基于薄层色谱-生物自显影-MSn法表征枸骨叶中的脂肪酶抑制活性成分

为寻找枸骨叶的降脂减肥活性成分,本文采用薄层色谱-生物自显影法,筛选其具有脂肪酶抑制活性的成分,再通过原位TLC-EFISI-MSn技术,对具有脂肪酶抑制活性的成分进行快速结构解析。通过对10个具有脂肪酶抑制活性的薄层色谱-生物自显影斑点进行快速解析,初步鉴定出15个可能的成分,包括9个熊果烷型三萜、1个齐墩果烷型三萜,以及5个18,19-裂环型三萜,其中有7个活性斑点所包含的12个化合物通过对照品比对得到验证。该方法能够快速从枸骨叶中筛选、表征出具有脂肪酶抑制活性成分,从而为确定枸骨叶活性成分的筛选和鉴定提供依据。

应用薄层色谱-生物自显影技术评价乌药等三种中药的抗氧化活性

目的采用薄层色谱-生物自显影法研究与评价中药的抗氧化活性。方法用1，1-二苯基-2-苦肼基自由基乙醇溶液（1，1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH）和传统显色剂显色，拍摄图像，采用模拟扫描，获得各抗氧化成分的峰面积。结果以总峰面积大小为指标判定不同来源中药的抗氧化能力，结果表明浙江天台产乌药（94340）、四川凉山产厚朴（175647）和收集于上海的紫苏子（153206）清除DPPH自由基能力最强。以化学对照品峰面积与总峰面积的百分比来判定化合物抗氧化活性，表明去甲异波尔定（43．8％～66．0％）、厚朴酚与和厚朴酚（73．2％～93．2％）、木犀草素与芹菜素及成分“U”（47．6％～68．0％）分别是乌药、厚朴和紫苏子的主要抗氧化活性成分。结论本方法在中药抗氧化活性成分筛选及质量评价方面具有操作简便、选择性高、重现性好等优点。

薄层色谱-生物自显影观察新疆两色金鸡菊中清除自由基和抑制α-葡萄糖苷酶活性成分

目的:采用薄层色谱-生物自显影技术(TLC-bioautography),观察新疆两色金鸡菊提取物中具有清除自由基和抑制α-葡萄糖苷酶活性成分.方法:以1,1'-二苯基苦基苯肼(DPPH)和2,2'-氨基-二(3-乙基-苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐(ABTS)为显色剂,观察新疆两色金鸡菊水提物和醇提物中清除自由基的有效成分;以对硝基苯-β-D-葡萄糖苷(p-Nitrophanyl-β-D-Gluopyranoside,p NPG)为底物,观察水提物和醇提物中具有抑制α-葡萄糖苷酶(来源于啤酒酵母菌)的活性成分.采用混合标准物质TLC色谱进行活性成分定性分析.结果:新疆两色金鸡菊水提物和醇提物中均含有马里苷、奥卡宁、栎草亭-7-O-β-D-葡萄糖苷、黄酮奥卡宁(flavanokanin)、绿原酸、芦丁和槲皮素等化学成分.经薄层色谱-生物自显影实验,两色金鸡菊水提物和醇提物中的黄酮奥卡宁、马里苷、芦丁和绿原酸均有较强清除DPPH和ABTS自由基的能力;水提物和醇提物中黄酮奥卡宁、奥卡宁和马里苷能有效抑制α-葡萄糖苷酶的活性.结论:经薄层色谱-生物自显影技术可快速发现两色金鸡菊中具有清除自由基和抑制α-葡萄糖苷酶活性成分,为进一步研究提供了指引.

薄层色谱-生物自显影技术在活性物质筛选中的应用

薄层色谱-生物自显影技术(TLC-bioautography)将薄层色谱分离和生物活性测定相结合,是一种活性指导下的快速靶向追踪分离、筛选活性成分的方法。此法操作简单、耗时短、灵敏度和专属性高,常应用于抗细菌、抗真菌、抗氧化,以及对乙酰胆碱酯酶抑制剂、葡萄糖苷酶抑制剂等活性天然产物的筛选。笔者对薄层色谱-生物自显影技术在活性物质筛选方面的应用进行综述。

高效液相色谱-质谱联用法研究两种尼莫地平制剂的生物等效性

目的:评价两种国产尼莫地平片剂人体生物等效性。方法:采用单剂量双交叉实验设计,用高效液相色谱 质谱联用(HPLC MS)法测定20名健康受试者口服两种尼莫地平片60 mg后的血药浓度。结果:受试制剂和参比制剂药 时曲线均符合一房室模型,t1/2分别为(2.1±0.3)和(2.2±0.4)h, tmax为(1.5±0.4)和(1.6±0.4)h, Cmax为(28.2±7.1)和(28.8±7.6)μg·L-1, AUC为(105.9±29.5) 和(106.5±26.4)μg·L-1·h,受试制剂的相对生物利用度为(99.4±5.3)%。结论:经统计学分析,两种国产片具有生物等效性。

