑制活性的薄层色谱-生物自显影斑点进行快速解析,初步鉴定出15个可能的成分,包括9个熊果烷型三萜、1个齐墩果烷型三萜,以及5个18,19-裂环型三萜,其中有7个活性斑点所包含的12个化合物通过对照品比对得到验证。该方法能够快速从枸骨叶中筛选、表征出具有脂肪酶抑制活性成分,从而为确定枸骨叶活性成分的筛选和鉴定提供依据。

薄层色谱-生物自显影技术在活性物质筛选中的应用

薄层色谱-生物自显影技术(TLC-bioautography)将薄层色谱分离和生物活性测定相结合,是一种活性指导下的快速靶向追踪分离、筛选活性成分的方法。此法操作简单、耗时短、灵敏度和专属性高,常应用于抗细菌、抗真菌、抗氧化,以及对乙酰胆碱酯酶抑制剂、葡萄糖苷酶抑制剂等活性天然产物的筛选。笔者对薄层色谱-生物自显影技术在活性物质筛选方面的应用进行综述。

桑枝中槲皮素和绿原酸的薄层色谱鉴别及抗氧化活性筛选

目的建立桑枝中槲皮素和绿原酸的薄层色谱(TLC)鉴别方法,并筛选其抗氧化活性。方法采用甲醇为溶剂,超声提取桑枝中的槲皮素和绿原酸,实验了用不同展开系统、显色剂、温度、检视方法及不同薄层板对桑枝中槲皮素及绿原酸薄层鉴别的影响,选择最佳薄层鉴别条件。以1,1-二苯基-2-苦肼基自由基(DPPH)显色,筛选其抗氧化活性。结果以乙酸乙酯∶水∶甲酸∶甲苯(17∶2∶2∶0.8)为展开剂在硅胶G板上展开,1%Al Cl3为显色剂,366 nm下检视,桑枝中的槲皮素和绿原酸出现明显蓝色及蓝绿色斑点,薄层-生物自显影实验发现槲皮素和绿原酸的薄层板在紫色背景下呈现淡黄色斑点,证明二者具有抗氧化活性。结论本法操作简便,结果准确可靠,可用于桑枝的质量控制。

藏药三果汤散抗氧化有效成分的薄层色谱-生物自显影及HPLC指纹图谱

目的:初步建立藏药三果汤散的HPLC指纹图谱,研究藏药三果汤散的抗氧化活性,初步筛选出三果汤散中抗氧化有效成分。方法:采用薄层色谱-生物自显影技术和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)分光光度法对不同来源的三果汤散、单味药对照药材及其中单体成分没食子酸、没食子酸乙酯、鞣花酸、柯里拉京进行抗氧化作用初步测定,并采用高效液相色谱法初步建立了三果汤散的指纹图谱。结果:不同来源的三果汤散的抗氧化作用差异不大,所含化学成分以没食子酸抗氧化作用最强,揭示没食子酸可能是三果汤散抗氧化的主要有效成分之一。结论:该方法准确、简便可行,为进一步探索三果汤散抗氧化有效成分提供了科学依据。

薄层色谱-生物自显影技术测定绵茵陈提取液中绿原酸的含量并评价其抗氧化活性

目的建立绵茵陈中绿原酸的含量测定方法并采用薄层色谱-生物自显影法研究绵茵陈提取液的抗氧化活性。方法薄层扫描法测定绵茵陈提取液中绿原酸的含量,随后用二苯代苦味肼基自由基溶液显色,双波长扫描,获得其抗氧化成分的峰面积。结果常规薄层扫描与生物自显影扫描测定得到的绿原酸含量具有一致性,由生物自显影扫描法测得色谱峰总积分值明显大于绿原酸单峰面积,表明绵茵陈中除了绿原酸外,还存在其它抗氧化能力较强的活性成分。结论以DPPH作显色剂,双波长扫描,可利用TLC-生物自显影技术对天然提取物中具有自由基清除及抗氧化活性的活性成分进行快速筛选与评价。