薄层色谱-自显影技术分离检测石榴皮清除自由基活性成分

目的:采用薄层色谱分离和生物活性检测相结合的薄层色谱-自显影技术,对石榴皮提取物清除自由基活性成分进行研究。方法:以三元溶剂二甲苯∶乙酸乙酯∶乙酸=3∶5.5∶1.5为展开剂对石榴皮提取物进行展开分离,以二苯代苦味肼自由基(DPPH)为显色剂,喷洒于经展开后的TLC进行显色拍照。结果:石榴皮提取物在传统显色剂下分离到6个化合物,利用DPPH自由基显色,表明其中4个化合物具有较强的清除作用,且活性成分主要为鞣质类化合物。结论:薄层色谱-自显影技术是一种快速分离鉴定天然产物中清除自由基活性成分的实验方法。

薄层色谱自显影法分离检测海洋放线菌T-2-3中抑菌成分

目的:采用薄层色谱生物自显影方法对北极海洋放线菌T-2-3提取物的抑菌成分进行研究。方法采用大孔树脂对该放线菌活性成分进行富集,并针对活性成分进行薄层生物自显影检测。结果经检测,Rf 0.40的点为活性化合物。结论薄层色谱生物自显影法是一种快速分离检测抑菌成分的实验手段。

薄层色谱pH法测定人参三醇-3,6-二琥珀酸单酯的离解常数

目的 :用薄层色谱pH法测定人参三醇 3,6 二琥珀酸单酯双钠酸根共轭酸的离解常数。方法 :利用待测组分Rf值与固定相pH值的Rf pH曲线方程 ,测定了人参三醇 3,6 二琥珀酸的离解常数 ,并将此法用酒石酸验证。结果 :首次测得了人参三醇 3,6 二琥珀酸钠酸根共轭酸的离解常数 ,所测得的酒石酸离解常数与文献值一致。结论 :此方法方便简单 ,准确度较高 ,可用于纯度不高 ,量较少的药物。

薄层色谱扫描法测定清肾颗粒中蒽醌类衍生物的含量

目的建立同时测定清肾颗粒中蒽醌类衍生物的含量测定方法。方法采用薄层扫描法对清肾颗粒中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄素甲醚、大黄酚进行含量测定。展开剂为正己烷-乙酸乙酯-甲酸(30∶10∶0.5),扫描波长λS=435 nm,参比波长λR=650nm。结果芦荟大黄素的线性范围是0.023 6～0.118 1μg(r=0.998 13),平均回收率101.32%,RSD=2.44%(n=6);大黄酸的线性范围是0.060 0～0.300 0μg(r=0.998 61),平均回收率为101.31%,RSD=1.45%(n=6);大黄素的线性范围是0.045 0～0.225 0μg(r=0.998 41),平均回收率为100.82%,RSD=2.36%(n=6);大黄素甲醚线性范围是0.046 7～0.233 3μg(r=0.99681),平均回收率为100.87%,RSD=2.80%(n=6);大黄酚线性范围是0.032 5～0.162 5μg(r=0.997 56),平均回收率为105.35%,RSD=2.49%(n=6)。结论该方法简便、快捷、准确,可用于清肾颗粒中蒽醌类衍生物的含量测定。

黑果腺肋花楸果微乳系统薄层色谱分析及生物自显影抗氧化活性研究

建立了新食品原料黑果腺肋花楸果实中多种成分半定量测定方法,并测定其抗氧化能力及初步确定抗氧化活性成分。以质量分数75%含水量微乳-甲酸(体积比9∶1)为展开剂,采用高效薄层色谱法同时对黑果腺肋花楸果实中矢车菊素-3-O-葡萄糖苷、金丝桃苷和绿原酸进行含量测定,并采用DPPH自由基法和薄层生物自显影技术初步确定黑果腺肋花楸果中抗氧化活性成分。结果表明,方法学考察表明微乳系统薄层色谱分析方法良好;维生素C清除50%DPPH自由基质量浓度约为13.5μg/mL,黑果腺肋花楸质量浓度约为0.18 mg/mL;薄层生物自显影结果表明,黑果腺肋花楸果中矢车菊素-3-O-阿拉伯糖苷、矢车菊素-3-O-葡萄糖苷、金丝桃苷、绿原酸,新绿原酸均具抗氧化活性。该研究建立的高效薄层扫描方法重复性、稳定性好,可作为一个简单、快速的半定量方法,黑果腺肋花楸果中抗氧化活性的测定及成分指认可为后续研究奠定基础。