利用二维生物自显影技术快速检测追踪金钱松内生真菌抗细菌活性成分

目的:利用培养基覆盖二维薄层色谱生物自显影技术(2D-TLC bioautography)快速检测、追踪金钱松内生真菌抗细菌活性成分。方法:以二维薄层色谱将金钱松内生真菌代谢产物样品展开,以枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)为指示菌,氯化三苯四氮唑(TTC)为显色剂,采用培养基覆盖生物自显影技术对其抗细菌活性成分进行检测、追踪。结果:该方法展开系统筛选简单,抑菌斑位置准确、斑点清晰,其优化条件为:以乙酸乙酯:正己烷(3:7)为弱极性展开系统,甲醇:二氯甲烷(1:9)为强极性展开系统,用20%甘油滤纸对湿室保湿,以14h菌龄的枯草芽孢杆菌为指示菌种子液,自显影薄层板36℃培养14～18h,1%TTC显色时间为1～2h,含0.2%～0.6%琼脂的半固体肉汤培养基应使用混菌法生物自显影,含1%琼脂半固体肉汤培养基应使用涂布法生物自显影。结论:培养基覆盖二维薄层色谱生物自显影技术是一种快速检测、追踪抗菌活性成分的方法,尤其适用于成分复杂的天然产物中抗菌成分研究。

薄层色谱生物自显影法检测豆豉中乙酰胆碱酯酶抑制剂的研究

分别采用两种薄层色谱生物自显影法检测豆豉中乙酰胆碱酯酶抑制剂,结果表明两种方法均能较好检出豆豉中的抑酶组分,薄层色谱生物自显影法(二)深色背景与白色斑点对比更明显,检测效果更好。与薄层色谱生物自显影检测法相比,微孔板法的检测限更低,但最终检出所需试样量却更大。实验表明,采用薄层色谱生物自显影法检测豆豉中乙酰胆碱酯酶抑制剂是一个快捷、简便、高效的方法。

薄层色谱-生物自显影联用检测残留抗生素的研究

建立利用薄层色谱-生物自显影联用原位技术检测农副产品中的抗生素残留方法。采用饱和的EDTA-2Na溶液活化的硅胶薄层层析板,展开溶剂系统为乙酸乙酯-氯仿-甲醇-氨水(40∶40∶20∶5),于紫外灯下记录薄层色谱图,以发光细菌费氏弧菌(V.fi scheri)为检定菌,薄层板表面均匀涂布处于最强发光周期的费氏弧菌(V.fi scheri)发酵液,放入生物发光检测仪中,拍照记录。结果表明,100份样品中的72份被检出有残留抗菌物质存在,并对残留抗生素进行初步推定。该方法操作简便、快捷、结果准确,可进一步研究用于抗生素残留定性与定量检测。

TLC-生物自显影技术在中药化学实验中的应用

通过引入"薄层色谱-生物自显影"新技术,对中药化学实验教学进行改革与探索。提高实验操作技能和实验教学质量,加深学生对理论知识的理解,激发学生的学习兴趣,取得了可喜成果和宝贵经验。

改良TLC-生物自显影引导裸脚菇中抗青、绿霉物质的分离

目的:分离和追踪野生裸脚菇属(0612-9)中抗青、绿霉活性物质。方法:采用正相硅胶柱色谱、ODS柱色谱、半制备HPLC等分离活性成分,用改良薄层色谱-生物自显影(即浇注法)追踪活性成分,牛津杯法、薄层色谱-紫外荧光法、10%浓硫酸乙醇显色等方法作为验证方法。结果:共制备5种化合物,分别为Ⅰ1.1、Ⅰ1.2、Ⅰ2、Ⅰ3和Ⅱ,改良TLC-生物自显影追踪到4种抗菌活性物质,即Ⅰ1.1、Ⅰ2、Ⅰ3和Ⅱ,样品检测量低至18.6μg/mL。结论:本方法具有清晰、准确的优点,适于引导中度极性活性物质,如该裸脚菇抗菌活性物质等的分离。

基于薄层色谱生物自显影技术的傣药莫哈蒿抗乙酰胆碱酯酶活性研究

探索建立抗乙酰胆碱酯酶活性的薄层色谱(TLC)生物自显影方法,研究傣药莫哈蒿中鸭嘴花碱等化学成分的抗乙酰胆碱酯酶活性,为寻找新的阿尔茨海默病(AD)药物提供参考。方法 采用薄层色谱分离和抗乙酰胆碱酯酶活性测定相结合的TLC生物自显影技术,对傣药莫哈蒿提取液开展抗乙酰胆碱酯酶活性研究。结果 建立了一种稳定可靠的检测抗乙酰胆碱酯酶活性的TLC生物自显影方法,傣药莫哈蒿鲜品及干品、不同部位提取液均具有抗乙酰胆碱酯酶活性,其活性大小为:鲜品>干品,叶>根>茎。结论 傣药莫哈蒿具有抗乙酰胆碱酯酶活性,可作为国内外高发疾病AD治疗药物的天然乙酰胆碱酯酶抑制剂进一步深入研究。