薄层色谱扫描法检测血浆中苯丙胺与3,4-亚甲基二氧基甲基苯丙胺

目的 建立血浆中苯丙胺 (AM)、3 ,4 亚甲基二氧基甲基苯丙胺 (MDMA)的薄层色谱扫描 (TLCS)定性定量检测方法。方法 样品经碱化 ,分别用乙酸乙酯与环己烷提取 ,薄层层析分离 ,薄层扫描定性和定量检测。结果 AM、MDMA扫描线性范围均为 0 2～ 15 μg/斑点 ,提取回收率分别为 (76 6± 3 1) %和 (78 4± 4 7) % ,最低检出限为 0 2 μg/斑点 (S/N≥ 3 )。

液相色谱-质谱/质谱联用法测定苯唑西林浓度及其胶囊剂人体生物等效性的研究

目的：建立液相色谱-质谱／质谱联用法（ LC-MS／MS）测定人血浆中苯唑西林的浓度，研究苯唑西林钠胶囊与参比制剂苯唑西林钠胶囊（奇菲）的生物等效性。方法：采用随机、单剂量、双交叉对照试验设计，20名男性健康志愿者空腹口服受试及参比制剂1000 mg，采用蛋白沉淀法处理血浆样品，使用LC-MS／MS法测定血浆中苯唑西林的浓度，并以DAS 2.0软件进行方差分析及双单侧t检验，判断2种制剂是否具有生物等效性。结果：口服受试及参比制剂后，血浆中苯唑西林峰浓度（Cmax）分别为（17.0±2.77）、（15.5±3.46）μg／ml；达峰时间（tmax）分别为（0.63±0.14）、（0.72±0.26）h；药时曲线下面积（AUC0～6 h）分别为（22.52±4.38）、（22.54±5.79）μg／（ml· h）；受试制剂的相对生物利用度为（102.8±19.3）％。结论：受试制剂与市售参比制剂具有生物等效性。

薄层色谱和荧光分析法测定黄连生物碱在高速逆流色谱溶剂体系中分配系数的方法

目的研究薄层色谱和荧光分析法测定黄连生物碱在高速逆流色谱溶剂体系中分配系数的方法。方法当黄连生物碱的样品在溶剂体系分配平衡之后,收集等量的上下相,使用坡层色谱法进行点板,展开等操作后使用荧光分光光度分析法对黄连生物碱的样品荧光值进行检测,计算黄连生物碱在高速逆流色谱溶剂体系中的分配系数。结果黄连碱的Rf值是0.74,分配系数是2.20;表小檗碱的Rf值是0.61,分配系数是1.60;小檗碱的Rf值是0.29,分配系数是0.83;巴马汀的Rf值是0.21,分配系数是0.83。结论使用薄层色谱和荧光分析法对黄连生物碱在高速逆流色谱溶剂体系中分配系数进行测定具有检测时间短、准确度高、应用范围比较广的诸多优点,值得推广使用。

薄层色谱-气相色谱法测定人肝癌细胞BEL-7404中芥酸甲酯的含量及意义

目的探讨测定人肝癌细胞BEL-7404内芥酸甲酯浓度的方法。方法采用薄层色谱一气相色谱法测定空白细胞裂解液、加药细胞裂解液、加药细胞培养液内芥酸钾酯浓度，并确定芥酸甲酯浓度和峰面积之间的关系。结果芥酸甲酯50-5000μg/ml具有良好的峰面积-浓度线性关系（r=0．99995）；芥酸甲酯微乳液进人到人肝癌细胞BEL-7404内的量为24．9％。结论薄层色谱-气相色谱法能够准确测定药物进人细胞的浓度。其操作简单快速、干扰小。

同位素内标-超高效液相色谱-串联质谱法检测花生及其制品中黄曲霉毒素B_(1)及其生物可给性研究

目的建立一种基于同位素内标的超高效液相色谱-串联质谱法(ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS)定量分析花生及其制品中的黄曲霉毒素B_(1) (aflatoxin B_(1),AFB_(1)),并研究其在胃、肠两个阶段的生物可给性。方法样品经乙腈-水-乙酸(84:15:1,V:V:V)提取,高速冷冻离心净化后,以0.1%甲酸溶液与甲醇为流动相,经Waters Acquity BEH C_(18)柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm)分离,内标法定量。通过体外模拟消化实验,研究样品中AFB_(1)在胃、肠两个阶段的生物可给性。结果 AFB_(1)在0.01~30.00μg/L范围内线性关系良好,相关系数(r^(2))为0.9998,花生、花生油、花生酱、花生奶中AFB_(1)的检出限为0.07~0.36μg/kg、定量限为0.24~1.20μg/kg,3种加标水平的平均回收率为80.3%~103.4%、相对标准偏差均小于5.8%;市售样品中,花生相对于其制品的AFB1污染更严重,2份超过国家限量标准(20μg/kg);花生类食品中AFB_(1)在胃相中的生物可给性为4.35%~33.88%、在胃肠相中为12.81%~79.78%。结论本研究所建立的检测方法简单快速、精密度高、准确性好,可以满足对花生类食品中AFB_(1)的快速准确分析的要求,体外模拟消化表明不同花生类食品中AFB_(1)生物可给性存在较大差异。

QuEChERS-超高效液相色谱-质谱联用法测定酱卤肉中5种罂粟壳生物碱

目的:建立QuEChERS-超高效液相色谱-质谱联用法,测定酱卤肉中的吗啡、可待因、蒂巴因、罂粟碱、那可丁5种生物碱含量。方法酱卤肉经QuEChERS法处理后,选择Waters Atlantis HILIC色谱柱,以10mmol/L甲酸铵溶液(含0.1%甲酸)和乙腈(含0.1%甲酸)作为流动相,以多反应监测(MRM)扫描模式检测,吗啡和可待因以内标法定量,蒂巴因、罂粟碱、那可丁以外标法定量。结果:吗啡和可待因的线性范围为1.0~100ng/mL,罂粟碱、蒂巴因和那可丁的线性范围为0.2~20ng/mL。5种生物碱的平均回收率为69.2%~113.8%,相对标准偏差(RSD)为1.0%~7.8%。结论:该方法准确、快速、简单,适用于酱卤肉中罂粟壳生物碱的检测。

远志薄层色谱鉴别及生物自显影色谱筛选研究

目的通过远志薄层色谱及生物自显影色谱分析,为远志质量评价及对抑制乙酰胆碱酯酶活性成分筛选提供支持。方法采用薄层色谱法分离和自显影活性测定技术,对不同来源远志进行多成分分离及抑制乙酰胆碱酯酶活性分析。结果远志药材可见十二个薄层色谱主斑点,远志汕酮Ⅲ、3,6’-二芥子酰基蔗糖、远志糖苷A可用于远志药材鉴别;细叶远志皂苷、远志皂苷元可用于远志药材质量评价。利用生物自显影色谱斑点初步筛选出1个活性成分。结论远志薄层色谱鉴别方法简便易行,特征性强,可以用于不同远志药材鉴别以及评价药材质量优劣;薄层生物自显影色谱适用于远志乙酰胆碱酯酶抑制成分的筛选。

液相色谱-质谱联用法测定罂粟壳中5种生物碱的含量

目的:建立一种液相色谱-质谱联用法,测定罂粟壳中吗啡、可待因、罂粟碱、蒂巴因、那可丁5种生物碱的含量。方法:采用液相色谱/质谱联用仪(三重串联四级杆质谱),色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(规格为2.1×100mm,5μm),以乙腈-0.1%甲酸水(7:3)为流动相,流速0.4mL/min,柱温40℃。结果:5种生物碱在此条件下分离效果良好,吗啡、可待因在25~250ng/mL范围内,罂粟碱、蒂巴因、那可汀在5~50ng/mL范围内与其峰面积呈良好线性关系,相关系数r分别为0.99597、0.99686、0.99998、0.99905、0.99762。定量限(Limit of Quantitation, LOQ)分别为2.4×10-2mg/kg、2.4×10-2mg/kg、6×10-4mg/kg、6×10-4mg/kg、6×10-4mg/kg。回收率、重复性、稳定性均良好。结论:建立了一种液相色谱-质谱联用法,测定罂粟壳中吗啡、可待因、罂粟碱、蒂巴因、那可丁5种生物碱的含量,该方法高效快捷,分离效果好,定量准确稳定,为加强罂粟壳药材的质量监管提供技术支撑。

高效液相色谱法分析湖北贝母花中生物碱成分

目的:研究湖北贝母花与鳞茎生物碱成分的区别。方法:根据本实验室建立的湖北贝母指纹图谱,采用高效液相色谱-蒸发光散射检测法,以Hypersil ODS(250mm×4.6mm,5μm)为色谱柱,流动相甲醇(含0.05%三乙胺)-水梯度洗脱,流速为1.0mL.min-1,记录时间60min;以蒸发光散射检测器(ELSD)检测,检测条件漂移管温度75℃,氮气流速1.9L.min-1。结果:湖北贝母花中的生物碱成分得到很好的分离。结论:与湖北贝母指纹图谱对比,并与薄层色谱对照,湖北贝母花与鳞茎部位生物碱成分大体一致,花中浙贝甲素含量较鳞茎高而湖贝甲素含量较鳞茎低,花中湖贝甲素苷的含量很低。