海洋微藻抗肿瘤及抗氧化活性初筛

目的对90株海洋微藻的提取物进行了体外抗肿瘤和抗氧化活性筛选,从中寻找活性微藻藻株。方法以细胞凋亡诱导、细胞坏死以及自由基清除为活性指标,采用SRB,TLC自显影技术和DPPH方法进行抗肿瘤以及抗氧化活性筛选,并对活性藻株代谢产物进行了HPLC-UV分析。结果与结论发现5株微藻的提取物具有抗肿瘤活性、1株微藻的提取物具有抗氧化活性。HPLC-UV分析表明,其抗氧化活性可能与具有400nm最大紫外吸收的化合物有关。

独活抑制乙酰胆碱酯酶和丁酰胆碱酯酶活性研究

目的研究独活乙醇提取物及不同萃取部位抑制乙酰胆碱酯酶和丁酰胆碱酯酶的活性。方法应用薄层色谱(TLC)-生物自显影技术和微孔高通量筛选的方法。结果在TLC-生物自显影抑酶实验中独活乙醇提取物,石油醚和氯仿萃取部位呈现阳性结果;微孔高通量筛选实验中独活乙醇提取物、石油醚及氯仿萃取部位对乙酰胆碱酯酶(AChE)和丁酰胆碱酯酶(BuChE)均具有抑制作用,浓度为1mg.mL-1时,3个萃取部位对AChE的抑制率分别为(16.88±0.42)%、(11.82±0.55)%、(44.33±3.21)%,对BuChE的抑制率分别为(13.97±1.17)%、(14.64±1.10)%、(18.63±1.24)%。结论独活乙醇提取物、石油醚萃取部位及氯仿萃取部位对2种胆碱酯酶均具有抑制作用,其中氯仿萃取部位对胆碱酯酶抑制率最高,为主要的抑酶活性部位。

甘蒙锦鸡儿中乙酰胆碱酯酶抑制剂的分离及结构鉴定

从传统中药甘蒙锦鸡儿(Caragana opulens)树皮中提取分离具有乙酰胆碱酯酶抑制活性的化合物.利用各种色谱法分离化学成分,然后通过理化性质和现代波谱技术鉴定其结构.得到的化合物采用薄层色谱生物自显影法初步筛选其乙酰胆碱酯酶抑制活性,再用改良的Ellman法进一步测定其对乙酰胆碱酯酶的抑制率.共分离得到7个化合物,分别鉴定为1,4-二(苯并恶唑-2-基)萘(1)、9,12,13-三羟基-10反式十八烯酸(2)、对羟基苯乙酮(3)、香草酸(4)、对羟基反式肉桂酸(5)、反式肉桂酸(6)、间羟基苯甲酸(7).其中化合物3能在薄层板上形成明显白斑,进一步测定其对乙酰胆碱酯酶抑制的IC50为1.4mmol/L,结果表明化合物3具有乙酰胆碱酯酶抑制活性.

十种热带雨林植物光活化抗微生物活性的筛选

为从植物中寻找具有光调节生物活性的物质,通过滤纸片法和薄层色谱自显影技术,以金黄色葡菌球菌(Staphylococcus aureus)、枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)、草分枝杆菌(Mycobacteium phlei)、环状芽胞杆菌(Bacillus circulans)为供试菌,对10种热带雨林植物进行光活化抗微生物活性的筛选和活性部位的确定.结果表明:0.1mg的狗花椒(Y10)氯仿提取物对枯草芽胞杆菌具有明显的光活化抗微生物活性,在紫外光照射后和黑暗中抑菌圈相差4mm,薄层色谱中0.5mg Y10氯仿提取物抗枯草芽胞杆菌的抑菌圈最大.本研究为进一步从该植物中寻找新型光敏剂奠定了基础.

中药检验新技术在《中华人民共和国药典》的应用

为了促进现代仪器分析技术在中药检验中的应用,进一步提高和完善中药质量标准,综述2010年版《中华人民共和国药典》一部新增检验技术:DNA分子鉴定、中药指纹图谱、液相色谱-质谱联用技术、薄层色谱-生物自显影的应用概况。